dyr
Eksperimenter ble utført i samsvar med National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals. Protokollene ble godkjent av den lokale dyreetiske komiteen (komité Charles Darwin nr. 5, registreringsnr. 9529 og 26889) og utført i samsvar med EU-parlamentets direktiv 2010/63/EU. Long-Evans hannrotter mellom 2 og 12 måneder og WT hannmus (C57BL/6J) i alderen 9 uker ble hentet fra Janvier Laboratories; P23H (linje 1) transgene hannrotter (9–22 måneder) ble oppdrettet lokalt.
Plasmidkloning og AAV-produksjon
Plasmider som inneholder E. coli mscL sekvensen i WT-formen og med G22S-mutasjonen ble oppnådd fra Francesco Difato (Addgene-plasmidene #107454 og #107455)28. For å målrette RGC-er, SNCG-promoteren31 ble satt inn i et AAV-ryggradsplasmid inneholdende mscL sekvens fusjonert til tdTomato-genet og Kir2.1 ER-eksportsignalet, for å drive ekspresjon ved plasmamembranen. En AAV2.7m8-vektor ble brukt for intravitreøs levering. For målretting av nevroner i de V1-kortikale lagene ble SNCG-promotoren erstattet av CamKII-promoteren og en AAV9.7m8-vektor ble valgt. Rekombinante AAV-er ble produsert ved plasmid-kotransfeksjonsmetoden, og de resulterende lysatene ble renset ved iodixanol-rensing31.
Amerikansk stimulans
Tre fokuserte amerikanske transdusere med forskjellige sentralfrekvenser ble brukt: 0.50 MHz (diameter, Ø = 1.00" = 25.4 mm; brennvidde, f = 1.25" = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00" = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) og 15.00 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), tilsvarende numeriske blenderåpninger på F/Ø = 1.25 og 2.00. Akustiske felt utstrålt av de tre fokuserte transduserne er presentert i fig. 1 (simuleringer) og utvidede data Fig. 3 (eksperimentelle målinger). Et TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) ble brukt til å produsere stimulusbølgeformen, som deretter ble ført gjennom en 80 dB RF effektforsterker (VBA 230-80, Vectawave) koblet til transduseren. Transdusertrykkutganger (trykk ved fokus, tredimensjonale (3D) trykkkart) ble målt i en avgasset vanntank med et Royer – Dieulesaint heterodyne interferometer47. Amerikanske stimuli brukt for ex vivo og in vivo stimulering hadde følgende egenskaper: 1 kHz pulsrepetisjonsfrekvens med 50 % arbeidssyklus, sonikeringsvarighet mellom 10 og 200 ms og interstimulusintervall mellom 0.01 og 2.00 s. Høyeste akustiske trykk varierte fra 0.11 til 0.88 MPa, 0.30 til 1.60 MPa og 0.20 til 1.27 MPa for henholdsvis 0.50, 2.25 og 15.00 MHz transduserne. De tilsvarende estimerte romlige maksimale pulsgjennomsnittlige intensitetsverdiene (Isppa) var 0.39–25.14, 2.92–83.12 og 1.30–52.37 W cm-2.
Intravitrøs genlevering og netthinneavbildning
Rotter ble bedøvet48 og AAV-suspensjon (2 µl), inneholdende mellom 8 og 14 × 1010 virale partikler, ble injisert inn i midten av glasslegemet. En måned senere ble tdTomato fluorescensavbildning utført på de injiserte øynene, med et MICRON IV netthinneavbildningsmikroskop (Phoenix Research Laboratories) og Micron Discover v.2.2.
