בעלי חיים
הניסויים נערכו בהתאם למדריך המכון הלאומי לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. הפרוטוקולים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית לבעלי חיים (ועדת צ'ארלס דרווין מס' 5, מספרי רישום 9529 ו-26889) ונערכו בהסכמה להנחיה 2010/63/EU של הפרלמנט האירופי. חולדות זכר Long-Evans בגילאי 2 עד 12 חודשים ועכברי WT זכרים (C57BL/6J) בני 9 שבועות התקבלו ממעבדות Janvier; P23H (שורה 1) חולדות מהונדסות ממין זכר (9-22 חודשים) גודלו באופן מקומי.
שיבוט פלסמיד וייצור AAV
פלסמידים המכילים את E. coli mscL רצף בצורת WT ועם המוטציה G22S התקבל מפרנצ'סקו דיפאטו (Addgene plasmides #107454 ו-#107455)28. כדי למקד RGCs, מקדם SNCG31 הוכנס לתוך פלסמיד עמוד שדרה AAV המכיל את mscL רצף התמזג לגן tdTomato ולאות הייצוא Kir2.1 ER, כדי להניע ביטוי בממברנת הפלזמה. וקטור AAV2.7m8 שימש למתן תוך זגוגי. למיקוד נוירונים בשכבות הקורטיקליות V1, מקדם ה-SNCG הוחלף במקדם CamKII ונבחר וקטור AAV9.7m8. AAVs רקומביננטי הופקו בשיטת שיתוף הפלסמיד טרנספקציה, והליזטים שהתקבלו טוהרו על ידי טיהור יודיקסנול31.
גירוי ארה"ב
נעשה שימוש בשלושה מתמרים אמריקאים ממוקדים עם תדרים מרכזיים שונים: 0.50 מגה-הרץ (קוטר, Ø = 1.00 אינץ' = 25.4 מ"מ; מרחק מוקד, f = 1.25 אינץ' = 31.7 מ"מ) (V301-SU, אולימפוס), 2.25 מגה-הרץ (Ø = 0.50 אינץ' = 12.7 מ"מ, f = 1.00 אינץ' = 25.4 מ"מ) (V306-SU, אולימפוס) ו-15.00 מגה-הרץ (Ø = 0.50 אינץ' = 12.7 מ"מ, f = 1.00 אינץ' = 25.4 מ"מ) (V319-SU, אולימפוס), המתאים לפתחים מספריים של F/Ø = 1.25 ו-2.00. שדות אקוסטיים המוקרנים על ידי שלושת המתמרים הממוקדים מוצגים באיור. 1 (סימולציות) ונתונים מורחבים איור. 3 (מדידות נסיוניות). נעשה שימוש ב-TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) להפקת צורת גל הגירוי, שהועברה לאחר מכן דרך מגבר כוח RF 80 dB (VBA 230-80, Vectawave) המחובר למתמר. תפוקות לחץ מתמר (לחץ בפוקוס, מפות לחץ תלת מימדיות (תלת מימד)) נמדדו במיכל מים משוחרר עם אינטרפרומטר Royer–Dieulesaint heterodyne47. לגירויים ארה"ב ששימשו לגירוי ex vivo ו-in vivo היו המאפיינים הבאים: תדירות חזרת פולסים של 1 קילו-הרץ עם מחזור עבודה של 50%, משך צלילים בין 10 ל-200 שניות ומרווח בין-גירוי בין 0.01 ל-2.00 שניות. שיא הלחצים האקוסטיים נעו בין 0.11 ל-0.88 MPa, 0.30 עד 1.60 MPa ו-0.20 עד 1.27 MPa עבור מתמרים 0.50, 2.25 ו-15.00 מגה-הרץ, בהתאמה. ערכי שיא ממוצע הדופק המרחביים המשוערים התואמים (Isppa) היו 0.39-25.14, 2.92-83.12 ו-1.30-52.37 W ס"מ-2.
מסירת גנים תוך-זגוגית והדמיית רשתית
חולדות היו מורדמות48 והשעיה AAV (2 μl), המכילה בין 8 ל-14 × 1010 חלקיקים ויראליים, הוזרק למרכז חלל הזגוגית. חודש לאחר מכן, בוצעה הדמיית פלואורסצנטי tdTomato בעיניים המוזרקות, עם מיקרוסקופ הדמיה ברשתית MICRON IV (Phoenix Research Laboratories) ו-Micron Discover v.2.2.
