Động vật
Các thí nghiệm được tiến hành theo Hướng dẫn của Viện Y tế Quốc gia về Chăm sóc và Sử dụng Động vật trong Phòng thí nghiệm. Các quy trình đã được phê duyệt bởi Ủy ban Đạo đức Động vật Địa phương (Ủy ban Charles Darwin số 5, số đăng ký 9529 và 26889) và được thực hiện theo Chỉ thị 2010/63/EU của Nghị viện Châu Âu. Chuột đực Long-Evans trong độ tuổi từ 2 đến 12 tháng và chuột đực WT (C57BL/6J) 9 tuần tuổi được lấy từ Phòng thí nghiệm Janvier; Chuột chuyển gen đực P23H (dòng 1) (9–22 tháng) được nuôi tại địa phương.
Nhân bản plasmid và sản xuất AAV
Các plasmid chứa E. coli mscL trình tự ở dạng WT và có đột biến G22S thu được từ Francesco Difato (Addgene plasmid #107454 và #107455)28. Để nhắm mục tiêu các RGC, trình khởi động SNCG31 đã được đưa vào một plasmid xương sống AAV có chứa mscL trình tự hợp nhất với gen tdTomato và tín hiệu xuất Kir2.1 ER, để điều khiển biểu hiện ở màng sinh chất. Một vectơ AAV2.7m8 đã được sử dụng để phân phối trong dịch kính. Để nhắm mục tiêu các tế bào thần kinh trong các lớp vỏ não V1, bộ khởi động SNCG đã được thay thế bằng bộ khởi động CamKII và một vectơ AAV9.7m8 đã được chọn. Các AAV tái tổ hợp được tạo ra bằng phương pháp đồng biến plasmid và các dung dịch ly giải thu được được tinh chế bằng tinh chế iodixanol31.
gói kích thích của Mỹ
Ba đầu dò tập trung của Hoa Kỳ với các tần số trung tâm khác nhau đã được sử dụng: 0.50 MHz (đường kính, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; tiêu cự, f = 1.25″ = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) và 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), tương ứng với khẩu độ số của F/Ø = 1.25 và 2.00. Các trường âm thanh phát ra từ ba bộ chuyển đổi hội tụ đó được trình bày trong Hình. 1 (mô phỏng) và Dữ liệu mở rộng Hình. 3 (đo thực nghiệm). Một kính cầm tay TiePie (HS5, TiePie Engineering) đã được sử dụng để tạo ra dạng sóng kích thích, sau đó được truyền qua bộ khuếch đại công suất RF 80 dB (VBA 230-80, Vectawave) được kết nối với đầu dò. Đầu ra áp suất đầu dò (áp suất tại tiêu điểm, bản đồ áp suất ba chiều (3D)) được đo trong bể chứa nước đã khử khí bằng giao thoa kế dị vòng Royer–Dieulesaint47. Các kích thích của Hoa Kỳ được sử dụng cho kích thích ex vivo và in vivo có các đặc điểm sau: tần số lặp lại xung 1 kHz với chu kỳ nhiệm vụ 50%, thời lượng siêu âm trong khoảng từ 10 đến 200 ms và khoảng thời gian giữa các kích thích từ 0.01 đến 2.00 giây. Áp suất âm thanh cực đại nằm trong khoảng từ 0.11 đến 0.88 MPa, 0.30 đến 1.60 MPa và 0.20 đến 1.27 MPa đối với các đầu dò 0.50, 2.25 và 15.00 MHz tương ứng. Các giá trị cường độ trung bình xung đỉnh không gian ước tính tương ứng (Isppa) là 0.39–25.14, 2.92–83.12 và 1.30–52.37 W cm-2.
Cung cấp gen nội thủy tinh và hình ảnh võng mạc
Chuột đã được gây mê48 và huyền phù AAV (2 µl), chứa từ 8 đến 14 × 1010 các hạt virus, được tiêm vào trung tâm của khoang thủy tinh thể. Một tháng sau, hình ảnh huỳnh quang tdTomato được thực hiện trên mắt được tiêm, với kính hiển vi hình ảnh võng mạc MICRON IV (Phòng thí nghiệm nghiên cứu Phoenix) và Micron Discover v.2.2.