MEA-opptak
Retinalbiter ble flatet ut på en filtermembran (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) og plassert på en MEA (elektrodediameter, 30 µm; avstand, 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems) belagt med poly-l-lysin (0.1 %, Sigma), med RGC-er vendt mot elektrodene31. AMPA/kainat-glutamatreseptorantagonist 6-cyano-7-nitrokinoksalin-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), NMDA-glutamatreseptorantagonisten [3H]3-(2-karboksypiperazin-4-yl) propyl -1-fosfonsyre (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) og en selektiv gruppe III metabotropisk glutamatreseptoragonist, l-(+)-2-amino-4-fosfonsmørsyre (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), ble badet påført gjennom perfusjonslinjen. Lysstimuli ble levert med en digital mikrospeilskjerm (Vialux; oppløsning, 1,024 768 × 4) koblet til en hvit lysdiodelyskilde (MNWHL1, Thorlabs) fokusert på fotoreseptorplanet (bestråling, XNUMX µW cm-2). Amerikanske transdusere ble koblet sammen med en spesiallaget koblingskjegle fylt med avgasset vann og montert på en motorisert scene (PT3/M-Z8, Thorlabs) plassert ortogonalt over netthinnen. Det reflekterte signalet til MEA-brikken og netthinnen ble oppdaget med en amerikansk nøkkelenhet (Lecoeur Electronique). Avstanden mellom netthinnen og transduseren var lik brennvidden til transduseren; dette ble verifisert med flytiden til det reflekterte signalet. Fra RGC-opptak med en 252-kanals forforsterker og MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems), ble pigger sortert med Spyking CIRCUS 0.5-programvare49. RGC-svar ble analysert med tilpassede skript skrevet i MATLAB (MathWorks 2018b) for klassifisering som PÅ, PÅ–AV eller AV, med svardominansindeksen50. Latenser ble beregnet som tiden mellom stimulusstart og maksimum av derivatet av spike density function (SDF). To klasser av USA-reagerende celler ble identifisert på grunnlag av latens - SL og LL - ved å fikse en terskel lik minimum av latensfordelingen av responsene til NT-celler på US (45 ms). Vi bestemte toppverdien A av SDF for beregning av responsvarighet, som ble definert som tidsintervallet mellom de to tidspunktene som SDF var lik for A/e (hvor A er toppdepolarisering og e er Eulers nummer). Fano-faktoren, som kvantifiserer variabiliteten av piggtall, ble beregnet som forholdet mellom variansen av piggtallet og gjennomsnittet. Den euklidiske avstanden mellom to aktiverte celler ble vektet i henhold til den maksimale avfyringshastigheten til cellene. Forholdet mellom antall aktiverte celler og størrelsen på området stimulert på MEA-brikken ble beregnet med tanke på størrelsen på det amerikanske brennpunktet for 2.25 og 15.00 MHz og størrelsen på MEA for 0.50 MHz, fordi brennpunktet var større enn MEA for denne frekvensen. Sentrum av responsen ble estimert ved å vekte den maksimale avfyringshastigheten til hver celle med avstanden fra andre reagerende celler, og forskyvningen av responsen ble beregnet som den euklidiske avstanden mellom to senter-av-respons-posisjoner.
Intrakranielle injeksjoner
AAV-suspensjoner ble injisert i høyre hjernehalvdel på to forskjellige steder hos rotter (2.6 mm ML, 6.8 mm AP og 3.1 mm ML, 7.2 mm AP fra bregma) eller på ett sted i mus (2.5 mm ML, 3.5 mm AP fra bregma)48. For rotteinjeksjoner, suspensjonen (200 nl som inneholder 0.2–8.0 × 1015 viruspartikler) ble injisert i tre forskjellige dybder (1,100, 1,350 og 1,500 µm fra den kortikale overflaten) med en mikrosprøytepumpekontroller (Micro4, World Precision Instruments) som opererer med en hastighet på 50 nl min.-1 og 10 ul Hamilton sprøyte. Hos mus, AAV-suspensjonen (1 µl som inneholder 0.2–8.0 × 1015 virale partikler) ble injisert ved 400 µm fra den kortikale overflaten med en hastighet på 100 nl min.-1.