הקלטות MEA
חלקי רשתית השטחו על ממברנת מסנן (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) והונחו על MEA (קוטר אלקטרודה, 30 מיקרומטר; מרווח, 200 מיקרומטר; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems) מצופה בפולי-l-ליזין (0.1%, סיגמא), עם RGCs מול האלקטרודות31. אנטגוניסט קולטן AMPA/kainate 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), אנטגוניסט הקולטן של NMDA [3H]3-(2-carboxypiperazin-4-yl) propyl חומצה -1-פוספונית (CPP, 10 מיקרומטר, Sigma-Aldrich) ואגוניסט קולטן גלוטמט סלקטיבי מקבוצה III מטאבוטרופית, l-(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), הוחלו באמבט דרך קו הזילוף. גירויי אור סופקו עם תצוגת מיקרו-מראה דיגיטלית (Vialux; רזולוציה, 1,024 × 768) מחוברת למקור אור דיודה פולטת אור לבנה (MNWHL4, Thorlabs) הממוקדת במישור קולטן הפוטו (קרינה, 1 מיקרו-ואט ס"מ-2). מתמרים ארה"ב חוברו עם קונוס צימוד מותאם אישית מלא במים נטולי גז והורכב על במה ממונעת (PT3/M-Z8, Thorlabs) המוצבת בצורה אורתוגונלית מעל הרשתית. האות המשתקף של שבב MEA והרשתית זוהה באמצעות מכשיר מפתח אמריקאי (Lecoeur Electronique). המרחק בין הרשתית למתמר היה שווה לאורך המוקד של המתמר; זה אומת עם זמן הטיסה של האות המשתקף. מהקלטות RGC עם קדם מגבר 252 ערוצים ו-MC_Rack v. 4.6.2 (מערכות מרובות ערוצים), קוצים מוינו עם תוכנת Spyking CIRCUS 0.549. תגובות RGC נותחו עם סקריפטים מותאמים אישית שנכתבו ב-MATLAB (MathWorks 2018b) לסיווג כ-ON, ON-OFF או OFF, עם מדד הדומיננטיות של התגובה50. השהיות חושבו כזמן בין הופעת הגירוי למקסימום של הנגזרת של פונקציית צפיפות הספיקה (SDF). שני מחלקות של תאים מגיבים ל-US זוהו על בסיס חביון - SL ו-LL - על ידי קביעת סף השווה למינימום של התפלגות ההשהיה של התגובות של תאי NT ל-US (45 אלפיות השנייה). קבענו את ערך השיא A של ה-SDF לחישוב משך התגובה, שהוגדר כמרווח הזמן בין שתי נקודות הזמן שעבורן ה-SDF שווה ל- A/e (איפה A הוא שיא דפולריזציה ו e הוא המספר של אוילר). גורם פאנו, מכמת שונות של ספירת ספייק, חושב כיחס בין השונות של ספירת ספייק לממוצע. המרחק האוקלידי בין שני תאים מופעלים שוקל לפי קצב הירי המרבי של התאים. היחס בין מספר התאים המופעלים לגודל השטח המגורה בשבב MEA חושב בהתחשב בגודל של נקודת המוקד האמריקאית עבור 2.25 ו- 15.00 מגה-הרץ וגודל ה-MEA עבור 0.50 מגה-הרץ, מכיוון שנקודת המוקד הייתה גדולה יותר מאשר MEA עבור תדר זה. מרכז התגובה הוערך על ידי שקלול קצב הירי המרבי של כל תא לפי המרחק שלו מתאי תגובה אחרים, ועקירת התגובה חושבה כמרחק האוקלידי בין שני עמדות מרכז תגובה.
