Вступ
Бактерії не влаштовують званих обідів і не розповідають анекдотів, але вони по-своєму соціальні. Коли наявність їжі дає їм можливість рости, розмножуватися та розвиватися, вони швидко, навіть охоче, утворюють спільноти. Подібно до портового міста, що виникає вздовж водного шляху, різноманітне співтовариство бактерій та інших мікробів визнає сприятливу ситуацію для розвитку та розбудовується.
Кожне бактеріальне місто має історію походження. Чан з вином, що бродить місяцями, біоплівка в легенях пацієнта з муковісцидозом і багате на сірку гаряче джерело — усе це почалося з набору клітин-засновників, які сформували надійну мережу взаємодіючих видів. Ці спільноти можуть виконувати біохімічні функції, які не може виконувати жоден вид сам по собі. Потрібен кворум лактокок та Streptococcus штами, що працюють разом, щоб дати сир чеддер його текстуру та смак. Різні комбінації кишкової мікробіоти можуть посилити або притупити ефективність таблетки.
Однак немає очевидних правил, які б пояснювали, як збирається бактеріальна спільнота або чому певні види процвітають. Більшість біологів, стикаючись з описом спільноти організмів, каталогізують реєстр наявних видів. Але кількість видів бактерій настільки велика, тривалість їхнього життя настільки коротка, а відмінності між будь-якими двома видами настільки незначні, що назви видів не обов’язково надають корисну інформацію.
Ось чому група фізиків, які стали мікробіологами, намагається використовувати методи секвенування геному у великому масштабі, щоб виявити будь-які універсальні правила, які можуть керувати бактеріальними спільнотами — підхід до мікробів на основі великих даних. Замість того, щоб називати види поіменно, вони зосереджуються на тому, що роблять організми, з метою розпізнати, які ролі є важливими в певній спільноті.
«Існує надлишковість — наприклад, два види можуть виконувати однакові функції — і один і той же вид може виконувати різні функції залежно [від], якщо ви змінюєте середовище», — сказав Отто Кордеро, мікробіолог з Массачусетського технологічного інституту. «Таксономія не така інформативна, як функція».
Минулого року в лабораторії Кордеро проводилися дослідження під керівництвом мікробіолога Матті Гралка ідентифікували набір мікробних функцій, які можна передбачити без інформації про вид. Охарактеризувавши метаболізм 186 різних штамів бактерій, зібраних в Атлантичному океані, він виявив, що може передбачити основні харчові переваги певного мікроба лише на основі його геному.
Вступ
Цей шаблон дозволяє дослідникам обійти послідовності генів, які беруть участь у розщепленні того чи іншого джерела їжі. Команда Гралки виявила, що вони можуть передбачити переважну їжу, просто вимірявши молекулярний склад геному. Висновки були опубліковані в Природа Мікробіологія.
Поки ця галузь знаходиться в зародковому стані, мікробні екологи шукають способи швидко оцінити та описати природні мікробні спільноти, чи то в дикому середовищі, чи в лікарні. Розробляючи теорію збирання мікробів, вони сподіваються, що зможуть навчитися бачити майже невидимі мікроскопічні екології, що швидко змінюються, що розгортаються навколо нас.
Поле без теорії
Мікробіологія століттями була обмежена ступенем здатності вчених бачити те, що перед ними. Навіть на початку 2000-х років, якщо мікробіолог висипав бактеріальну спільноту на чашку Петрі, виявити різноманітні види, підвиди та штами в ній було монументальним завданням. Було надто багато організмів, змішаних разом, які з часом зменшувалися й відпливали, оскільки доступні джерела їжі змінювалися, а види жили й гинули. Вчені могли зробити трохи більше, ніж ідентифікувати окремі колонії по одній за формою, кольором, морфологією та потребами в поживних речовинах.