Bản ghi MEA
Các mảnh võng mạc được làm phẳng trên màng lọc (Whatman, GE Healthcare Life Science) và đặt trên MEA (đường kính điện cực, 30 µm; khoảng cách, 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, Hệ thống đa kênh) được phủ bằng poly-l-lysine (0.1%, Sigma), với các RGC đối diện với các điện cực31. Chất đối kháng thụ thể glutamate AMPA/kainate 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), chất đối kháng thụ thể NMDA glutamate [3H]3-(2-carboxypiperazin-4-yl) propyl -1-axit phosphonic (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) và một chất chủ vận thụ thể glutamate metabotropic nhóm III chọn lọc, l-(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), được tắm qua đường truyền dịch. Các kích thích ánh sáng được phân phối với màn hình vi gương kỹ thuật số (Vialux; độ phân giải, 1,024 × 768) kết hợp với nguồn sáng đi-ốt phát sáng màu trắng (MNWHL4, Thorlabs) tập trung vào mặt phẳng của bộ cảm quang (bức xạ, 1 µW cm-2). Các đầu dò của Hoa Kỳ được kết hợp với một hình nón khớp nối tùy chỉnh chứa đầy nước đã khử khí và được gắn trên một giá đỡ có động cơ (PT3/M-Z8, Thorlabs) được đặt trực giao phía trên võng mạc. Tín hiệu phản xạ của chip MEA và võng mạc được phát hiện bằng thiết bị khóa của Hoa Kỳ (Lecoeur Electronique). Khoảng cách giữa võng mạc và đầu dò bằng tiêu cự của đầu dò; điều này đã được xác minh với thời gian bay của tín hiệu phản xạ. Từ các bản ghi RGC với bộ tiền khuếch đại 252 kênh và MC_Rack v. 4.6.2 (Hệ thống đa kênh), các xung đột biến được sắp xếp bằng phần mềm Spyking CIRCUS 0.549. Các phản hồi của RGC được phân tích với các tập lệnh tùy chỉnh được viết bằng MATLAB (MathWorks 2018b) để phân loại thành BẬT, BẬT–TẮT hoặc TẮT, với chỉ số thống trị phản hồi50. Độ trễ được tính là thời gian giữa thời điểm bắt đầu kích thích và giá trị cực đại của đạo hàm của hàm mật độ tăng đột biến (SDF). Hai loại tế bào phản hồi ở Hoa Kỳ đã được xác định trên cơ sở độ trễ—SL và LL—bằng cách cố định một ngưỡng bằng với mức tối thiểu của phân phối độ trễ của các phản hồi của các tế bào NT đối với Hoa Kỳ (45 mili giây). Chúng tôi xác định giá trị đỉnh A của SDF để tính toán thời lượng phản hồi, được định nghĩa là khoảng thời gian giữa hai điểm thời gian mà SDF bằng A/e (Ở đâu A là cực đại khử cực và e là số Euler). Yếu tố Fano, định lượng độ biến thiên của số lần tăng đột biến, được tính bằng tỷ lệ giữa phương sai của số lần tăng đột biến với giá trị trung bình. Khoảng cách Euclide giữa hai ô được kích hoạt được tính trọng số theo tốc độ bắn tối đa của các ô. Tỷ lệ giữa số lượng ô được kích hoạt với kích thước của khu vực được kích thích trên chip MEA được tính khi xem xét kích thước của tiêu điểm Hoa Kỳ cho 2.25 và 15.00 MHz và kích thước của MEA cho 0.50 MHz, vì tiêu điểm lớn hơn hơn MEA cho tần số này. Trung tâm của phản hồi được ước tính bằng cách tính trọng số tốc độ bắn tối đa của từng ô theo khoảng cách của nó với các ô phản hồi khác và độ dịch chuyển của phản hồi được tính bằng khoảng cách Euclide giữa hai vị trí trung tâm phản hồi.
tiêm nội sọ
Huyền phù AAV được tiêm vào bán cầu não phải tại hai vị trí khác nhau ở chuột (2.6 mm ML, 6.8 mm AP và 3.1 mm ML, 7.2 mm AP từ bregma) hoặc tại một vị trí ở chuột (2.5 mm ML, 3.5 mm AP từ bregma)48. Để tiêm cho chuột, hỗn dịch (200 nl chứa 0.2–8.0 × 1015 các hạt virus) đã được tiêm ở ba độ sâu khác nhau (1,100, 1,350 và 1,500 µm từ bề mặt vỏ não) bằng bộ điều khiển bơm microsyringe (Micro4, World Precision Cụ) hoạt động với tốc độ 50 nl phút-1 và ống tiêm Hamilton 10 µl. Ở chuột, huyền phù AAV (1 µl chứa 0.2–8.0 × 1015 các hạt virus) được tiêm vào 400 µm từ bề mặt vỏ não với tốc độ 100 nl min-1.