זריקות תוך גולגולתיות
מתלי AAV הוזרקו להמיספרה הימנית בשני מיקומים שונים בחולדות (2.6 מ"מ ML, 6.8 מ"מ AP ו-3.1 מ"מ ML, 7.2 מ"מ AP מהברגמה) או במיקום אחד בעכברים (2.5 מ"מ ML, 3.5 מ"מ AP מה-Bregma) גַבַּחַת)48. עבור זריקות חולדות, ההשעיה (200 nl המכילה 0.2-8.0 × 1015 חלקיקים ויראליים) הוזרק בשלושה עומקים שונים (1,100, 1,350 ו-1,500 מיקרומטר ממשטח הקורטיקלי) עם בקר משאבת מזרק מיקרו (Micro4, World Precision Instruments) הפועל בקצב של 50 nl דקות-1 ומזרק 10 µl Hamilton. בעכברים, תרחיף AAV (1 μl המכיל 0.2-8.0 × 1015 חלקיקים ויראליים) הוזרק ב-400 מיקרומטר ממשטח הקורטיקלי בקצב של 100 nl דקות-1.
הקלטות חוץ-תאיות in vivo
חודש לאחר זריקות AAV, קרניוטומיה קטנה (5 × 5 מ"מ2) בוצע מעל V1 בהמיספרה הימנית48. הקרינה של tdTomato נבדקה עם מיקרוסקופ הדמיה ברשתית MICRON IV ו-Micron Discover v. 2.2 (מעבדות המחקר של פניקס). מערך אלקטרודות µEcog של 32 אתרים (קוטר אלקטרודה, 30 מיקרון; מרווח אלקטרודות, 300 מיקרון; FlexMEA36, MultiChannel Systems) הוצב מעל האזור שעבר טרנספקציה או באזור דומה עבור חולדות בקרה. הקלטות MEA בוצעו עם מיקרו-פרובי סיליקון של 16 אתרים שהוטה ב-45° אל פני המוח (קוטר האלקטרודה, 30 מיקרומטר; מרווח, 50 מיקרומטר; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) ו-MC_Rack v. 4.6.2. ה-MEA הועבר 1,100 מיקרומטר לתוך קליפת המוח עם מיקרומניפולטור בעל שלושה צירים (Sutter Instruments). מתמרים ארה"ב חוברו למוח עם קונוס צימוד מותאם אישית מלא במים מנוגרים וג'ל US על במה ממונעת. המרחק בין הקורטקס למתמר היה שווה לאורך המוקד של המתמר. גירויים חזותיים נוצרו על ידי דיודה פולטת אור לבן (MNWHL4, Thorlabs) הממוקמת במרחק של 15 ס"מ מהעין (4.5 mW cm)-2 בקרנית). ההקלטות עברו דיגיטציה עם מגברים של 32 ערוצים ו-16 ערוצים (דגם ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). הקלטות µEcog נותחו עם סקריפטים של MATLAB שפותחו בהתאמה אישית והקלטות MEA נותחו עם תוכנת Spyking CIRCUS ותסריטי MATLAB שפותחו בהתאמה אישית. משך התגובה חושב כמרווח בין שתי נקודות הזמן שבהן הפוטנציאל המתעורר בקליפת המוח שווה ל A/e. האזור המופעל הוגדר כאזור של מפת ההפעלה של פסאודו-צבע שמעליו חורג דה-פולריזציה שיא מרמת רעשי הרקע המחושבת כ-2 × sd של האות. מרכז התגובה נאמד על ידי שקלול שיא דה-פולריזציה של כל אלקטרודה לפי המרחק שלה מהאלקטרודות האחרות. התזוזה היחסית שלו בעת הזזת המתמר האמריקאי חושבה כמרחק האוקלידי של שני העמדות. עבור הקלטות תוך קורטיקליות, חביון התא נאמד כזמן בין הופעת הגירוי למקסימום של הנגזרת של SDF.
