Állatok
A kísérleteket a National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) című dokumentumának megfelelően végezték. A jegyzőkönyveket a Helyi Állat-etikai Bizottság hagyta jóvá (Charles Darwin 5. bizottság, lajstromszám: 9529 és 26889), és az Európai Parlament 2010/63/EU irányelvével összhangban dolgozták ki. A 2 és 12 hónap közötti hím Long–Evans patkányokat és a 57 hetes WT hím egereket (C6BL/9J) a Janvier Laboratories cégtől szereztük be; P23H (1. vonal) hím transzgenikus patkányokat (9-22 hónap) helyileg neveltünk.
Plazmid klónozás és AAV termelés
A plazmidok, amelyek a E. coli mscL a WT formájú és G22S mutációt tartalmazó szekvenciát Francesco Difato-tól szereztük be (Addgene plazmidok #107454 és #107455)28. Az RGC-k megcélzásához az SNCG-promoter31 -ot tartalmazó AAV-váz plazmidba inszertáltuk mscL szekvencia fuzionált a tdTomato génhez és a Kir2.1 ER export szignálhoz, hogy a plazmamembránon expresszálják. AAV2.7m8 vektort alkalmaztunk az intravitreális bejuttatáshoz. A V1 kérgi rétegekben lévő neuronok célba juttatásához az SNCG promotert a CamKII promoterre cseréltük, és egy AAV9.7m8 vektort választottunk. A rekombináns AAV-ket plazmidos kotranszfekciós módszerrel állítottuk elő, és a kapott lizátumokat jodixanollal tisztítottuk.31.
Amerikai ösztönzés
Három különböző központi frekvenciájú, fókuszált US átalakítót használtak: 0.50 MHz (átmérő, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; fókusztávolság, f = 1.25″ = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) és 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), ami a numerikus rekesznyílásoknak felel meg F/Ø = 1.25 és 2.00. Az e három fókuszált jelátalakító által kisugárzott akusztikus terek az ábrán láthatók. 1 (szimulációk) és Extended Data Fig. 3 (kísérleti mérések). Egy TiePie Handyscope-ot (HS5, TiePie Engineering) használtak az ingerhullámforma előállításához, amelyet azután a jelátalakítóhoz csatlakoztatott 80 dB-es RF teljesítményerősítőn (VBA 230-80, Vectawave) vezettek át. A jelátalakító nyomáskimeneteit (fókuszban lévő nyomás, háromdimenziós (3D) nyomástérképek) gáztalanított víztartályban mértük Royer-Dieulesaint heterodin interferométerrel.47. Az ex vivo és in vivo stimulációhoz használt US ingerek a következő jellemzőkkel rendelkeztek: 1 kHz impulzusismétlési frekvencia 50%-os munkaciklus mellett, a szonikáció időtartama 10 és 200 ms között, az interstimulus intervallum pedig 0.01 és 2.00 s között volt. Az akusztikus csúcsnyomások 0.11 és 0.88 MPa, 0.30 és 1.60 MPa és 0.20 és 1.27 MPa között voltak a 0.50, 2.25 és 15.00 MHz-es átalakítóknál. A megfelelő becsült térbeli csúcsimpulzus-intenzitás (Isppa) értéke 0.39-25.14, 2.92-83.12 és 1.30-52.37 W cm-2.
Intravitreus génbejuttatás és retina képalkotás
A patkányokat elaltatták48 és AAV szuszpenzió (2 µl), amely 8 és 14 × 10 közötti mennyiséget tartalmaz10 vírusrészecskéket fecskendeztek be az üvegtest üregének közepébe. Egy hónappal később a befecskendezett szemeken tdTomato fluoreszcens képalkotást végeztünk MICRON IV retina leképező mikroszkóppal (Phoenix Research Laboratories) és Micron Discover v.2.2-vel.