In vivo ekstracellulære opptak
En måned etter AAV-injeksjoner, en liten kraniotomi (5 × 5 mm2) ble utført over V1 i høyre hjernehalvdel48. tdTomat-fluorescensen ble kontrollert med et MICRON IV netthinneavbildningsmikroskop og Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories). En 32-steder µEcog-elektrodearray (elektrodediameter, 30 µm; elektrodeavstand, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) ble plassert over det transfekterte området eller i en lignende sone for kontrollrotter. MEA-opptak ble utført med en silisiummikroprobe med 16 steder vippet 45° mot hjerneoverflaten (elektrodediameter, 30 µm; avstand, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) og MC_Rack v. 4.6.2. MEA ble avansert 1,100 µm inn i cortex med en tre-akset mikromanipulator (Sutter Instruments). US-transdusere ble koblet til hjernen med en spesiallaget koblingskjegle fylt med avgasset vann og US-gel på en motorisert scene. Avstanden mellom cortex og transduser var lik brennvidden til transduseren. Visuelle stimuli ble generert av en hvit-lys-kollimert lysemitterende diode (MNWHL4, Thorlabs) plassert 15 cm unna øyet (4.5 mW cm)-2 ved hornhinnen). Opptakene ble digitalisert med 32-kanals og 16-kanals forsterkere (modell ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). µEcog-opptakene ble analysert med spesialutviklede MATLAB-skript og MEA-opptakene ble analysert med Spyking CIRCUS-programvare og spesialutviklede MATLAB-skript. Responsvarigheten ble beregnet som intervallet mellom de to tidspunktene der det kortikalt fremkalte potensialet var lik A/e. Det aktiverte området ble definert som området av aktiveringskartet for pseudofarge hvor toppdepolarisering overskred bakgrunnsstøynivået beregnet som 2 × sd av signalet. Responssenteret ble estimert ved å vekte toppdepolariseringen til hver elektrode med dens avstand fra de andre elektrodene. Dens relative forskyvning ved flytting av den amerikanske transduseren ble beregnet som den euklidiske avstanden til de to posisjonene. For intrakortikale opptak ble cellelatens estimert som tiden mellom stimulusstart og maksimum av derivatet av SDF.
Kirurgi for in vivo atferdstesting
C57BL6J mus ble subkutant injisert med buprenorfin (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience), og deksametason (0.7 mg kg-1) (Dexazone, Virbac). Dyrene ble bedøvet med isofluran (5 % induksjon og 2 % vedlikehold, i en luft/oksygenblanding) og hodet ble barbert og renset med en antiseptisk løsning. Dyrene ble hodefiksert på en stereotaktisk ramme med et isoflurantilførselssystem og øyesalve, og et svart vev ble påført over øynene. Kroppstemperaturen ble holdt på 37 °C. Etter en lokal injeksjon av lidokain (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), ble det laget et snitt på huden. To skruer ble festet i skallen, etter en liten kraniotomi (ca. 5.0 × 5.0 mm2) ble utført over V1 i høyre hjernehalvdel (0.5 mm stålbor) og en cortexbuffer ble påført. Cortex ble dekket med et TPX-plastark (125 µm tykt) og forseglet med dental akrylsement (Tetric Evoflow). For atferdseksperimenter ble en metallisk hodestang (PhenoSys) for hodefiksering deretter limt til skallen på venstre hjernehalvdel med dental sement (FujiCEM 2). Dyrene ble plassert i et utvinningskammer, med en subkutan injeksjon av fysiologisk serum og salve på øynene (Ophtalon, Centravet). Buprenorfin ble injisert under overvåking etter operasjonen.