ניתוח לבדיקות התנהגותיות in vivo
לעכברי C57BL6J הוזרק תת עורי עם בופרנורפין (0.05 מ"ג ק"ג-1) (Buprécare, Axience), ודקסמתזון (0.7 מ"ג ק"ג-1) (Dexazone, Virbac). בעלי חיים הורדמו עם איזופלורן (5% אינדוקציה ו-2% תחזוקה, בתערובת אוויר/חמצן) והראש גולח ונוקה בתמיסת חיטוי. ראשם של בעלי חיים נקבעו על מסגרת סטריאוטקטית עם מערכת אספקת איזופלורן ומשחת עיניים, ורקמה שחורה הונחה על העיניים. טמפרטורת הגוף נשמרה על 37 מעלות צלזיוס. לאחר הזרקה מקומית של לידוקאין (4 מ"ג ק"ג-1) (Laocaïne, Centravet), נעשה חתך על העור. שני ברגים תובעו בגולגולת, לאחר קרניוטומיה קטנה (כ-5.0 × 5.0 מ"מ2) בוצעה מעל V1 בחצי הכדור הימני (מקדח פלדה 0.5 מ"מ) והוחל חיץ קליפת המוח. קליפת המוח כוסתה ביריעת פלסטיק TPX (עובי 125 מיקרומטר) ואטומה בצמנט אקרילי דנטלי (Tetric Evoflow). עבור ניסויים התנהגותיים, מוט ראש מתכתי (PhenoSys) לקיבוע הראש הודבק לאחר מכן לגולגולת בחצי הכדור השמאלי עם צמנט דנטלי (FujiCEM 2). בעלי חיים הוכנסו לתא התאוששות, עם הזרקה תת עורית של סרום פיזיולוגי ומשחה לעיניים (אופטלון, Centravet). בופרנורפין הוזרק במהלך ניטור לאחר הניתוח.
בדיקות התנהגות של עכברים
עכברים הוכנסו ללוח זמנים של הגבלת מים עד שהגיעו לכ-80-85% ממשקלם. בעקבות התרגלות לתנאי הבדיקה36, עכברים אומנו להגיב ל-LS על ידי ביצוע משימת זיהוי מרצון: ליקוק זרבובית מים (מחט קהה בגודל 18, כ-5 מ"מ מהפה) בתגובה לגירוי בשדה מלא של אור לבן (200 ו-50 אלפיות השנייה) של העין השמאלית (מורחבת עם tropicamide, Mydriaticum Dispersa) מעל 35 ניסויים לכל משך גירוי ולכן 70 ניסויים ביום. מים (~4 μl) הוזרמו אוטומטית 500 שניות לאחר הדלקת האור, דרך מערכת מים מכוילת. הפרוטוקול ההתנהגותי וזיהוי הליקוקים נשלטו על ידי מערכת מותאמת אישית36. בארבעת הימים הבאים (הפסקה של יומיים במהלך סוף השבוע), גירויים בארה"ב סופקו ב-V1 למשך 50 אלפיות השנייה בשלושה ערכי לחץ שונים (0.2, 0.7 ו-1.2 MPa). ערכי לחץ אלו סופקו בסדר שונה בכל יום (35 ניסויים כל אחד). מרווחי הביניים השתנו באופן אקראי ונעו בין 10 ל-30 שניות. מתמר US 15 מגה-הרץ הוצמד למוח עם קונוס צימוד בהתאמה אישית מלא במים וג'ל אמריקאי. שיעור ההצלחה חושב על ידי ספירת מספר הניסויים בהם ביצעו העכברים ליקוקים מקדימים (בין הופעת הגירוי לפתיחת שסתום המים). שיעור הליקוק המצפה (איור. 6e) עבור המפגש חושב על ידי חיסור משיעור הליקוק המצופה של ניסוי, קצב הליקוק הספונטני (מחושב על כל חלונות הזמן של 1 שניות לפני כל תחילת גירוי בודד (איור XNUMX). 6a) לכל הניסויים) והכפלה בשיעור ההצלחה. זמן החביון ללקק חושב על ידי קביעת הזמן עד ללקק המצפה הראשון לאחר תחילת הגירוי. העכברים שנשמרו לניתוח הציגו שיעור הצלחה גבוה או שווה ל-60% ביום הרביעי לאחר LS. לאחר מכן, פגישות קלות או ארה"ב שהראו התנהגות ליקוק כפייתית לא נכללו בהתבסס על זיהוי החריגים שנעשה בשיטת ROUT (Q = 1%) על שיעור הליקוק הספונטני של הפגישה בממוצע של המדידות בכל הניסויים של הפגישה בחלון הזמן של 1 שניות לפני תחילת הגירוי של הניסיון.