До останніх років це залишало поле з мало визначальною теорією, щоб пояснити, як збираються мікробіоми, і без надійних аксіом для інтерпретації експериментальних результатів. У 2007 році група мікробіологів написала в Мікробіологія природи що ця відсутність теорії походить як від нестачі даних, так і від загальної нездатності застосувати екологічну теорію до мікроскопічного світу. Вони стверджували, що без теорії наукова сфера не має структури, форми та передбачуваної сили. Мікробний еколог може зробити будь-яке спостереження щодо спільноти; без теорії, яка б пояснювала його важливість, все могло б бути правдою.
«Іноді ми скаржимося, що нічого дивного в мікробній екології немає», — сказав Зображення заповнювача Альваро Санчес, мікробний еколог в Інституті функціональної біології та геноміки, спільному інституті Національної дослідницької ради Іспанії та Університету Саламанки. «У нас немає сильних пріоритетів. У нас немає теорії прогнозування, тому немає нічого дивного».
Однак нові генетичні інструменти привели до нових способів опису мікробних спільнот. Секвенування за Сенгером, яке десятиліттями було найшвидшим методом секвенування генів, дозволяло ідентифікувати мікроби лише по одному. Потім, у середині 2000-х, технологія секвенування з високою пропускною здатністю стала доступною, а в 2010-х вона стала досить доступною. Мікробіологи могли ідентифікувати види за будь-якою ДНК, доступною в зразку.
Мікробні екологи пішли з розуму. «Люди вигадували послідовність усього», — сказав Глен Д'Соуза, мікробний еколог у Швейцарському федеральному технологічному інституті Цюріха. «У полі домінували описи того, хто там був — ця помилка була в цьому середовищі; ця помилка була в тому середовищі».
Вступ
Раптом надлишок даних виявив досі невідоме мікробне різноманіття. У 2009 році було повністю секвеновано менш ніж 1,000 геномів бактерій. До 2014 року були більше, ніж 30,000. З тих пір ця цифра зросла: на кінець 2023 року було 567,228 XNUMX повних бактеріальних геномів, легко переглядати і доступний для перехресного посилання. Сьогодні на бактерії припадає майже 80% усіх наявних геномних даних.
«Люди просто не уявляли, скільки видів буде», — сказав Гралка, який зараз керує власною лабораторією в Університеті VU в Амстердамі. «Під мікроскопом їх не дуже добре відрізниш».
Однак ідентифікація окремих видів бактерій у спільноті може сказати вченим лише про багато. Їхні назви не обов’язково говорять багато про те, що робить кожна помилка або як співтовариство поєднується.
«Ці спільноти багатовимірні», — сказав Якопо Гріллі, мікробний еколог-теоретик і колишній фізик Міжнародного центру теоретичної фізики імені Абдуса Салама в Трієсті, Італія. «Якщо ми спробуємо зрозуміти [їх], ми маємо мати справу з тим фактом, що існує багато, багато популяцій, багато різних видів — що б не означало «вид» — у цих спільнотах. Усі ці види мають свої особливості, і якимось чином вони співіснують».
У 2018, A наука папір Санчесом і його командою дали мікробіологам дозвіл спростити своє мислення. Їхні проривні дослідження показали, що якщо ви зробите крок назад і дозволите дуже специфічним деталям, як-от точні назви видів, розтанути, ви зможете краще зрозуміти логіку бактеріальної спільноти, ніби ви дивитесь на абстрактну картину здалеку.
Як і Гріллі, Санчес був фізиком до того, як звернувся до мікробної екології. «Я вирішив почати працювати над екологією та мікробними спільнотами, оскільки помітив, що на кількісному рівні це була сфера, яка не була так добре вивчена, як еволюція», — сказав Санчес.
Для дослідження його лабораторія вирощувала дикі бактерії, культивовані з мертвого листя та ґрунту навколо Нью-Гейвена, штат Коннектикут. Вони виявили, що за однакових умов навколишнього середовища — однакових джерел вуглецю, температури, кислотності тощо — будь-яке мікробне співтовариство досягне приблизно однакового функціонального складу, незалежно від того, як воно почалося. У його експериментах з кожною популяцією з’являлися ті самі ніші, які знову і знову заповнювалися, хоча й не обов’язково тим самим видом бактерій.