Bản ghi ngoại bào in vivo
Một tháng sau khi tiêm AAV, một vết rạch sọ nhỏ (5 × 5 mm2) được thực hiện trên V1 ở bán cầu não phải48. Huỳnh quang tdTomato đã được kiểm tra bằng kính hiển vi hình ảnh võng mạc MICRON IV và Micron Discover v. 2.2 (Phòng thí nghiệm nghiên cứu Phoenix). Một dãy điện cực 32 vị trí µEcog (đường kính điện cực, 30 µm; khoảng cách giữa các điện cực, 300 µm; FlexMEA36, Hệ thống đa kênh) được định vị trên vùng được truyền nhiễm hoặc trong vùng tương tự dành cho chuột điều khiển. Các bản ghi MEA được thực hiện với một vi đầu dò silicon 16 vị trí nghiêng 45° so với bề mặt não (đường kính điện cực, 30 µm; khoảng cách, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, Công nghệ NeuroNexus) và MC_Rack v. 4.6.2. MEA đã được nâng cao 1,100 µm vào vỏ não bằng bộ vi điều khiển ba trục (Dụng cụ Sutter). Các đầu dò của Hoa Kỳ được ghép nối với não bằng một hình nón ghép nối tùy chỉnh chứa đầy nước đã khử khí và gel của Hoa Kỳ trên một bệ đỡ có động cơ. Khoảng cách giữa vỏ não và đầu dò bằng tiêu cự của đầu dò. Các kích thích thị giác được tạo ra bởi một đi-ốt phát quang chuẩn trực ánh sáng trắng (MNWHL4, Thorlabs) đặt cách mắt 15 cm (4.5 mW cm-2 ở giác mạc). Các bản ghi được số hóa với bộ khuếch đại 32 kênh và 16 kênh (model ME32/16-FAI-μPA, Hệ thống đa kênh). Các bản ghi µEcog được phân tích với các tập lệnh MATLAB được phát triển tùy chỉnh và các bản ghi MEA được phân tích bằng phần mềm Spyking CIRCUS và các tập lệnh MATLAB được phát triển tùy chỉnh. Thời lượng phản hồi được tính là khoảng thời gian giữa hai thời điểm tại đó tiềm năng gợi lên vỏ não bằng A/e. Vùng kích hoạt được xác định là vùng của bản đồ kích hoạt giả màu mà quá trình khử cực cực đại vượt quá mức nhiễu nền được tính là 2 × sd của tín hiệu. Trung tâm phản hồi được ước tính bằng cách tính trọng số khử cực cực đại của từng điện cực theo khoảng cách của nó với các điện cực khác. Độ dịch chuyển tương đối của nó khi di chuyển đầu dò US được tính bằng khoảng cách Euclide của hai vị trí. Đối với các bản ghi trong vỏ não, độ trễ của tế bào được ước tính là thời gian giữa thời điểm bắt đầu kích thích và mức tối đa của đạo hàm SDF.