אימונוהיסטוכימיה והדמיה קונפוקלית
דגימות הודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס עם נוגדן אנטי-RBPMS חד שבטי (1:500, ארנב; ABN1362, Merck Millipore) עבור הרשתית31, עם נוגדן אנטי-NeuN חד שבטי (1:500, עכבר, שיבוט A60; MAB377, Merck Millipore) עבור קטעי מוח48. לאחר מכן הדגירה המקטעים עם נוגדנים משניים מצומדים עם Alexa Fluor 488 (1:500, חמור נגד עכבר וחמור נגד ארנב IgG 488, polyclonal; A-21202 ו-A-21206, Invitrogen, בהתאמה) ו-DAPI (1:1,000 ; D9542, Merck Millipore) למשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. מיקרוסקופ קונפוקאלי של Olympus FV1 עם אובייקטיבי ×1000 (UPLSAPO 20XO עם צמצם מספרי של 20) שימש לרכישת תמונות של רשתיות שטוחות וחתכי מוח (תוכנת FV0.85-ASW v. 10).
בתמונות הקונפוקאליות שעובדו עם פיג'י (ImageJ v. 1.53q), תאים חיוביים RBPMS ו-NeuN נספרו אוטומטית עם התוסף 'נתח חלקיקים'. התאים נספרו ידנית על ידי שני משתמשים שונים, עם התוסף 'מונה תאים'. הכימות בוצע על ידי רכישת ערימות קונפוקאליות לפחות בארבעה אזורים שנבחרו באקראי של 0.4 מ"מ.2 (נתוני נתונים מורחבים). 1). עבור נוירונים V1, פרוסת המוח הסגיטלית עם אזור הקרינה הגדול ביותר של tdTomato נבחרה עבור כל חיה. אזור של עניין הוגדר באופן ידני ב-V1 והכימות בוצעו לפחות בשישה אזורים שנבחרו באקראי של 0.4 מ"מ2.
סימולציות של חימום רקמות הנגרמות על ידי ארה"ב
נעשה שימוש בתהליך משולש להערכת השפעות תרמיות: (1) הדמיה של השדות האקוסטיים שנוצרו על ידי שלושת המתמרים, עם פרמטרים אקוסטיים מציאותיים; (2) אימות שאקוסטיקה לא ליניארית לא מילאה תפקיד חשוב בהעברת חום; וכן (3) סימולציות מציאותיות של העברת חום ועליית טמפרטורה שנגרמה במוקד על ידי ארה"ב במשטר ליניארי עבור הפרמטרים המשמשים במחקר זה.
עבור סימולציות לא ליניאריות, השתמשנו בארגז הכלים k-Wave של MATLAB על ידי הגדרת הגיאומטריה של המתמר בתלת מימד ושימוש בפרמטרים הבאים עבור מדיום ההתפשטות (מים): מהירות קול, c = 1,500 מ' שניות-1; מסה נפחית, ρ = 1,000 ק"ג מ'-3; מקדם אי-לינאריות, B/A = 5; מקדם הנחתה, α = 2.2 × 10-3 dB ס"מ-1 מגהרץ-y; חוק הספק התדר של מקדם הנחתה, y = 2 (נ.צ. 51). דימיינו שדות גל תלת-ממדיים כמו-מונוכרומטיים באמצעות פרצים ארוכים של 3 מחזורים; זה נתן לנו את שדה הלחץ המקסימלי בתלת מימד, כמו גם את צורת הגל במוקד. סימולציות כיוולו על ידי התאמת לחץ הכניסה (עירור של המתמר המדומה) כדי להגיע ללחץ במוקד הנמדד במיכל המים עם מתמרים אמיתיים. הרוחב המלא בקוטר נקודת המוקד בחצי המקסימום (FWHM). x-y המישור היה 4.360, 1.610 ו-0.276 מ"מ, ואורך הציר הראשי ב- x-z המישור היה 32.3, 20.6 ו-3.75 מ"מ עבור מתמרים 0.50, 2.25 ו-15.00 מגה-הרץ, בהתאמה (איור. 1ב-ד). השפעות לא ליניאריות הוערכו על ידי הערכת התוכן ההרמוני היחסי של צורת הגל במוקד. בדוגמה של מתמר מיקוד 15 מגה-הרץ באיור. 1d, האותות הניסויים והמדומה בנקודת המוקד הושוו ונמצאו כקונקורנטיים ביותר (איור מורחב נתונים. 