Museatferdstester
Mus ble plassert på en vannrestriksjonsplan til de nådde omtrent 80–85 % av vekten. Etter tilvenning til testforholdene36, ble mus trent til å reagere på en LS ved å utføre en frivillig deteksjonsoppgave: å slikke en vanntut (stump 18 gauge nål, ca. 5 mm fra munnen) som svar på hvitt-lys fullfeltstimulering (200 og 50 ms lang) av venstre øye (utvidet med tropicamid, Mydriaticum Dispersa) over 35 forsøk per stimuleringsvarighet og derfor 70 forsøk per dag. Vann (~4 μl) ble automatisk dispensert 500 ms etter at lyset ble slått på, gjennom et kalibrert vannsystem. Atferdsprotokollen og slikketeksjonen ble kontrollert av et skreddersydd system36. De neste fire dagene (to-dagers pause i helgen) ble US-stimuleringer levert på V1 i 50 ms ved tre forskjellige trykkverdier (0.2, 0.7 og 1.2 MPa). Disse trykkverdiene ble levert i en annen rekkefølge hver dag (35 forsøk hver). Mellomforsøksintervallene varierte tilfeldig og varierte mellom 10 og 30 s. 15 MHz US-transduseren ble koblet til hjernen med en spesiallaget koblingskjegle fylt med vann og US-gel. Suksessraten ble beregnet ved å telle antall forsøk der musene utførte antisiperende slikking (mellom stimulusstart og åpning av vannventilen). Den forventede slikkehastigheten (fig. 6e) for økten ble beregnet ved å trekke fra den forventede slikkehastigheten til en prøvelse, den spontane slikkehastigheten (beregnet på alle 1 s-tidsvinduene før hver enkelt stimulusstart (fig. 6a) for alle forsøkene) og multiplikasjon med suksessraten. Slikkelatens ble beregnet ved å bestemme tiden til den første forutseende slikkingen etter stimulusstart. Musene som ble beholdt for analyse hadde en suksessrate på over eller lik 60 % på den fjerde dagen etter LS. Deretter ble lette eller amerikanske økter som viste en tvangsmessig slikkeatferd ekskludert basert på uteligger-identifikasjonen gjort ved hjelp av ROUT-metoden (Q = 1 %) på øktens spontane slikkefrekvens i snitt av målingene på alle forsøkene i økten i 1 s-tidsvinduet før stimulusstart av forsøket.
Immunhistokjemi og konfokal avbildning
Prøver ble inkubert over natten ved 4 °C med et monoklonalt anti-RBPMS-antistoff (1:500, kanin; ABN1362, Merck Millipore) for netthinnen31, med et monoklonalt anti-NeuN-antistoff (1:500, mus, klon A60; MAB377, Merck Millipore) for hjerneseksjoner48. Seksjonene ble deretter inkubert med sekundære antistoffer konjugert med Alexa Fluor 488 (1:500, esel anti-mus og esel anti-kanin IgG 488, polyklonalt; A-21202 og A-21206, henholdsvis Invitrogen) og DAPI (1:1,000 9542 ; D1, Merck Millipore) i 1000 time ved romtemperatur. Et Olympus FV20 konfokalmikroskop med ×20 objektiv (UPLSAPO 0.85XO med en numerisk blenderåpning på 10) ble brukt til å ta bilder av flatmonterte netthinnene og hjerneseksjoner (FV4.2-ASW v. XNUMX programvare).
På de konfokale bildene som ble behandlet med Fiji (ImageJ v. 1.53q), ble RBPMS- og NeuN-positive celler automatisk talt med "analysere partikler"-plugin. Cellene ble manuelt talt av to forskjellige brukere, med "celleteller"-plugin. Kvantifisering ble utført ved å skaffe konfokale stabler i minst fire tilfeldig valgte transfekterte områder på 0.4 mm2 (Utvidet data Fig. 1). For V1-nevroner ble den sagittale hjerneskiven med den største tdTomat-fluorescenssonen valgt for hvert dyr. Et område av interesse ble manuelt definert i V1 og kvantifiseringene ble utført i minst seks tilfeldig valgte regioner på 0.4 mm2.
USA-induserte simuleringer av vevsoppvarming
En tredelt prosess ble brukt for å estimere termiske effekter: (1) simulering av de akustiske feltene generert av de tre transduserne, med realistiske akustiske parametere; (2) verifisering av at ikke-lineær akustikk ikke spilte en viktig rolle i varmeoverføring; og (3) realistiske simuleringer av varmeoverføring og temperaturøkning indusert i fokus av USA i et lineært regime for parameterne brukt i denne studien.