Дослідження змінило погляд мікробіологів на громаду. Коли Санчес порівнював спільноти, взяті з одного середовища, назви бактерій завжди були різними, сказав Д'Соуза. «Але якщо ви подивитеся на функціональний вміст генів, наприклад, хто що робить? Це напрочуд схоже", - сказав він. «Тож неважливо, хто ти; те, що ти робиш, має значення».
Передбачувана сила геному
У 2018 році Гралка щойно прибув до Бостона, щоб працювати постдоктом у лабораторії Кордеро в MIT. Він починав як біофізик, вивчаючи фізичні властивості клітин, окремо та в сукупності. Він вирішив приєднатися до дослідницької програми Кордеро, оскільки обидва дослідники мали схоже бачення: розвинути кількісне розуміння мікробних спільнот з висоти пташиного польоту.
У Кордеро була морозильна камера, заповнена мікробами Атлантичного океану, які використовували його лабораторії, щоб зробити цікаве відкриття про те, як мікробні спільноти формуються навколо джерел їжі, опубліковане в Current Biology у 2019 році. Вони скинули кульки хітину — полімер повторюваних молекул цукру, який утворює панцири комах — у культури бактерій, вирощених із морських зразків. Коли вчені виловили кульки, вони подивилися, які спільноти утворилися. Мікроби, які харчувалися хітином, як передбачувано, чіплялися за хітин, але були також бактерії, які не їли хітин. Схоже, що ці бактерії харчуються побічними продуктами, викинутими хітиноїдами. Поїдачі хітину та поїди субпродуктів утворили спільноту.
Вступ
Це зацікавило Гральку. Здавалося можливим, що тип спільноти можна передбачити лише за її джерелами їжі: з початкового джерела їжі, а потім з нових джерел, які утворилися, коли початкові бактерії розщепили її. Він задавався питанням, чи зможе він передбачити дугу змін мікробної спільноти, якщо контролюватиме її початкові умови.
Потім, коли він приєднався до лабораторії Кордеро, «з лабораторії Альваро [Санчеса] вийшла стаття, яка викликала великий резонанс», — сказав Гралка — робота 2018 року показує, що з’являються передбачувані мікробні ніші, які можуть бути заповнені багатьма різними видами. . Ідея про те, що функції важливіші за види, мала для нього сенс. «У ґрунті іноді можна знайти тисячі різних бактерій. Тоді це дуже швидко відкриває запитання», – сказав він. «Як існують тисячі видів? Звичайно, не існує тисяч різних ніш».
Об’єднавши ці два висновки Кордеро та Санчеса, Гралка задумався, чи зможе він не лише передбачити мікробне співтовариство з початкового джерела їжі, але й зробити висновок про ніші з геномів бактерій.
Гралка спробувала морозильну камеру Кордеро. По-перше, йому потрібно було охарактеризувати бактерії на основі того, яку їжу вони віддають перевагу. Використовуючи високопродуктивні інструменти, він виростив 186 різних видів бактерій у культурах, доповнених 135 різними джерелами їжі. Загалом Gralka виміряв швидкість росту понад 25,000 XNUMX зразків бактерій.
У 186 видів бактерій стільки ж різноманіття, скільки у 186 різних людей, і, як і у людей, кожна бактерія має свої особливості та звички. Деякі з бактерій Gralka швидко росли на цукрах, а інші швидко росли на кислотах, включаючи органічні кислоти, такі як лимонна кислота, а також амінокислоти, будівельні блоки білків. Використовуючи ці дані, Гралка помістив види на те, що він назвав віссю цукру й кислоти, виходячи з їхніх уподобань.
Потім він секвенував ДНК усіх 186 видів, щоб побачити, як вони пов’язані еволюційно. Гралка був здивований, побачивши, що близькоспоріднені види в межах однієї філогенетичної родини часто мають різні метаболічні переваги. Наприклад, загін паличкоядерних бактерій Alteromonadales містив у собі кислотоїдів Колвелія, цукроїди Paraglaciecola і менш вибагливі Pseudoalteromonas, яка з'їла обох. Це підтвердило ширшу ідею про те, що назви видів не передають багато інформації про функцію бактерій у певному мікробному співтоваристві.