4a). יתר על כן, משרעת ההרמונית השנייה היא 19.8 dB מתחת לבסיס (20.9 dB במקרה המדומה), כלומר אם האנרגיה הבסיסית היא E, להרמונית השנייה יש אנרגיה E/95 (נתונים מורחבים איור. 4b). לכן, אנו יכולים להזניח באופן סביר את ההשפעות הלא ליניאריות בחישובים של ההשפעות התרמיות, שכן הן מהוות ~1% מהאנרגיה המעורבת. אותן מסקנות הוסקו ב-0.5 מגה-הרץ ו-15.0 מגה-הרץ. קירובי התפשטות גל ליניארי הפחיתו במידה ניכרת את עלות המחשוב של ההדמיות. הדמיות התפשטות ליניאריות נערכו עם ארגז הכלים Field II ב- MATLAB52,53, במצב מונוכרומטי, עם אותם מאפיינים בינוניים כמו k-Wave (מים), כדי לקבל את שדות הלחץ המרבי התלת-ממדיים. שדות הלחץ המרבי הללו שימשו לבניית מונח מקור חימום (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), שם αnp הוא מקדם הקליטה של המוח בתדר הנחשב (59.04 Np m-1 ב-15 מגה-הרץ, מחושב מתוך αמוֹחַ = 0.21 dB ס"מ-1 מגהרץ-y ו y = 1.18), המסה הנפחית של המוח ρמוֹחַ = 1,046 ק"ג מ'-3, מהירות צליל המוח cמוֹחַ = 154 שניות-1 ו pמקסימום הוא שדה הלחץ המקסימלי התלת-ממדי. מונח מקור זה שימש אז ברזולוציה של משוואת חום ביולוגי של פן (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}left({K_mathrm{t}timesnabla T} מימין) – rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}שמאל ({T – T_mathrm{a}} מימין) + Q) ב-k-Wave, איפה Cמוֹחַ הוא קיבולת החום הסגולית לדם (3,630 J kg-1 מעלות צלזיוס-1), Kt היא המוליכות התרמית של המוח (0.51 W m-1 מעלות צלזיוס-1), ρדם היא צפיפות הדם (1,050 ק"ג מ'-3), Cדם הוא קיבולת החום הסגולית לדם (3,617 J kg-1 מעלות צלזיוס-1), Pדם הוא מקדם זלוף הדם (9.7 × 10-3 s-1), Ta היא הטמפרטורה בעורקים (37 מעלות צלזיוס), Q = QUS + ρמוֹחַγמוֹחַ ו γמוֹחַ הוא ייצור החום של רקמת המוח (11.37 ואט ק"ג-1) (שו"ת 54,55). התנאי ההתחלתי לטמפרטורת המוח נקבע ל T0 = 37 מעלות צלזיוס.
סימולציה זו תואמת את התרחיש הגרוע ביותר לגבי עליית הטמפרטורה הנתונה. (1) ההתפשטות האקוסטי מדומה במים בלבד (ערך לא מופחת), עם מקדם הנחתה נמוך יותר (2.2 × 10-3 dB cm MHz-2.00) מאשר המוח (0.59 dB cm MHz-1.27), גם אם חלק מההתפשטות מתרחש בתוך המוח. ה pמקסימום לכן, מפות מוערכות יתר על המידה. (2) ספיגה תרמית מדומה ברקמת המוח בלבד, עם מקדם ספיגה גבוה יותר (0.21 dB cm MHz)-1.18) מאשר מים, גם אם חלק משדה הלחץ המרבי נמצא למעשה בתוך המים של חרוט הצימוד האקוסטי. לָכֵן, QUS מוערך מעט מדי. מיפינו את הטמפרטורה בשלושה ממדים מרחביים וזמן, וחיפשנו את נקודת עליית הטמפרטורה המקסימלית (איור מורחב נתונים. 4ג-ו).
ניתוח סטטיסטי
ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת Prism (Prism 9, GraphPad). הערכים מבוטאים ומוצגים כערכים ממוצעים ± טעות תקן של הממוצע (sem) באיורים ובטקסט, אלא אם צוין אחרת. הנתונים נותחו ב-Welch's לא מזווג t-בדיקות (שני זנבות) או כפולה לא מזווגת t-בדיקה עם תיקון Sidak–Bonferroni להשוואות מרובות. מבחנים סטטיסטיים מסופקים באגדות הדמויות.