Phẫu thuật để thử nghiệm hành vi in vivo
Chuột C57BL6J được tiêm dưới da buprenorphine (0.05 mg/kg-1) (Buprécare, Axience), và dexamethasone (0.7 mg kg-1) (Dexazone, Virbac). Động vật được gây mê bằng isoflurane (5% cảm ứng và 2% duy trì, trong hỗn hợp không khí/oxy) và đầu được cạo và làm sạch bằng dung dịch sát trùng. Động vật được cố định đầu trên một khung lập thể với hệ thống phân phối isoflurane và thuốc mỡ tra mắt, đồng thời đắp một miếng khăn giấy màu đen lên mắt. Nhiệt độ cơ thể được duy trì ở mức 37 ° C. Sau khi tiêm tại chỗ lidocaïne (4 mg/kg-1) (Laocaïne, Centravet), một vết rạch trên da. Hai ốc vít được cố định trong hộp sọ, sau khi mở hộp sọ nhỏ (khoảng 5.0 x 5.0 mm)2) đã được thực hiện trên V1 ở bán cầu não phải (khoan thép 0.5 mm) và bộ đệm vỏ não đã được áp dụng. Vỏ não được phủ một tấm nhựa TPX (dày 125 µm) và được hàn kín bằng xi măng acrylic nha khoa (Tetric Evoflow). Đối với các thí nghiệm về hành vi, một thanh chắn đầu bằng kim loại (PhenoSys) để cố định đầu sau đó được dán vào hộp sọ ở bán cầu não trái bằng xi măng nha khoa (FujiCEM 2). Động vật được đặt trong buồng hồi sức, tiêm dưới da huyết thanh sinh lý và thuốc mỡ trên mắt (Ophtalon, Centravet). Buprenorphine được tiêm trong quá trình theo dõi sau phẫu thuật.
Kiểm tra hành vi của chuột
Chuột được đưa vào lịch trình hạn chế nước cho đến khi chúng đạt khoảng 80–85% trọng lượng. Sau khi làm quen với các điều kiện thử nghiệm36, những con chuột được huấn luyện để phản ứng với LS bằng cách thực hiện một nhiệm vụ phát hiện tự nguyện: liếm vòi nước (kim cùn cỡ 18 thước, cách miệng khoảng 5 mm) để phản ứng với kích thích toàn trường ánh sáng trắng (dài 200 và 50 ms) của mắt trái (làm giãn bằng thuốc nhiệt đới, Mydriaticum Dispersa) qua 35 thử nghiệm cho mỗi thời gian kích thích và do đó 70 thử nghiệm mỗi ngày. Nước (~4 μl) được tự động phân phối 500 ms sau khi bật đèn, thông qua hệ thống nước đã hiệu chuẩn. Giao thức hành vi và phát hiện liếm được kiểm soát bởi một hệ thống tùy chỉnh36. Bốn ngày tiếp theo (hai ngày nghỉ vào cuối tuần), các kích thích của Hoa Kỳ được phân phối trên V1 trong 50 mili giây ở ba giá trị áp suất khác nhau (0.2, 0.7 và 1.2 MPa). Các giá trị áp suất này được phân phối theo thứ tự khác nhau mỗi ngày (35 thử nghiệm mỗi lần). Khoảng thời gian giữa các lần thay đổi ngẫu nhiên và nằm trong khoảng từ 10 đến 30 giây. Đầu dò US 15 MHz được ghép nối với não bằng một hình nón ghép nối tùy chỉnh chứa đầy nước và gel US. Tỷ lệ thành công được tính bằng cách đếm số lần thử nghiệm trong đó chuột thực hiện các động tác liếm trước (từ khi bắt đầu kích thích đến khi mở van nước). Tỷ lệ liếm dự đoán (Hình. 6e) cho phiên được tính bằng cách trừ đi tốc độ liếm dự đoán của một thử nghiệm, tốc độ liếm tự phát (được tính trên tất cả các cửa sổ thời gian 1 giây trước mỗi lần kích thích riêng lẻ bắt đầu (Hình. 6a) cho tất cả các thử nghiệm) và nhân với tỷ lệ thành công. Độ trễ liếm được tính bằng cách xác định thời gian đến lần liếm dự đoán đầu tiên sau khi bắt đầu kích thích. Những con chuột được giữ lại để phân tích có tỷ lệ thành công vượt trội hoặc bằng 60% vào ngày thứ tư sau LS. Sau đó, các phiên ánh sáng hoặc Hoa Kỳ thể hiện hành vi liếm bắt buộc đã bị loại trừ dựa trên nhận dạng ngoại lệ được thực hiện bằng phương pháp ROUT (Q = 1%) trên tốc độ liếm tự phát của phiên lấy trung bình các phép đo trên tất cả các thử nghiệm của phiên trong cửa sổ thời gian 1 giây trước khi bắt đầu thử nghiệm kích thích.