MEA felvételek
A retinadarabokat szűrőmembránon (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) lapítottuk, és poli-MEA-ra (elektródátmérő, 30 µm; távolság, 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems) helyeztük.l-lizin (0.1%, Sigma), az RGC-k az elektródák felé néznek31. AMPA/kainát glutamát receptor antagonista 6-ciano-7-nitrokinoxalin-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), az NMDA glutamát receptor antagonista [3H]3-(2-karboxipiperazin-4-il)propil -1-foszfonsav (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) és szelektív, III. csoportba tartozó metabotrop glutamát receptor agonista, l-(+)-2-amino-4-foszfono-vajsavat (LAP4, 50 µM, Tocris Bioscience) alkalmaztunk a perfúziós vezetéken keresztül. A fényingereket digitális mikrotükör kijelzővel (Vialux; felbontás, 1,024 × 768) adtuk, amely fehér fénykibocsátó dióda fényforráshoz (MNWHL4, Thorlabs) volt kapcsolva, a fotoreceptor síkjára fókuszálva (besugárzás, 1 µW cm-2). Az US jelátalakítókat egyedi készítésű, gázmentesített vízzel töltött kapcsolókúppal kapcsoltuk, és a retina fölé merőlegesen elhelyezett motorizált tárgyasztalra (PT3/M-Z8, Thorlabs) szereltük fel. A MEA chip és a retina visszavert jelét egy US-kulcsos eszközzel (Lecoeur Electronique) detektáltuk. A retina és a jelátalakító közötti távolság egyenlő volt a jelátalakító fókusztávolságával; ezt a visszavert jel repülési idejével igazoltuk. A 252 csatornás előerősítővel és az MC_Rack v. 4.6.2-vel (MultiChannel Systems) készült RGC felvételek közül a csúcsokat a Spyking CIRCUS 0.5 szoftverrel rendeztük49. Az RGC-válaszokat MATLAB-ban (MathWorks 2018b) írt egyéni szkriptekkel elemeztük, hogy BE, BE-KI vagy KI kategóriába sorolhassák, a válaszdominancia index segítségével.50. A késleltetéseket az inger kezdete és a tüskedenzitás függvény (SDF) deriváltjának maximuma közötti időként számítottuk ki. Az US-re válaszoló sejtek két osztályát azonosították a látencia alapján – SL-t és LL-t – az NT-sejtek US-re adott válaszainak látenciaeloszlásának minimumával megegyező küszöbérték rögzítésével (45 ms). Meghatároztuk a csúcsértéket A az SDF-ből a válaszidő kiszámításához, amelyet a két időpont közötti időintervallumként határoztak meg, amelyre az SDF egyenlő volt A/e (hol A a csúcsdepolarizáció és e az Euler-szám). A tüskeszám variabilitását számszerűsítő Fano-tényezőt a tüskeszám varianciájának az átlaghoz viszonyított arányaként számítottuk ki. A két aktivált sejt közötti euklideszi távolságot a sejtek maximális tüzelési sebességének megfelelően súlyoztuk. Az aktivált sejtek számának és a MEA chipen stimulált terület méretének arányát az USA fókuszpontjának 2.25 és 15.00 MHz-en, valamint a MEA méretének 0.50 MHz-en történő figyelembevételével számítottuk ki, mivel a fókuszpont nagyobb volt. mint a MEA erre a frekvenciára. A válasz középpontját úgy becsültük meg, hogy az egyes cellák maximális tüzelési sebességét súlyoztuk a többi reagáló sejttől való távolságával, és a válasz elmozdulását a két válaszközéppont közötti euklideszi távolságként számítottuk ki.
Intrakraniális injekciók
Az AAV szuszpenziókat patkányoknál két különböző helyre (2.6 mm ML, 6.8 mm AP és 3.1 mm ML, 7.2 mm AP a bregmától) vagy egy helyre egerekben (2.5 mm ML, 3.5 mm AP a bregmától) fecskendezték be a jobb agyféltekébe bregma)48. Patkányinjekciókhoz a szuszpenzió (200 nl, amely 0.2–8.0 × 1015 vírusrészecskéket) három különböző mélységben (1,100, 1,350 és 1,500 µm-re a kortikális felülettől) fecskendezték be egy mikrofecskendős pumpavezérlővel (Micro4, World Precision Instruments), amely 50 nl perc sebességgel működött.-1 és 10 µl-es Hamilton fecskendőt. Egerekben az AAV szuszpenzió (1 µl, amely 0.2–8.0 × 1015 vírusrészecskék) 400 µm-re injektáltuk a kérgi felülettől 100 nl perc sebességgel.-1.