Потім аналіз Гралки копав глибше ДНК жуків. Щоб пов’язати геном із метаболічною функцією, він шукав гени, які, як відомо, беруть участь у перетравленні та метаболізмі цукрів, і зробив те саме для кислот. Він виявив, що кількість генів, які споживають цукор або кислоту, передбачила, де кожен мікроб потрапляє в спектрі цукрової кислоти: що більше генів у виду для того чи іншого процесу, то більша ймовірність того, що він потрапить на той кінець осі. . Результати показали, що мікробіологи можуть приблизно встановити метаболізм спільноти, шукаючи послідовності певних генів.
Вступ
Потім він виявив ще щось дивовижне. Ігноруючи фактичні послідовності генів, він дивився безпосередньо на молекулярний розпад ДНК штаму. У подвійній спіралі ДНК чотири типи основ у протилежних ланцюгах поєднані в пари: гуанін (G) зв’язаний з цитозином (C), а тимін (T) зв’язаний з аденіном (A). Несподівано виявилося, що геноми людей, які харчуються кислотою, мали в середньому 55% GC, тоді як вміст GC у тих, хто харчується цукром, становив у середньому близько 40%. Щоб підтвердити, що ця кореляція не є примхою його конкретної мікробної спільноти, Гралка проаналізував більший набір даних із тисяч еталонних геномів із усього бактеріального дерева життя. Модель збереглася: спеціалісти з кислот зазвичай мали вищий вміст GC, ніж спеціалісти з цукру.
Це правило здавалося неймовірно простим. Хімічний склад ДНК бактерії передбачив її нішу в суспільстві. Гралка міг визначити, чи споживав вид переважно цукор або кислоту, лише за вмістом його геному, взагалі не досліджуючи його гени. Статистика та геноміка знайшли простий порядок там, де таксономія його не бачила.
Прогнозування мікробного майбутнього
Ця робота закладає основу нової науки про практичні прогнози мікробних спільнот. Скажімо, трубопровід витікає та розливає сиру нафту в лісі; мікробіолог чи вчений-еколог може захотіти знати, які бактерії з’являться, щоб з’їсти це масло. Лікар може захотіти знати, як мікробіом кишечника пацієнта може змінюватися протягом хвороби, і потенційно використати це передбачення для призначення конкретних антибіотиків або інших ліків.
Можна знайти відповіді на багато питань і вирішити проблеми, якщо дослідники зможуть швидко оцінити функції мікробної спільноти. «У моїй лабораторії ми називаємо це дилемою тренера, — сказав Санчес. «У вас є купа гравців, і ви хочете визначити, кого ви повинні вивести на майданчик, якщо хочете максимізувати свій рахунок. У мене є цей список зі 100 штамів; Я хочу помістити їх у біореактор і хочу зробити якомога більше етанолу. Тож які штами мені слід застосовувати?»
Правила, які розкривають мікробні екологи, ще не можуть відповісти на це запитання. Однак швидка оцінка мікробного метаболізму — або робоча теорія бактеріальних спільнот та їхніх генів — колись може бути використана для вивчення та управління світом екологічних процесів, сказав Гралка.
Мікробні спільноти є ключовими гравцями в кожному екологічному циклі на Землі. Коли дерево падає в лісі, ціла низка грибів і бактерій збирається, щоб поїсти й розкласти його, повертаючи компоненти дерева до глобальних циклів поживних речовин. Завдяки концепціям, введеним Гралкою, Санчесом, Кордеро та іншими мікробними екологами, ніші цієї нової спільноти можна передбачити. Деревина в основному складається з целюлози та геміцелюлози, які є полімерами глюкози; отже, функціонуюча спільнота, яка дозріла для участі в розкладанні лісів, мала б містити бактерії, що харчуються цукром, матиме велику кількість генів, що перетравлюють цукор, і матиме геноми, що складаються з меншої частки молекул GC. Гралка припустив, що раптовий і таємничий сплеск кислотоїдів може бути ознакою чогось недобре.