Hóa mô miễn dịch và hình ảnh đồng tiêu
Các mẫu được ủ qua đêm ở 4°C với kháng thể đơn dòng kháng RBPMS (1:500, thỏ; ABN1362, Merck Millipore) cho võng mạc31, với kháng thể đơn dòng kháng NeuN (1:500, chuột, bản sao A60; MAB377, Merck Millipore) cho các phần não48. Các phần này sau đó được ủ với các kháng thể thứ cấp được kết hợp với Alexa Fluor 488 (1:500, IgG 488 kháng chuột và lừa kháng thỏ, đa dòng; A-21202 và A-21206, Invitrogen, tương ứng) và DAPI (1:1,000 ; D9542, Merck Millipore) trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. Kính hiển vi đồng tiêu Olympus FV1000 với vật kính ×20 (UPLSAPO 20XO với khẩu độ số 0.85) đã được sử dụng để thu được hình ảnh của võng mạc và phần não được gắn phẳng (phần mềm FV10-ASW v. 4.2).
Trên các hình ảnh đồng tiêu được xử lý bằng Fiji (ImageJ v. 1.53q), các tế bào dương tính với RBPMS và NeuN được tự động đếm bằng plugin 'phân tích hạt'. Các ô được đếm thủ công bởi hai người dùng khác nhau, với plugin 'bộ đếm ô'. Định lượng được thực hiện bằng cách lấy các ngăn xếp đồng tâm trong ít nhất bốn vùng được chọn ngẫu nhiên là 0.4 mm2 (Dữ liệu mở rộng Hình. 1). Đối với các tế bào thần kinh V1, lát cắt não sagittal có vùng huỳnh quang tdTomato lớn nhất đã được chọn cho mỗi con vật. Một vùng quan tâm được xác định thủ công trong V1 và các phép định lượng được thực hiện ở ít nhất sáu vùng được chọn ngẫu nhiên là 0.4 mm2.
Mô phỏng làm nóng mô do Hoa Kỳ gây ra
Một quy trình gồm ba bước được sử dụng để ước tính các hiệu ứng nhiệt: (1) mô phỏng trường âm thanh do ba bộ chuyển đổi tạo ra, với các thông số âm thanh thực tế; (2) xác minh rằng âm học phi tuyến không đóng vai trò quan trọng trong quá trình truyền nhiệt; và (3) mô phỏng thực tế về truyền nhiệt và tăng nhiệt độ do Hoa Kỳ gây ra tại tiêu điểm theo chế độ tuyến tính cho các tham số được sử dụng trong nghiên cứu này.
Đối với các mô phỏng phi tuyến tính, chúng tôi đã sử dụng hộp công cụ k-Wave của MATLAB bằng cách xác định hình dạng của đầu dò theo ba chiều và sử dụng các tham số sau cho môi trường lan truyền (nước): tốc độ âm thanh, c = 1,500 m·s-1; khối lượng thể tích, ρ = 1,000 kg·m-3; hệ số phi tuyến tính, B/A = 5; hệ số suy giảm, α = 2.2 × 10-3 dBcm-1 MHz–y; định luật công suất tần số của hệ số suy giảm, y = 2 (tham khảo 51). Chúng tôi đã mô phỏng các trường sóng 3D gần như đơn sắc bằng cách sử dụng các đợt dài 50 chu kỳ; điều này cho chúng tôi trường áp suất tối đa trong không gian ba chiều cũng như dạng sóng tại tiêu điểm. Mô phỏng được hiệu chỉnh bằng cách điều chỉnh áp suất đầu vào (kích thích của đầu dò mô phỏng) để đạt được áp suất tại tiêu điểm được đo trong bể nước bằng đầu dò thực. Đường kính tiêu điểm toàn chiều rộng ở mức tối đa một nửa (FWHM) trong x–y mặt phẳng là 4.360, 1.610 và 0.276 mm, và chiều dài của trục chính trong x–z mặt phẳng lần lượt là 32.3, 20.6 và 3.75 mm đối với các đầu dò 0.50, 2.25 và 15.00 MHz (Hình. 1b–d). Các hiệu ứng phi tuyến tính được đánh giá bằng cách ước tính hàm lượng sóng hài tương đối của dạng sóng tại tiêu điểm. Trong ví dụ về bộ chuyển đổi tiêu cự 15 MHz trong Hình. 1d, các tín hiệu thử nghiệm và mô phỏng tại tiêu điểm được so sánh và thấy là rất phù