סיכום הדיווח
מידע נוסף על עיצוב המחקר זמין ב סיכום דיווח תיקי טבע מקושר למאמר זה.
- הפצת תוכן ויחסי ציבור מופעל על ידי SEO. קבל הגברה היום.
- Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. ידע מוגבר. גישה כאן.
- מקור: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :הוא
- ][עמ'
- $ למעלה
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- מֵעַל
- אקדמי
- נצפה
- פי
- חֶשְׁבּוֹן
- לרכוש
- רכישה
- הפעלה
- פעילות
- למעשה
- מתקדם
- לאחר
- זקן
- הסכם
- AL
- Alexa
- תעשיות
- מאפשר
- אנליזה
- עוגן
- ו
- בעלי חיים
- בעלי חיים
- נוגדנים
- יישומית
- מאושר
- בערך
- ARE
- AREA
- מערך
- מאמר
- AS
- הערכה
- At
- אוגוסט
- באופן אוטומטי
- זמין
- מְמוּצָע
- ממוצעת
- צִיר
- עמוד שדרה
- מבוסס
- בסיס
- BE
- כי
- לפני
- להלן
- בֵּין
- שחור
- דם
- גוּף
- מוֹחַ
- לשבור
- חיץ
- לִבנוֹת
- by
- מחושב
- CAN
- קיבולת
- אשר
- מקרה
- תאים
- מֶרכָּזִי
- מֶרְכָּז
- תָא
- ערוץ
- מאפיינים
- צ'ארלס
- שבב
- נבחר
- כיתות
- מיון
- קליק
- הוועדה
- לעומת
- מַקִיף
- מחשוב
- מצב
- מנוהל
- מוליכות
- מחובר
- נחשב
- בהתחשב
- תוכן
- לִשְׁלוֹט
- נשלט
- בקר
- תוֹאֵם
- מתכתב
- עלות
- יחד
- מכוסה
- מנהג
- מחזור
- מחזורי
- נתונים
- מסד נתונים
- יְוֹם
- ימים
- מוגדר
- הגדרה
- נתן
- מסירה
- צפיפות
- עומקים
- עיצוב
- זוהה
- איתור
- נחוש
- קביעה
- צעצועי התפתחות
- מכשיר
- DID
- אחר
- דיגיטלי
- דיגיטציה
- ממדים
- לגלות
- לְהַצִיג
- מרחק
- הפצה
- שליטה
- נמשך
- נהיגה
- בְּמַהֲלָך
- e
- כל אחד
- תופעות
- אנרגיה
- הנדסה
- משופר
- שגיאה
- מוערך
- Ether (ETH)
- אתיקה
- אֵירוֹפִּי
- פרלמנט אירופי
- העריך
- אֲפִילוּ
- דוגמה
- נרגש
- נשלל
- ניסיון
- יצוא
- ביטא
- עין
- עיניים
- מול
- שדה
- שדות
- תאנה
- תרשים
- דמויות
- ממולא
- לסנן
- ירי
- ראשון
- קבוע
- טיסה
- להתמקד
- מרוכז
- הבא
- בעד
- טופס
- מצא
- רביעית
- מסגרת
- תדר
- החל מ-
- פונקציה
- פונקציונלי
- יסודי
- יתר על כן
- ge
- GE Healthcare
- נוצר
- דור
- גאומטריה
- נתן
- קרקע
- קְבוּצָה
- מדריך
- המילטון
- ראש
- בְּרִיאוּת
- בריאות
- גבוה יותר
- מאוד
- HTTPS
- בן אנוש
- i
- הזדהות
- מזוהה
- IEEE
- תמונות
- הדמיה
- חשוב
- in
- דגירה
- בנפרד
- מידע
- בתחילה
- קלט
- מכשירים
- אינטרס
- מעורב
- שֶׁלָה
- מפתח
- מעבדה
- גדול יותר
- הגדול ביותר
- חֶבִיוֹן
- חוק
- שכבות
- אגדות
- אורך
- רמה
- תבוסה
- החיים
- מדעי חיים