In vivo extracelluláris felvételek
Egy hónappal az AAV injekciók után egy kis koponyavágás (5 × 5 mm2) a V1 felett a jobb féltekén történt48. A tdTomato fluoreszcenciáját MICRON IV retina leképező mikroszkóppal és Micron Discover v. 2.2-vel (Phoenix Research Laboratories) ellenőriztük. Egy 32 helyű µEcog elektródasort (elektródátmérő, 30 µm; elektródák távolsága, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) helyeztünk el a transzfektált régió fölé vagy egy hasonló zónába a kontroll patkányok számára. A MEA felvételeket 16 helyű szilícium mikroszondával végeztük, amelyet 45°-ban megdöntöttünk az agy felszínéhez képest (elektródátmérő, 30 µm; távolság, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) és MC_Rack v. 4.6.2. A MEA-t háromtengelyes mikromanipulátorral (Sutter Instruments) 1,100 µm-re továbbítottuk a kéregbe. Az US transzducereket az agyhoz egy egyedi készítésű, gáztalanított vízzel és US géllel töltött kapcsolókúppal csatlakoztatták egy motorizált színpadon. A kéreg és a transzducer közötti távolság megegyezett a transzducer fókusztávolságával. A vizuális ingereket a szemtől 4 cm-re (15 mW cm) elhelyezett fehér fénnyel kollimált fénykibocsátó dióda (MNWHL4.5, Thorlabs) generálta.-2 a szaruhártyánál). A felvételeket 32 csatornás és 16 csatornás erősítőkkel digitalizáltuk (ME32/16-FAI-μPA modell, MultiChannel Systems). A µEcog felvételeket egyedi fejlesztésű MATLAB szkriptekkel, a MEA felvételeket pedig Spyking CIRCUS szoftverrel és egyedi fejlesztésű MATLAB szkriptekkel elemeztük. A válasz időtartamát a két időpont közötti intervallumként számítottuk ki, amikor a kéreg által kiváltott potenciál egyenlő volt A/e. Az aktivált területet a pszeudoszín aktiválási térkép azon területeként határoztuk meg, amelyen a depolarizáció csúcsa meghaladta a jel 2 × sd-jeként számított háttérzaj szintet. A válaszközpontot úgy becsültük meg, hogy az egyes elektródák csúcsdepolarizációját súlyoztuk a többi elektródától való távolságával. Relatív elmozdulását az US jelátalakító mozgatásakor a két pozíció euklideszi távolságaként számítottuk ki. Az intrakortikális felvételeknél a sejtlatenciát az inger kezdete és az SDF származékának maximuma közötti időként becsültük.
Műtét in vivo viselkedési teszteléshez
C57BL6J egereket szubkután injektáltunk buprenorfinnal (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) és dexametazon (0.7 mg kg-1) (Dexazon, Virbac). Az állatokat izofluránnal érzéstelenítettük (5% indukció és 2% karbantartás, levegő/oxigén keverékben), majd a fejüket leborotválták és antiszeptikus oldattal megtisztították. Az állatok fejét sztereotaktikus keretre rögzítettük izoflurán adagoló rendszerrel és szemkenőccsel, és fekete szövetet helyeztünk a szemekre. A testhőmérsékletet 37 °C-on tartottuk. Helyi lidokain injekció után (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), bemetszést végeztek a bőrön. Két csavart rögzítettek a koponyában egy kis koponyavágás után (körülbelül 5.0 × 5.0 mm)2) a jobb féltekén V1 felett végeztük (0.5 mm-es acélfúró), és cortex puffert alkalmaztunk. A kéreget TPX műanyag fóliával (125 µm vastag) borították, és fogászati akrilcementtel (Tetric Evoflow) lezárták. A viselkedési kísérletekhez a fej rögzítésére szolgáló fém fejlécet (PhenoSys) ezután fogászati cementtel (FujiCEM 2) ragasztottak a koponyához a bal féltekén. Az állatokat egy gyűjtőkamrába helyeztük, fiziológiás szérum és kenőcs szubkután injekciójával a szembe (Ophtalon, Centravet). A műtét utáni monitorozás során buprenorfint adtak be.