hợp (Dữ liệu mở rộng Hình. 4a). Hơn nữa, biên độ của sóng hài thứ hai thấp hơn 19.8 dB so với năng lượng cơ bản (20.9 dB trong trường hợp mô phỏng), nghĩa là nếu năng lượng cơ bản là E, sóng hài thứ hai có năng lượng E/95 (Dữ liệu mở rộng Hình. 4b). Do đó, chúng ta có thể bỏ qua một cách hợp lý các hiệu ứng phi tuyến tính trong tính toán các hiệu ứng nhiệt, vì chúng chiếm ~1% năng lượng liên quan. Các kết luận tương tự đã được rút ra ở 0.5 MHz và 15.0 MHz. Các xấp xỉ truyền sóng tuyến tính làm giảm đáng kể chi phí tính toán của các mô phỏng. Mô phỏng lan truyền tuyến tính được thực hiện với hộp công cụ Field II trong MATLAB52,53, ở chế độ đơn sắc, có cùng đặc tính trung bình như k-Wave (nước), để thu được trường áp suất 3D cực đại. Các trường áp suất cực đại này được sử dụng để xây dựng thuật ngữ nguồn sưởi ấm (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Nơi αnp là hệ số hấp thụ của não ở tần số đang xét (59.04 Np·m-1 ở 15 MHz, được tính từ αnão = 0.21dBcm-1 MHz–y và y = 1.18), khối lượng thể tích não ρnão = 1,046 kg·m–3, tốc độ âm thanh của não cnão = 154 giây-1 và ptối đa là trường áp suất cực đại 3D. Thuật ngữ nguồn này sau đó đã được sử dụng để giải phương trình nhiệt sinh học của Penne (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}left( {K_mathrm{t}timesnabla T} phải) – rho _{ mathrm{máu}}C_{mathrm{máu}}P_{mathrm{máu}}trái( {T – T_mathrm{a}} phải) + Q) trong k-Wave, nơi Cnão là nhiệt dung riêng của máu (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt là độ dẫn nhiệt của não (0.51 W·m-1 ° C-1), ρmáu là tỷ trọng của máu (1,050 kg m-3), Cmáu là nhiệt dung riêng của máu (3,617 J kg-1 ° C-1), Pmáu là hệ số tưới máu (9.7 × 10-3 s-1), Ta là nhiệt độ động mạch (37 ° C), Q = QUS + ρnãoγnão và γnão là sự sinh nhiệt của mô não (11.37 W kg-1) (tham khảo 54,55). Điều kiện ban đầu cho nhiệt độ não được đặt thành T0 = 37°C.
Mô phỏng này tương ứng với trường hợp xấu nhất liên quan đến sự gia tăng nhiệt độ nhất định. (1) Sự lan truyền âm thanh chỉ được mô phỏng trong nước (giá trị không suy giảm), với hệ số suy giảm thấp hơn (2.2 × 10-3 dBcm MHz-2.00) so với não (0.59 dB cm MHz-1.27), ngay cả khi một phần của quá trình lan truyền xảy ra trong não. Các ptối đa bản đồ, do đó, được đánh giá quá cao. (2) Sự hấp thụ nhiệt chỉ được mô phỏng trong mô não, với hệ số hấp thụ cao hơn (0.21 dB cm MHz-1.18) so với nước, ngay cả khi một phần của trường áp suất cực đại thực sự nằm trong nước của hình nón khớp nối âm thanh. Vì thế, QUS được đánh giá quá cao một chút. Chúng tôi đã lập bản đồ nhiệt độ theo ba chiều không gian và thời gian, đồng thời tìm kiếm điểm tăng nhiệt độ tối đa (Dữ liệu mở rộng Hình. 4c–f).
Phân tích thống kê
Phân tích thống kê được thực hiện với phần mềm Prism (Prism 9, GraphPad). Các giá trị được thể hiện và biểu diễn dưới dạng giá trị trung bình ± sai số chuẩn của giá trị trung bình (sem) trên các số liệu và trong văn bản, trừ khi có quy định khác. Dữ liệu được phân tích trong Welch's chưa ghép đôi t-tests (hai đuôi) hoặc bội số không ghép đôi t-kiểm tra với hiệu chỉnh Sidak–Bonferroni để so sánh nhiều lần. Các bài kiểm tra thống kê được cung cấp trong chú thích hình.