- אוֹר
- קו
- קשר
- צמוד
- מקומי
- באופן מקומי
- ממוקם
- מיקום
- מקומות
- ארוך
- נראה
- עשוי
- תחזוקה
- גדול
- באופן ידני
- מַפָּה
- מפות
- מסה
- חוֹמֶר
- מקסימום
- MEA
- משמעות
- מידות
- מֵכָנִי
- בינוני
- מרק
- שיטה
- עכברים
- מיקרון
- מיקרוסקופ
- מינימום
- תַעֲרוֹבֶת
- ML
- מצב
- מודל
- MOL
- ניטור
- חוֹדֶשׁ
- חודשים
- פה
- נע
- MS
- מספר
- מוטציה
- לאומי
- המכונים הלאומיים לבריאות
- טבע
- רשת
- רשתות
- נוירונים
- חדש
- הבא
- מספר
- מטרה
- להשיג
- מושג
- of
- OLYMPUS
- on
- ONE
- פתיחה
- פועל
- להזמין
- אחר
- אַחֶרֶת
- בין לילה
- פרמטרים
- פרלמנט
- חלק
- עבר
- שִׂיא
- ביצוע
- פניקס
- גופני
- חתיכות
- פלזמה
- פלסטי
- אפלטון
- מודיעין אפלטון
- אפלטון נתונים
- לְשַׂחֵק
- חיבור
- נקודה
- נקודות
- תיק עבודות
- מיקום
- עמדות
- פוטנציאל
- כּוֹחַ
- דיוק
- מוצג
- ללחוץ
- לחץ
- תהליך
- לייצר
- מיוצר
- תָכְנִית
- נכסים
- פרוטוקול
- פרוטוקולים
- ובלבד
- דופק
- לִשְׁאוֹב
- ארנב
- מורם
- דרג
- ציון
- יחס
- לְהַגִיעַ
- הגיע
- ממשי
- מציאותי
- התאוששות
- משתקף
- בדבר
- משטר
- באזור
- אזורים
- הַרשָׁמָה
- החליף
- דווח
- מיוצג
- מחקר
- מעבדות מחקר
- החלטה
- בהתאמה
- להגיב
- להגיב
- תגובה
- REST
- שחזור
- שחזור
- הגבלה
- וכתוצאה מכך
- רשתית
- לעלות
- תפקיד
- חֶדֶר
- מסלול
- s
- אותו
- תרחיש
- לוח זמנים
- SCI
- מדע
- מדעים
- סקריפטים
- שְׁנִיָה
- משני
- סעיפים
- נבחר
- סֶלֶקטִיבִי
- רְגִישׁוּת
- חיישנים
- רצף
- נַסיוֹב
- מושב
- הפעלות
- סט
- מְעוּצָב
- סיגמא
- לאותת
- אותות
- סיליקון
- דומה
- הדמיה
- אתר
- שישה
- מידה
- עור
- פרוסה
- קטן
- תוכנה
- פִּתָרוֹן
- קול
- מָקוֹר
- מרחבית
- ספציפי
- מפורט
- מְהִירוּת
- דָרְבָּן
- קוצים
- מסחרי
- הפצת
- ערימות
- התמחות
- תֶקֶן
- סטטיסטי
- פְּלָדָה
- גירוי
- לימוד
- הצלחה
- מעולה
- משטח
- הַשׁעָיָה
- המתלים
- עבר
- מערכת
- מערכות
- טנק
- יעד
- מיקוד
- המשימות
- טכנולוגיות
- מבחן
- בדיקות
- זֶה
- השמיים
- האזור
- שֶׁלָהֶם
- לכן
- תרמי
- אלה
- תומפסון
- אלפים
- שְׁלוֹשָׁה
- תלת-ממדי
- סף
- דרך
- זמן
- רקמות
- ל
- ארגז כלים
- מְאוּמָן
- להעביר
- מִשׁפָּט
- ניסויים
- אמת
- אולטרסאונד
- us
- להשתמש
- משתמשים
- v1
- תוקף
- ערך
- ערכים
- שסתום
- VBA
- אימות
- מְאוּמָת
- חזון
- vivo
- נפח
- W
- מים
- גל
- בסוף השבוע
- שבועות
- מִשׁקָל
- טוֹב
- אשר
- לבן
- חלונות
- עם
- בתוך
- עוֹלָם
- כתוב
- זפירנט