Цукрово-кислотна вісь — це лише одна з ніш спільноти, яку ці мікробні екологи хочуть визначити. Кордеро запропонував лісову екосистему як приклад своєї кінцевої мети. Екологи визначили багато загальних рис і функцій, які є спільними для лісів і відрізняються між ними, що дозволяє порівнювати та прогнозувати.
«Скільки біомаси на листках порівняно з стовбуром? [Виявляється], що рослини з величезним листям частіше дихають у тропічному середовищі», — сказав Кордеро. «Наскільки глибоке коріння? Це говорить вам, скільки поживних речовин вони можуть отримати з навколишнього середовища. Як швидко вони будуть рости? Який вони зріст? Наскільки добре вони змагаються за світло?» Знання навіть кількох із цих змінних може багато розповісти нам про динаміку лісу.
Кордеро не знає, які аналогічні риси можуть бути для мікроорганізмів та їх спільнот. Безсумнівно, багато бактеріальних ніш пов’язані з їх метаболізмом і побічними продуктами, але є й інші аспекти, які слід враховувати. «Якби у нас були способи дізнатися, що це за змінні... і способи їх систематичної ідентифікації, це було б неймовірно», — сказав він.
У певному сенсі ці вчені вперше створюють екологічну карту мікробних спільнот. Їхня робота пропонує новий погляд на те, чим насправді є мікробна спільнота, показуючи, що мікроби найкраще визначити тим, чим вони займаються.
Примітка редактора: Кордеро очолює дослідницьку програму Simons Collaboration on Principles of Microbial Ecosystems, яка підтримується Фондом Simons Foundation, який також фінансує цей редакційно незалежний журнал. Рішення про фінансування Simons Foundation не впливають на наше висвітлення.
- Розповсюдження контенту та PR на основі SEO. Отримайте посилення сьогодні.
- PlatoData.Network Vertical Generative Ai. Додайте собі сили. Доступ тут.
- PlatoAiStream. Web3 Intelligence. Розширення знань. Доступ тут.
- ПлатонЕСГ. вуглець, CleanTech, Енергія, Навколишнє середовище, Сонячна, Поводження з відходами. Доступ тут.
- PlatoHealth. Розвідка про біотехнології та клінічні випробування. Доступ тут.
- джерело: https://www.quantamagazine.org/the-quest-for-simple-rules-to-build-a-microbial-community-20240117/
- : має
- :є
- : ні
- :де
- ][стор
- $UP
- 000
- 08
- 1
- 100
- 2014
- 2016
- 2018
- 2019
- 2023
- 25
- 30
- a
- здатність
- Здатний
- МЕНЮ
- РЕЗЮМЕ
- рясний
- рахунки
- через
- фактичний
- насправді
- доступний
- після
- агрегати
- мета
- ВСІ
- дозволяє
- тільки
- по
- Також
- завжди
- дивовижний
- серед
- Амстердам
- an
- аналіз
- проаналізовані
- та
- Інший
- відповідь
- Антибіотики
- будь-який
- все
- крім
- з'являтися
- з'явився
- Застосовувати
- підхід
- Дуга
- ЕСТЬ
- ПЛОЩА
- сперечався
- навколо
- прибулий
- AS
- збірка
- оцінити
- оцінка
- At
- доступний
- середній
- геть
- Вісь
- назад
- Бактерії
- заснований
- основний
- BE
- стали
- оскільки
- було
- перед тим
- КРАЩЕ
- Краще
- між
- Великий
- біологія
- біомаса
- блоки
- Бостон
- обидва
- пов'язаний
- Пробій
- Розрив
- прорив
- ширше
- Зламав
- Помилка
- будувати
- Створюємо
- гроно
- але
- by
- обходити
- call
- званий
- покликання
- прийшов
- CAN