Egér viselkedési tesztek
Az egereket vízkorlátozási programba helyezték, amíg el nem érték a súlyuk körülbelül 80-85%-át. A tesztkörülményekhez való szoktatást követően36, az egereket megtanították arra, hogy válaszoljanak egy LS-re egy önkéntes észlelési feladat végrehajtásával: egy vízköpő nyalogatása (tompa, 18 gauge tű, körülbelül 5 mm-re a szájtól) válaszul fehér fényű, teljes mezős stimulációra (200 és 50 ms hosszú) a bal szem (tropikamiddal tágítva, Mydriaticum Dispersa) több mint 35 kísérletben stimulációnként, tehát napi 70 kísérletben. A víz (~4 μl) a lámpa felkapcsolása után 500 ms-mal automatikusan kiadagolásra került egy kalibrált vízrendszeren keresztül. A viselkedési protokollt és a nyalásérzékelést egyedileg készített rendszer vezérelte36. A következő négy napon (kétnapos szünet a hétvégén) az US stimulációkat a V1-en 50 ms-on keresztül három különböző nyomásértéken (0.2, 0.7 és 1.2 MPa) végezték. Ezeket a nyomásértékeket minden nap más sorrendben adtuk le (mindegyik 35 kísérlet). A kísérletek közötti intervallumok véletlenszerűen változtak, és 10 és 30 másodperc között változtak. A 15 MHz-es US transzducert az agyhoz egy egyedi készítésű, vízzel és US géllel töltött kapcsolókúppal kötötték. A sikerességi arányt úgy számítottuk ki, hogy megszámoltuk azoknak a kísérleteknek a számát, amelyekben az egerek megelőző nyalásokat végeztek (az inger kezdete és a vízszelep nyitása között). A várható nyalási arány (ábra). 6e) az ülésre úgy számították ki, hogy kivonták a próba várható nyalási arányából, a spontán nyalási arányból (az összes 1 másodperces időablakra számítva az egyes ingerek fellépése előtt (ábra). 6a) és a sikerességi arány szorzata. A nyalási késleltetést úgy számítottuk ki, hogy meghatároztuk az inger fellépése utáni első előzetes nyaláshoz eltelt időt. Az elemzésre megtartott egerek sikerességi aránya jobb vagy 60%-os volt az LS-t követő negyedik napon. Ezután a kényszeres nyalási viselkedést mutató könnyű vagy amerikai üléseket kizártuk a ROUT módszerrel végzett kiugró azonosítás alapján (Q = 1%) az ülés spontán nyalási arányán, a mérések átlagát az ülés összes próbáján a próba stimulusa előtti 1 másodperces időablakban.
Immunhisztokémia és konfokális képalkotás
A mintákat egy éjszakán át 4 °C-on inkubáltuk monoklonális anti-RBPMS antitesttel (1:500, nyúl; ABN1362, Merck Millipore) a retinára.31, monoklonális anti-NeuN antitesttel (1:500, egér, A60 klón; MAB377, Merck Millipore) agymetszetekhez48. A metszeteket ezután Alexa Fluor 488-cal (1:500, szamár anti-egér és szamár anti-nyúl IgG 488, poliklonális; A-21202 és A-21206, Invitrogen) és DAPI-val (1:1,000) konjugált másodlagos antitestekkel inkubáltuk. D9542, Merck Millipore) 1 órán át szobahőmérsékleten. Egy ×1000 objektívvel felszerelt Olympus FV20 konfokális mikroszkópot (UPLSAPO 20XO 0.85-ös numerikus apertúrával) használtunk a síkba szerelt retinák és agymetszetek képeinek beszerzésére (FV10-ASW v. 4.2 szoftver).
A Fidzsi-szigetekkel feldolgozott konfokális képeken (ImageJ v. 1.53q) az RBPMS- és NeuN-pozitív sejteket automatikusan megszámoltuk az 'analyze particles' plugin segítségével. A cellákat két különböző felhasználó manuálisan számolta meg a „cellaszámláló” bővítménnyel. A mennyiségi meghatározást úgy végeztük, hogy legalább négy, véletlenszerűen kiválasztott, 0.4 mm-es transzfektált régióban konfokális kötegeket vettünk fel.2 (Bővített adatok. 1). A V1 neuronok esetében a legnagyobb tdTomato fluoreszcencia zónával rendelkező sagittalis agyszeletet választottuk ki minden állatnál. Az érdeklődésre számot tartó régiót manuálisan határozták meg a V1-ben, és a mennyiségi meghatározásokat legalább hat véletlenszerűen kiválasztott 0.4 mm-es régióban végezték el.2.
Amerikai Egyesült Államok által kiváltott szövetmelegítési szimulációk
A termikus hatások becslésére háromszoros eljárást alkalmaztunk: (1) a három jelátalakító által generált akusztikus mezők szimulációja valósághű akusztikai paraméterekkel; (2) annak ellenőrzése, hogy a nemlineáris akusztika nem játszik fontos szerepet a hőátadásban; és (3) a hőátadás és a hőmérséklet-emelkedés valósághű szimulációi, amelyeket az US által a fókuszban indukált lineáris rendszerben a jelen tanulmányban használt paraméterekre.