Tóm tắt báo cáo
Thông tin thêm về thiết kế nghiên cứu có sẵn trong Tóm tắt báo cáo danh mục đầu tư tự nhiên liên kết đến bài viết này.
- Phân phối nội dung và PR được hỗ trợ bởi SEO. Được khuếch đại ngay hôm nay.
- Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. Khuếch đại kiến thức. Truy cập Tại đây.
- nguồn: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :là
- ][P
- $ LÊN
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- ở trên
- học tập
- truy cập
- Theo
- Tài khoản
- có được
- có được
- kích hoạt
- hoạt động
- thực sự
- tiên tiến
- Sau
- tuổi
- Hiệp định
- AL
- Alexa
- Tất cả
- cho phép
- phân tích
- Neo
- và
- động vật
- động vật
- Kháng thể
- áp dụng
- phê duyệt
- khoảng
- LÀ
- KHU VỰC
- Mảng
- bài viết
- AS
- thẩm định, lượng định, đánh giá
- At
- Tháng Tám
- tự động
- có sẵn
- Trung bình cộng
- trung bình
- Trục
- Xương sống
- dựa
- cơ sở
- BE
- bởi vì
- trước
- phía dưới
- giữa
- Đen
- máu
- thân hình
- Brain
- Nghỉ giải lao
- đệm
- xây dựng
- by
- tính
- CAN
- Sức chứa
- mà
- trường hợp
- Tế bào
- trung tâm
- trung tâm
- phòng
- Kênh
- đặc điểm
- Charles
- Chip
- lựa chọn
- các lớp học
- phân loại
- Nhấp chuột
- ủy ban
- so
- toàn diện
- máy tính
- điều kiện
- thực hiện
- độ dẫn
- kết nối
- xem xét
- xem xét
- nội dung
- điều khiển
- kiểm soát
- điều khiển
- Tương ứng
- tương ứng
- Phí Tổn
- kết
- phủ
- khách hàng
- chu kỳ
- chu kỳ
- dữ liệu
- Cơ sở dữ liệu
- ngày
- Ngày
- xác định
- xác định
- giao
- giao hàng
- mật độ
- Độ sâu
- Thiết kế
- phát hiện
- Phát hiện
- xác định
- xác định
- Phát triển
- thiết bị
- ĐÃ LÀM
- khác nhau
- kỹ thuật số
- số hóa
- kích thước
- khám phá
- Giao diện
- khoảng cách
- phân phối
- Sự thống trị
- rút ra
- lái xe
- suốt trong
- e
- mỗi
- hiệu ứng
- năng lượng
- Kỹ Sư
- nâng cao
- lôi
- ước tính
- Ether (ETH)
- đạo đức
- Châu Âu
- Nghị viện châu Âu
- đánh giá
- Ngay cả
- ví dụ
- kích thích
- loại trừ
- kinh nghiệm
- xuất khẩu
- bày tỏ
- mắt
- Mắt
- phải đối mặt với
- lĩnh vực
- Lĩnh vực
- Sung
- Hình
- Số liệu
- đầy
- lọc
- bắn
- Tên
- cố định
- chuyến bay
- Tập trung
- tập trung
- tiếp theo
- Trong
- hình thức
- tìm thấy
- Thứ tư
- FRAME
- tần số
- từ
- chức năng
- chức năng
- cơ bản
- Hơn nữa
- ge
- GE Healthcare
- tạo ra
- thế hệ
- hình học
- được
- Mặt đất
- Nhóm
- hướng dẫn
- Hamilton
- cái đầu
- cho sức khoẻ
- chăm sóc sức khỏe
- cao hơn
- cao
- HTTPS
- Nhân loại
- i
- Xác định
- xác định
- IEEE
- hình ảnh
- Hình ảnh
- quan trọng
- in
- ủ
- hệ thống riêng biệt,
- thông tin
- ban đầu
- đầu vào
- cụ
- quan tâm
- tham gia
- ITS
- Key
- phòng thí nghiệm
- lớn hơn
- lớn nhất
- Độ trễ
- Luật
- lớp
- Legends
- Chiều dài
- Cấp
- sự thua
- Cuộc sống