- вуглець
- каталог
- Клітини
- Центр
- століть
- певний
- зміна
- змінилися
- Зміни
- охарактеризувати
- хімія
- Місто
- тісно
- співробітництво
- color
- комбінації
- спільноти
- співтовариство
- порівняний
- порівняння
- конкурують
- повний
- повністю
- Компоненти
- складається
- склад
- поняття
- Умови
- підтвердити
- Коннектикут
- Вважати
- містяться
- зміст
- внесок
- контроль
- Кореляція
- може
- Рада
- курс
- Суд
- охоплення
- створений
- сирий
- Сира нафта
- цикл
- циклів
- дані
- набір даних
- мертвий
- угода
- десятиліття
- вирішене
- рішення
- глибокий
- глибше
- певний
- визначаючи
- Залежно
- описувати
- описують
- деталі
- розвивати
- розвивається
- DID
- померлий
- відрізняються
- Відмінності
- різний
- Вечеря
- безпосередньо
- відкритий
- відкриття
- Захворювання
- блюдо
- відстань
- Різне
- різноманітність
- ДНК
- do
- Лікар
- робить
- Ні
- домінують
- Не знаю
- подвійний
- вниз
- впав
- динаміка
- кожен
- з нетерпінням
- Рано
- земля
- є
- Екологічний
- екосистема
- екосистеми
- ефективність
- дозволяє
- кінець
- Навколишнє середовище
- навколишній
- середовищах
- істотний
- встановити
- оцінити
- Навіть
- Кожен
- все
- еволюція
- еволюціонувати
- Вивчення
- приклад
- експериментальний
- Експерименти
- Пояснювати
- ступінь
- стикаються
- факт
- Фолс
- сімей
- ШВИДКО
- швидкий
- Федеральний
- кілька
- менше
- поле
- Рисунок
- заповнений
- знайти
- результати
- Перший
- перший раз
- Тече
- фокусування
- харчування
- продукти
- для
- ліс
- форма
- сформований
- знайдений
- фонд
- засновник
- чотири
- від
- перед
- функція
- функціональний
- функціонування
- Функції
- фінансування
- засоби
- дав
- Загальне
- в цілому
- генетичний
- геном
- геномика
- GitHub
- Давати
- даний
- дає
- Глобальний
- мета
- добре
- керувати
- виросла
- Group
- Рости
- вирощений
- Зростання
- було
- Мати
- притулок
- he
- Герой
- вище
- дуже
- його
- його
- надія
- лікарня
- господар
- ГАРЯЧА
- Як
- Однак
- HTTPS
- величезний
- Людей
- i
- ідея
- ідентифікований
- ідентифікувати
- ідентифікує
- if
- значення
- in
- нездатність
- У тому числі
- незалежний
- індивідуальний
- Індивідуально
- вплив
- інформація
- інформативний
- початковий
- розуміння
- замість
- Інститут
- взаємодіючих
- цікавий
- Міжнародне покриття
- в
- введені
- невидимий
- залучений
- IT
- Італія
- ЙОГО
- сам
- приєднатися
- приєднався
- спільна
- просто
- ключ
- Дитина
- Знати
- Знання
- відомий
- lab
- відсутність
- земля
- в значній мірі
- більше
- Відкладає
- Веде за собою
- Витоку
- УЧИТЬСЯ
- Led
- залишити
- менше
- дозволяти
- рівень
- життя
- світло
- як
- Ймовірно
- обмеженою
- список
- трохи
- логіка
- подивитися
- подивився
- шукати
- серія
- знизити
- Легкі
- made
- журнал
- зробити
- РОБОТИ
- Робить
- управляти
- багато
- відображення
- Військово-морський флот
- Массачусетс
- Массачусетський технологічний інститут
- масивний
- Матерія
- Питання
- Максимізувати
- засоби
- виміряний
- вимір
- просто
- метаболічний
- метод
- мікробіома
- Мікроскоп
- може бути
- хвилин
- MIT
- змішаний
- молекулярний
- місяців
- монументальний
- більше
- найбільш