A nemlineáris szimulációkhoz a MATLAB k-Wave eszköztárát használtuk úgy, hogy három dimenzióban határoztuk meg a jelátalakító geometriáját, és a következő paramétereket használtuk a terjedési közeghez (vízhez): hangsebesség, c = 1,500 m s-1; térfogati tömeg, ρ = 1,000 kg m-3; nemlinearitási együttható, B/A = 5; csillapítási együttható, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; a csillapítási együttható frekvencia teljesítmény törvénye, y = 2 (ref. 51). Kvázi-monokromatikus 3D hullámtereket szimuláltunk hosszú, 50 ciklusból álló sorozatok felhasználásával; ez adta a maximális nyomásmezőt három dimenzióban, valamint a fókuszban lévő hullámformát. A szimulációkat úgy kalibráltuk, hogy a bemeneti nyomást (a szimulált jelátalakító gerjesztését) úgy állítjuk be, hogy a víztartályban valódi jelátalakítókkal mért nyomást a fókuszon elérjük. A teljes szélesség fele-maximumnál (FWHM) a fókuszpont átmérője a x-y síkja 4.360, 1.610 és 0.276 mm, a főtengely hossza pedig x-z A sík 32.3, 20.6 és 3.75 mm volt a 0.50, 2.25 és 15.00 MHz-es jelátalakítóknál. 1b–d). A nemlineáris hatásokat a fókuszban lévő hullámforma relatív harmonikus tartalmának becslésével értékeltük. ábra 15 MHz-es fókuszátalakító példájában. 1d, a kísérleti és szimulált jeleket a fókuszpontban összehasonlították, és azt találták, hogy nagyon egyezőek (Kibővített adatok XNUMX. ábra). 4a). Továbbá a második harmonikus amplitúdója 19.8 dB-lel az alapérték alatt van (a szimulált esetben 20.9 dB), vagyis ha az alapenergia E, a második harmonikusnak energiája van E/95 (Bővített adatok Fig. 4b). Ezért a hőhatások számításánál a nemlineáris hatásokat ésszerűen figyelmen kívül hagyhatjuk, mivel ezek a bevitt energia ~1%-át teszik ki. Ugyanezeket a következtetéseket vontuk le 0.5 MHz és 15.0 MHz esetében is. A lineáris hullámterjedési közelítések jelentősen csökkentették a szimulációk számítási költségét. A lineáris terjedési szimulációkat a Field II eszköztár segítségével végeztük a MATLAB-ban52,53, monokromatikus módban, ugyanolyan közegtulajdonságokkal, mint a k-Wave (víz), a 3D maximális nyomásmezők eléréséhez. Ezeket a maximális nyomásmezőket használták a fűtési forrás kifejezés felépítéséhez (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Ahol αnp az agy abszorpciós együtthatója a vizsgált frekvencián (59.04 Np m-1 15 MHz-en számítva αagy = 0.21 dB cm-1 MHz-y és a y = 1.18), az agy térfogati tömege ρagy = 1,046 kg m-3, az agy hangsebessége cagy = 154 s-1 és a pmax a 3D maximális nyomásmező. Ezt a forráskifejezést használták a Penne-féle biohőegyenlet feloldásához (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}left( {K_mathrm{t}timesnabla T} right) – rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}bal ({T – T_mathrm{a}} jobb) + Q) a k-Wave-ben, hol Cagy a vér fajlagos hőkapacitása (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt az agy hővezető képessége (0.51 W m-1 ° C-1), ρvér a vérsűrűség (1,050 kg m-3), Cvér a vér fajlagos hőkapacitása (3,617 J kg-1 ° C-1), Pvér a vér perfúziós együtthatója (9.7 × 10-3 s-1), Ta az artériás hőmérséklet (37 °C), Q = QUS + ρagyγagy és a γagy az agyszövet hőtermelése (11.37 W kg-1) (hiv. 54,55). Az agyhőmérséklet kezdeti feltételét a következőre állítottuk be T0 = 37 °C.