For ikke-lineære simuleringer brukte vi MATLABs k-Wave-verktøykasse ved å definere geometrien til transduseren i tre dimensjoner og bruke følgende parametere for forplantningsmediet (vann): lydhastighet, c = 1,500 m s-1; volumetrisk masse, ρ = 1,000 kg m-3; ikke-linearitetskoeffisient, B/A = 5; dempningskoeffisient, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; frekvenskraftloven til dempningskoeffisienten, y = 2 (ref. 51). Vi simulerte kvasi-monokromatiske 3D-bølgefelt ved bruk av lange utbrudd på 50 sykluser; dette ga oss det maksimale trykkfeltet i tre dimensjoner samt bølgeformen ved fokuset. Simuleringer ble kalibrert ved å justere inngangstrykket (eksitering av den simulerte transduseren) for å nå trykket ved fokus målt i vanntanken med ekte transdusere. Full bredde ved halvmaksimum (FWHM) brennpunktdiameter i x-y planet var 4.360, 1.610 og 0.276 mm, og lengden på hovedaksen i x-z planet var 32.3, 20.6 og 3.75 mm for henholdsvis 0.50, 2.25 og 15.00 MHz transduserne (fig. 1b–d). Ikke-lineære effekter ble evaluert ved å estimere det relative harmoniske innholdet i bølgeformen ved fokuset. I eksemplet på 15 MHz fokusomformer i fig. 1d, ble de eksperimentelle og simulerte signalene ved brennpunktet sammenlignet og funnet å være svært konkordante (utvidet data fig. 4a). Videre er amplituden til den andre harmoniske 19.8 dB under fundamental (20.9 dB i det simulerte tilfellet), noe som betyr at hvis grunnenergien er E, den andre harmoniske har energi E/95 (Utvidet data Fig. 4b). Derfor kan vi med rimelighet neglisjere de ikke-lineære effektene i beregningene av de termiske effektene, da de står for ~1% av energien som er involvert. De samme konklusjonene ble trukket ved 0.5 MHz og 15.0 MHz. Tilnærminger for lineær bølgeutbredelse reduserte beregningskostnadene for simuleringene betraktelig. Lineære forplantningssimuleringer ble utført med Field II-verktøykassen i MATLAB52,53, i monokromatisk modus, med samme mediumegenskaper som k-Wave (vann), for å oppnå 3D maksimale trykkfelt. Disse maksimale trykkfeltene ble brukt til å bygge en varmekildeterm (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Hvor αnp er absorpsjonskoeffisienten til hjernen ved den betraktede frekvensen (59.04 Np m-1 ved 15 MHz, regnet fra αhjerne = 0.21 dB cm-1 MHz-y og y = 1.18), hjernens volumetriske masse ρhjerne = 1,046 kg m-3, hjernens lydhastighet chjerne = 154 s-1 og pmax er det maksimale 3D-trykkfeltet. Dette kildebegrepet ble deretter brukt i oppløsningen av en Pennes biovarmeligning (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{delvis T}}{{delvis t}} = mathrm{div}venstre( {K_mathrm{t}timesnabla T} høyre) – rho _{ mathrm{blod}}C_{mathrm{blod}}P_{mathrm{blod}}venstre( {T – T_mathrm{a}} høyre) + Q) i k-Wave, hvor Chjerne er den blodspesifikke varmekapasiteten (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt er hjernens varmeledningsevne (0.51 W m-1 ° C-1), ρblod er blodtettheten (1,050 kg m-3), Cblod er den blodspesifikke varmekapasiteten (3,617 J kg-1 ° C-1), Pblod er blodperfusjonskoeffisienten (9.7 × 10-3 s-1), Ta er arteriell temperatur (37 °C), Q = QUS + ρhjerneγhjerne og γhjerne er varmegenereringen av hjernevevet (11.37 W kg-1) (ref. 54,55). Utgangstilstanden for hjernetemperatur ble satt til T0 = 37 °C.