- в основному
- багато
- my
- таємничий
- ім'я
- Імена
- National
- майже
- обов'язково
- необхідний
- мережу
- Нові
- ніша
- NIH
- немає
- увагу
- нічого
- зараз
- номер
- спостереження
- Очевидний
- трапляються
- океан
- of
- від
- запропонований
- часто
- Нафта
- on
- ONE
- тільки
- Відкриється
- Можливість
- проти
- or
- порядок
- органічний
- Походження
- оригінал
- Інше
- інші
- наші
- з
- над
- власний
- Картина
- парний
- Папір
- участь
- приватність
- Сторони
- пацієнт
- Викрійки
- моделі
- виконувати
- дозвіл
- Петрі
- фізичний
- Фізика
- трубопровід
- розміщений
- рослин
- plato
- Інформація про дані Платона
- PlatoData
- гравці
- полімер
- Полімери
- поп
- населення
- популяції
- це можливо
- потенційно
- влада
- Практичний
- передбачати
- Передбачуваний
- передвіщений
- прогноз
- Прогнози
- інтелектуального
- переваги
- переважним
- призначати
- наявність
- представити
- досить
- в першу чергу
- Принципи
- проблеми
- процес
- процеси
- програма
- властивості
- частка
- пропонує
- Білки
- забезпечувати
- опублікований
- put
- Квантамагазин
- кількісний
- пошук
- питання
- питань
- Швидко
- швидко
- швидко
- ставки
- останній
- визнавати
- визнаючи
- посилання
- пов'язаний
- Вимога
- дослідження
- Дослідники
- результати
- повернення
- Показали
- Відгуки
- право
- міцний
- ролі
- коренеплоди
- список
- грубо
- Правило
- Правила
- пробіжки
- Зазначений
- то ж
- say
- шкала
- наука
- науковий
- вчений
- Вчені
- рахунок
- Грати короля карти - безкоштовно Nijumi логічна гра гри
- побачити
- здавалося
- сенс
- послідовності
- комплект
- Форма
- загальні
- зміщений
- ПЕРЕМІЩЕННЯ
- Короткий
- Повинен
- показав
- показ
- підпис
- аналогічний
- простий
- спростити
- з
- один
- ситуація
- So
- соціальна
- грунт
- вирішити
- деякі
- коли-небудь
- якось
- що в сім'ї щось
- іноді
- шукати
- Source
- Джерела
- іспанська
- прольоти
- Фахівці
- конкретний
- спектр
- шип
- весна
- старт
- почалася
- Починаючи
- статистика
- стебла
- Крок
- Історія
- Штамми
- Пасма
- сильний
- структура
- навчався
- Вивчення
- вивчення
- міцний
- раптовий
- цукор
- Підтриманий
- напевно
- здивований
- дивно
- Швейцарський
- T
- Приймати
- приймає
- танг
- Завдання
- систематика
- команда
- методи
- Технологія
- сказати
- розповідає
- ніж
- Що
- Команда
- їх
- Їх
- потім
- теоретичний
- теорія
- Там.
- отже
- Ці
- вони
- речі
- Мислення
- це
- ті
- хоча?
- тисячі
- Процвітати
- час
- до
- сьогодні
- разом
- сказав
- занадто
- прийняли
- інструменти
- дерево
- правда
- намагатися
- намагається
- Опинився
- Поворот
- повороти
- два
- тип
- Типи
- кінцевий
- розкрити
- при
- розуміти
- розуміння
- розгортання
- Universal
- університет
- невідомий
- us
- використання
- використовуваний
- корисна інформація
- використання
- різноманітність
- величезний
- ПДВ
- Проти
- дуже
- вид
- перегляд
- бачення
- хотіти
- було
- шлях..
- способи
- we
- webp
- ДОБРЕ
- пішов
- були
- Що
- будь
- коли
- Чи
- який
- в той час як
- ВООЗ
- чому
- Wild
- волі
- ВИНО
- з
- в
- без
- дерево
- Work
- робочий
- світ
- б
- пише
- рік
- років
- ще
- ви
- вашу
- зефірнет
- Цюріх