Ez a szimuláció megfelel az adott hőmérséklet-emelkedés legrosszabb forgatókönyvének. (1) Az akusztikus terjedést csak vízben szimulálják (nem csökkentett érték), alacsonyabb csillapítási együtthatóval (2.2 × 10)-3 dB cm MHz-2.00), mint az agy (0.59 dB cm MHz-1.27), még akkor is, ha a terjedés egy része az agyban történik. A pmax ezért a térképek túlbecsültek. (2) A hőelnyelést csak az agyszövetben szimulálják, magasabb abszorpciós együtthatóval (0.21 dB cm MHz).-1.18) mint a víz, még akkor is, ha a maximális nyomásmező egy része valójában az akusztikus kapcsolókúp vizében található. Ebből adódóan, QUS kissé túl van becsülve. Három térbeli dimenzióban és időben térképeztük fel a hőmérsékletet, és kerestük a maximális hőmérséklet-emelkedés pontját (Kibővített adatok XNUMX. ábra). 4c–f).
Statisztikai analízis
A statisztikai elemzéseket Prism szoftverrel (Prism 9, GraphPad) végeztük. Az értékeket átlagértékként ± az átlag (sem) standard hibájaként fejezzük ki és ábrázoljuk az ábrákon és a szövegben, hacsak nincs másképp megadva. Az adatokat nem párosított Welch-ben elemeztük t-tesztek (két farkú) vagy páratlan többszörös t-teszt Sidak–Bonferroni korrekcióval többszörös összehasonlításhoz. A statisztikai teszteket az ábra jelmagyarázatai tartalmazzák.
Jelentési összefoglaló
A kutatástervezésről további információk a Nature Portfolio Reporting Összefoglaló ehhez a cikkhez kapcsolódik.
- SEO által támogatott tartalom és PR terjesztés. Erősödjön még ma.
- Platoblockchain. Web3 metaverzum intelligencia. Felerősített tudás. Hozzáférés itt.
- Forrás: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :is
- ][p
- $ UP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- felett
- egyetemi
- igénybe vett
- Szerint
- Fiók
- szerez
- megszerzése
- Az aktiválás
- tevékenység
- tulajdonképpen
- fejlett
- Után
- idős
- Megállapodás
- AL
- Alexa
- Minden termék
- lehetővé teszi, hogy
- elemzés
- Horgony
- és a
- állat
- állatok
- Az antitestek
- alkalmazott
- jóváhagyott
- körülbelül
- VANNAK
- TERÜLET
- Sor
- cikkben
- AS
- értékelés
- At
- Augusztus
- automatikusan
- elérhető
- átlagos
- átlagolás
- Tengely
- Hátgerinc
- alapján
- alap
- BE
- mert
- előtt
- lent
- között
- Fekete
- vér
- test
- Agy
- szünet
- ütköző
- épít
- by
- számított
- TUD
- Kapacitás
- ami
- eset
- Cellák
- központi
- központ
- Kamra
- csatorna
- jellemzők
- Károly
- csip
- választott
- osztályok
- besorolás
- kettyenés
- bizottság
- képest
- átfogó
- számítástechnika
- feltétel
- lefolytatott
- vezetőképesség
- összefüggő
- figyelembe vett
- figyelembe véve
- tartalom
- ellenőrzés
- vezérelt
- ellenőr
- Megfelelő
- megfelel
- Költség
- összekapcsolt
- fedett
- szokás
- ciklus
- ciklusok
- dátum
- adatbázis
- nap
- Nap
- meghatározott
- meghatározó
- szállított
- kézbesítés
- sűrűség
- mélységben
- Design
- észlelt
- Érzékelés
- eltökélt
- meghatározó
- Fejlesztés
- eszköz
- DID
- különböző
- digitális
- digitalizált
- méretek
- felfedez
- kijelző
- távolság
- terjesztés
- Fölény
- húzott
- hajtás
- alatt
- e
- minden
- hatások
- energia
- Mérnöki
- fokozott
- hiba
- becsült
- Eter (ETH)
- etika
- európai
- Európai Parlament
- értékelték
- Még
- példa
- izgatott
- kizárt
- tapasztalat
- export
- kifejezve
- szem
- Szemek
- néző
- mező
- Fields
- Füge
- Ábra
- ábrák
- megtöltött
- szűrő