Denne simuleringen tilsvarer det verste scenarioet for den gitte temperaturøkningen. (1) Den akustiske forplantningen simuleres kun i vann (ikke-nedsatt verdi), med en lavere dempningskoeffisient (2.2 × 10)-3 dB cm MHz-2.00) enn hjernen (0.59 dB cm MHz-1.27), selv om en del av forplantningen skjer i hjernen. De pmax kart er derfor overvurdert. (2) Termisk absorpsjon simuleres kun i hjernevevet, med en høyere absorpsjonskoeffisient (0.21 dB cm MHz)-1.18) enn vann, selv om en del av det maksimale trykkfeltet faktisk befinner seg innenfor vannet til den akustiske koblingskonen. Derfor, QUS er litt overvurdert. Vi kartla temperaturen i tre romlige dimensjoner og tid, og så etter punktet for maksimal temperaturøkning (Utvidet data Fig. 4c–f).
Statistisk analyse
Statistiske analyser ble utført med Prism programvare (Prism 9, GraphPad). Verdier er uttrykt og representert som middelverdier ± standardfeil for gjennomsnittet (sem) på figurer og i teksten, med mindre annet er spesifisert. Data ble analysert i uparrede Welchs t-tester (to tailed) eller en uparet multippel t-test med Sidak–Bonferroni-korreksjon for flere sammenligninger. Statistiske tester er gitt i figurforklaringene.
Rapporteringssammendrag
Mer informasjon om forskningsdesign er tilgjengelig i Sammendrag av naturporteføljerapportering knyttet til denne artikkelen.
- SEO-drevet innhold og PR-distribusjon. Bli forsterket i dag.
- Platoblokkkjede. Web3 Metaverse Intelligence. Kunnskap forsterket. Tilgang her.
- kilde: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :er
- ][s
- $OPP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- ovenfor
- akademisk
- aksesseres
- Ifølge
- Logg inn
- erverve
- anskaffe
- Aktivering
- aktivitet
- faktisk
- avansert
- Etter
- alderen
- Avtale
- AL
- Alexa
- Alle
- tillater
- analyse
- Anchor
- og
- dyr
- dyr
- antistoffer
- anvendt
- godkjent
- ca
- ER
- AREA
- Array
- Artikkel
- AS
- evaluering
- At
- August
- automatisk
- tilgjengelig
- gjennomsnittlig
- gjennomsnitt
- Axis
- Backbone
- basert
- basis
- BE
- fordi
- før du
- under
- mellom
- Svart
- blod
- kroppen
- Brain
- Break
- buffer
- bygge
- by
- beregnet
- CAN
- Kapasitet
- hvilken
- saken
- Celler
- sentral
- senter
- Chamber
- Kanal
- egenskaper
- Charles
- chip
- valgt ut
- klasser
- klassifisering
- klikk
- Utvalget
- sammenlignet
- omfattende
- databehandling
- tilstand
- gjennomført
- ledningsevne
- tilkoblet
- ansett
- vurderer
- innhold
- kontroll
- kontrolleres
- controller
- Tilsvarende
- tilsvarer
- Kostnad
- kombinert
- dekket
- skikk
- syklus
- sykluser
- dato
- Database
- dag
- Dager
- definert
- definere
- levert
- levering
- tetthet
- Dybder
- utforming
- oppdaget
- Gjenkjenning
- bestemmes
- bestemme
- Utvikling
- enhet
- gJORDE
- forskjellig
- digitalt
- digitalisert
- dimensjoner
- oppdage
- Vise
- avstand
- distribusjon
- dominans
- trukket
- stasjonen
- under
- e
- hver enkelt
- effekter
- energi
- Ingeniørarbeid
- forbedret
- feil
- anslått
- Eter (ETH)
- etikk
- europeisk
- Europaparlamentet
- evaluert
- Selv
- eksempel
- opphisset
- ekskludert
- erfaring
- eksportere
- uttrykte
- øye
- øyne
- vendt
- felt
- Felt
- Fiken
- Figur
- tall
- fylt