- Khoa học đời sống
- ánh sáng
- Dòng
- LINK
- liên kết
- địa phương
- tại địa phương
- nằm
- địa điểm thư viện nào
- . Các địa điểm
- dài
- nhìn
- thực hiện
- bảo trì
- chính
- thủ công
- bản đồ
- Maps
- Thánh Lễ
- vật liệu
- tối đa
- MEA
- có nghĩa là
- đo
- cơ khí
- trung bình
- Merck
- phương pháp
- chuột
- micron
- Kính hiển vi
- tối thiểu
- hỗn hợp
- ML
- Chế độ
- kiểu mẫu
- MOL
- giám sát
- tháng
- tháng
- miệng
- di chuyển
- MS
- nhiều
- Đột biến
- quốc dân
- Viện Y tế Quốc Gia
- Thiên nhiên
- mạng
- mạng
- Neurons
- Mới
- tiếp theo
- con số
- Mục tiêu
- được
- thu được
- of
- olympus
- on
- ONE
- mở
- hoạt động
- gọi món
- Nền tảng khác
- nếu không thì
- qua đêm
- thông số
- Quốc hội
- một phần
- thông qua
- Đỉnh
- biểu diễn
- phượng hoàng
- vật lý
- miếng
- Plasma
- nhựa
- plato
- Thông tin dữ liệu Plato
- PlatoDữ liệu
- Play
- Plugin
- Điểm
- điểm
- danh mục đầu tư
- định vị
- vị trí
- tiềm năng
- quyền lực
- Độ chính xác
- trình bày
- nhấn
- áp lực
- quá trình
- sản xuất
- Sản xuất
- chương trình
- tài sản
- giao thức
- giao thức
- cung cấp
- xung
- máy bơm
- Rabbit
- nâng lên
- CON CHUỘT
- Tỷ lệ
- tỉ lệ
- đạt
- đạt
- thực
- thực tế
- phục hồi
- phản ánh
- về
- chế độ
- khu
- vùng
- Đăng Ký
- thay thế
- Báo cáo
- đại diện
- nghiên cứu
- phòng thí nghiệm nghiên cứu
- Độ phân giải
- tương ứng
- Trả lời
- đáp ứng
- phản ứng
- REST của
- phục hồi
- khôi phục lại
- sự hạn chế
- kết quả
- Võng mạc
- Tăng lên
- Vai trò
- Phòng
- sự ồn ào
- s
- tương tự
- kịch bản
- lịch trình
- SCI
- Khoa học
- KHOA HỌC
- kịch bản
- Thứ hai
- trung học
- phần
- chọn
- chọn lọc
- Độ nhạy
- cảm biến
- Trình tự
- huyết thanh
- Phiên
- phiên
- định
- hình
- Sigma
- Tín hiệu
- tín hiệu
- Silicon
- tương tự
- mô phỏng
- website
- Six
- Kích thước máy
- Da
- Slice
- nhỏ
- Phần mềm
- giải pháp
- âm thanh
- nguồn
- không gian
- riêng
- quy định
- tốc độ
- mũi nhọn
- gai
- Spot
- lan rộng
- Stacks
- Traineeship
- Tiêu chuẩn
- thống kê
- Thép
- kích thích kinh tế
- Học tập
- thành công
- cao
- Bề mặt
- đình chỉ
- đình chỉ
- chuyển
- hệ thống
- hệ thống
- xe tăng
- Mục tiêu
- nhắm mục tiêu
- Nhiệm vụ
- Công nghệ
- thử nghiệm
- kiểm tra
- việc này
- Sản phẩm
- Khu vực
- cung cấp their dịch
- vì thế
- nhiệt
- Kia là
- thompson
- hàng ngàn
- số ba
- ba chiều
- ngưỡng
- Thông qua
- thời gian
- mô
- đến
- Hộp công cụ
- đào tạo
- chuyển
- thử nghiệm
- thử nghiệm
- Sự thật
- siêu âm
- us
- sử dụng
- Người sử dụng
- v1
- xác nhận
- giá trị
- Các giá trị
- van
- VBA
- Xác minh
- xác minh
- tầm nhìn
- vivo
- thể tích
- W
- Nước
- Sóng
- cuối tuần
- tuần
- trọng lượng
- TỐT
- cái nào
- trắng
- cửa sổ
- với
- ở trong
- thế giới
- viết
- zephyrnet