- égetés
- vezetéknév
- rögzített
- repülés
- Összpontosít
- összpontosított
- következő
- A
- forma
- talált
- Negyedik
- KERET
- Frekvencia
- ból ből
- funkció
- funkcionális
- alapvető
- Továbbá
- ge
- GE Healthcare
- generált
- generáció
- geometria
- adott
- Földi
- Csoport
- útmutató
- Hamilton
- fej
- Egészség
- egészségügyi
- <p></p>
- nagyon
- HTTPS
- emberi
- i
- Azonosítás
- azonosított
- IEEE
- képek
- Leképezés
- fontos
- in
- inkubált
- egyéni
- információ
- kezdetben
- bemenet
- eszközök
- kamat
- részt
- ITS
- Kulcs
- laboratórium
- nagyobb
- legnagyobb
- Késleltetés
- Törvény
- tojók
- Legends
- Hossz
- szint
- nyalás
- élet
- Life Sciences
- fény
- vonal
- LINK
- összekapcsolt
- helyi
- helyileg
- található
- elhelyezkedés
- helyszínek
- Hosszú
- nézett
- készült
- karbantartás
- fontos
- kézzel
- térkép
- Térképek
- Tömeg
- anyag
- maximális
- MEA
- jelenti
- mérések
- mechanikai
- közepes
- Merck
- módszer
- egerek
- mikron
- Mikroszkóp
- minimum
- keverék
- ML
- Mód
- modell
- MOL
- ellenőrzés
- Hónap
- hónap
- száj
- mozgó
- MS
- többszörös
- Mutáció
- nemzeti
- National Institutes of Health
- Természet
- hálózat
- hálózatok
- neuronok
- Új
- következő
- szám
- célkitűzés
- szerez
- kapott
- of
- Olympus
- on
- ONE
- nyitás
- üzemeltetési
- érdekében
- Más
- másképp
- éjszakai
- paraméterek
- parlament
- rész
- Elmúlt
- Csúcs
- előadó
- főnix
- fizikai
- darabok
- Vérplazma
- műanyag
- Plató
- Platón adatintelligencia
- PlatoData
- játszani
- csatlakoztat
- pont
- pont
- portfolió
- pozicionált
- pozíciók
- potenciális
- hatalom
- Pontosság
- bemutatott
- nyomja meg a
- nyomás
- folyamat
- gyárt
- Készült
- Program
- ingatlanait
- protokoll
- protokollok
- feltéve,
- impulzus
- szivattyú
- Nyúl
- emelt
- PATKÁNY
- Arány
- hányados
- el
- elérte
- igazi
- valószerű
- felépülés
- tükrözi
- tekintettel
- rezsim
- vidék
- régiók
- Bejegyzés
- helyébe
- Jelentő
- képviselők
- kutatás
- kutató laboratóriumok
- Felbontás
- illetőleg
- Reagálni
- válaszol
- válasz
- REST
- restaurálás
- helyreállítása
- korlátozás
- kapott
- Retina
- Emelkedik
- Szerep
- Szoba
- Csődület
- s
- azonos
- forgatókönyv
- menetrend
- SCI
- Tudomány
- TUDOMÁNYOK
- szkriptek
- Második
- másodlagos
- szakaszok
- kiválasztott
- szelektív
- Érzékenység
- érzékelők
- Sorozat
- Szérum
- ülés
- ülések
- készlet
- alakú
- Sigma
- Jel
- jelek
- Szilícium
- hasonló
- tettetés
- weboldal
- SIX
- Méret
- Bőr
- Szelet
- kicsi
- szoftver
- megoldások
- hang
- forrás
- térbeli
- különleges
- meghatározott
- sebesség
- tüske
- tüskék
- Spot
- terjedés
- Stacks
- Színpad
- standard
- statisztikai
- acél-
- inger
- Tanulmány
- siker
- felettes
- felületi
- felfüggesztés
- felfüggesztések
- kapcsolva
- rendszer
- Systems
- tartály
- cél
- célzás
- Feladat
- Technologies
- teszt
- tesztek
- hogy
- A
- A terület
- azok
- ebből adódóan
- termikus
- Ezek
- Thompson
- ezer
- három
- háromdimenziós
- küszöb
- Keresztül
- idő
- szövetek
- nak nek
- Eszköztár
- kiképzett
- átruházás
- próba
- vizsgálatok
- igazság
- ultrahang
- us
- használ
- Felhasználók
- v1
- érvényesített
- érték
- Értékek
- szelep
- VBA
- Igazolás
- ellenőrzött
- látomás
- vivo
- térfogat-
- W
- Víz
- hullám
- hétvége
- Hetek
- súly
- JÓL
- ami
- fehér
- ablakok
- val vel
- belül
- világ
- írott
- zephyrnet