- filtrere
- avfyring
- Først
- fikset
- flytur
- Fokus
- fokuserte
- etter
- Til
- skjema
- funnet
- Fjerde
- RAMME
- Frekvens
- fra
- funksjon
- funksjonelle
- fundamental
- Dess
- ge
- GE Healthcare
- generert
- generasjonen
- geometri
- gitt
- Ground
- Gruppe
- veilede
- Hamilton
- hode
- Helse
- helsetjenester
- høyere
- svært
- HTTPS
- menneskelig
- i
- Identifikasjon
- identifisert
- IEEE
- bilder
- Imaging
- viktig
- in
- inkubert
- individuelt
- informasjon
- innledende
- inngang
- instrumenter
- interesse
- involvert
- DET ER
- nøkkel
- laboratorium
- større
- største
- Ventetid
- Law
- lag
- Legends
- Lengde
- Nivå
- slikking
- Life
- Life Sciences
- lett
- linje
- LINK
- knyttet
- lokal
- lokalt
- ligger
- plassering
- steder
- Lang
- så
- laget
- vedlikehold
- større
- manuelt
- kart
- Kart
- Mass
- materiale
- maksimal
- MEA
- betyr
- målinger
- mekanisk
- medium
- Merck
- metode
- mus
- micron
- Mikroskop
- minimum
- blanding
- ML
- Mote
- modell
- MOL
- overvåking
- Måned
- måneder
- munn
- flytting
- MS
- flere
- Mutasjon
- nasjonal
- National Institutes of Health
- Natur
- nettverk
- nettverk
- Nerveceller
- Ny
- neste
- Antall
- Målet
- få
- innhentet
- of
- olympus
- on
- ONE
- åpning
- drift
- rekkefølge
- Annen
- ellers
- over natten
- parametere
- parlamentet
- del
- bestått
- Topp
- utfører
- phoenix
- fysisk
- stykker
- Plasma
- plast
- plato
- Platon Data Intelligence
- PlatonData
- Spille
- plugg inn
- Point
- poeng
- portefølje
- posisjonert
- stillinger
- potensiell
- makt
- Precision
- presentert
- trykk
- press
- prosess
- produsere
- produsert
- program
- egenskaper
- protokollen
- protokoller
- forutsatt
- puls
- pumpe
- Kanin
- hevet
- ROTTE
- Sats
- ratio
- å nå
- nådd
- ekte
- realistisk
- utvinning
- reflektert
- om
- regime
- region
- regioner
- Registrering
- erstattet
- Rapportering
- representert
- forskning
- forskningslaboratorier
- oppløsning
- henholdsvis
- Svare
- svare
- svar
- REST
- restaurering
- gjenopprette
- begrensning
- resulterende
- Retina
- Rise
- Rolle
- rom
- Fres
- s
- samme
- scenario
- planlegge
- SCI
- Vitenskap
- VITENSKAPER
- skript
- Sekund
- sekundær
- seksjoner
- valgt
- selektiv
- Følsomhet
- sensorer
- Sequence
- Serum
- Session
- sesjoner
- sett
- formet
- Sigma
- Signal
- signaler
- Silicon
- lignende
- simulering
- nettstedet
- SIX
- Størrelse
- Skin
- Slice
- liten
- Software
- løsning
- Lyd
- kilde
- romlig
- spesifikk
- spesifisert
- fart
- spike
- pigger
- Spot
- sprer
- Stabler
- Scene
- Standard
- statistisk
- stål
- stimulus
- Studer
- suksess
- overlegen
- overflaten
- suspensjon
- suspensjoner
- byttet om
- system
- Systemer
- tank
- Target
- rettet mot
- Oppgave
- Technologies
- test
- tester
- Det
- De
- Området
- deres
- derfor
- termisk
- Disse
- thompson
- tusener
- tre
- tredimensjonal
- terskel
- Gjennom
- tid
- vev
- til
- Toolbox
- trent
- overføre
- prøve
- forsøk
- Sannhet
- ultralyd
- us
- bruke
- Brukere
- v1
- validert
- verdi
- Verdier
- ventil
- VBA
- Verifisering
- verifisert
- syn
- vivo
- volumet
- W
- Vann
- Wave
- helg
- uker
- vekt
- VI VIL
- hvilken
- hvit
- vinduer
- med
- innenfor
- verden
- skrevet
- zephyrnet