Eläimet
Kokeet suoritettiin National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals -oppaan mukaisesti. Pöytäkirjat on hyväksynyt paikallinen eläinten etiikkakomitea (Committee Charles Darwin nro 5, rekisteröintinumerot 9529 ja 26889) ja ne toteutettiin Euroopan parlamentin direktiivin 2010/63/EU mukaisesti. Long-Evans-urosrotat, joiden ikä oli välillä 2–12 kuukautta, ja WT-uroshiiret (C57BL/6J), joiden ikä oli 9 viikkoa, hankittiin Janvier Laboratoriesilta; P23H (linja 1) siirtogeenisiä urosrottia (9–22 kuukautta) kasvatettiin paikallisesti.
Plasmidin kloonaus ja AAV-tuotanto
Plasmidit, jotka sisältävät E. coli mscL sekvenssi WT-muodossa ja G22S-mutaation kanssa saatiin Francesco Difatolta (Addgene-plasmidit #107454 ja #107455)28. Kohdistaaksesi RGC:t, SNCG-promoottori31 insertoitiin AAV-runkoplasmidiin, joka sisälsi mscL sekvenssi fuusioituna tdTomato-geeniin ja Kir2.1 ER -vientisignaaliin ekspression ohjaamiseksi plasmakalvolla. AAV2.7m8-vektoria käytettiin lasiaiseen antamiseen. V1-kortikaalisten kerrosten hermosolujen kohdistamiseksi SNCG-promoottori korvattiin CamKII-promoottorilla ja valittiin AAV9.7m8-vektori. Rekombinantti-AAV:t tuotettiin plasmidin yhteistransfektiomenetelmällä ja saadut lysaatit puhdistettiin jodiksanolipuhdistuksella.31.
Yhdysvaltojen ärsyke
Käytettiin kolmea fokusoitua US-muunninta eri keskustaajuuksilla: 0.50 MHz (halkaisija, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; polttoväli, f = 1.25" = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) ja 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), mikä vastaa numeerisia aukkoja F/Ø = 1.25 ja 2.00. Näiden kolmen fokusoidun muuntimen säteilemät akustiset kentät on esitetty kuvassa. 1 (simulaatiot) ja Extended Data Fig. 3 (kokeelliset mittaukset). TiePie Handyscopea (HS5, TiePie Engineering) käytettiin tuottamaan ärsykeaaltomuoto, joka sitten johdettiin 80 dB:n RF-tehovahvistimen (VBA 230-80, Vectawave) läpi, joka oli kytketty muuntimeen. Anturin paineulostulot (paine fokusoituna, kolmiulotteiset (3D) painekartat) mitattiin kaasuttomassa vesisäiliössä Royer-Dieulesaint heterodyne-interferometrillä47. Ex vivo- ja in vivo -stimulaatioon käytetyillä US-stimulaatioilla oli seuraavat ominaisuudet: 1 kHz:n pulssin toistotaajuus 50 %:n käyttöjaksolla, sonikoinnin kesto 10 - 200 ms ja ärsykkeiden välinen aikaväli 0.01 - 2.00 s. Huippuakustiset paineet vaihtelivat välillä 0.11 - 0.88 MPa, 0.30 - 1.60 MPa ja 0.20 - 1.27 MPa 0.50, 2.25 ja 15.00 MHz muuntimissa. Vastaavat arvioidut spatiaalisen huippupulssin keskimääräisen intensiteetin (Isppa) arvot olivat 0.39–25.14, 2.92–83.12 ja 1.30–52.37 W cm-2.
Geeninsisäinen kuljetus ja verkkokalvon kuvantaminen
Rotat nukutettiin48 ja AAV-suspensio (2 µl), joka sisältää 8 - 14 × 1010 viruspartikkeleita, injektoitiin lasiaisen ontelon keskelle. Kuukautta myöhemmin injektoiduille silmille suoritettiin tdTomato-fluoresenssikuvaus MICRON IV verkkokalvonkuvausmikroskoopilla (Phoenix Research Laboratories) ja Micron Discover v.2.2:lla.
MEA-tallenteet
Verkkokalvon palaset litistettiin suodatinkalvolle (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) ja asetettiin poly-l-lysiini (0.1 %, Sigma), RGC:t elektrodeja päin31. AMPA/kainaattiglutamaattireseptorin antagonisti 6-syaani-7-nitrokinoksaliini-2,3-dioni (CNQX, 25 µM, Sigma-Aldrich), NMDA-glutamaattireseptorin antagonisti [3H]3-(2-karboksipiperatsin-4-yyli)propyyli -1-fosfonihappo (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) ja selektiivinen ryhmän III metabotrooppinen glutamaattireseptoriagonisti, l-(+)-2-amino-4-fosfonovoihappoa (LAP4, 50 µM, Tocris Bioscience) laitettiin haude perfuusiolinjan läpi. Valoärsykkeet toimitettiin digitaalisella mikropeilinäytöllä (Vialux; resoluutio, 1,024 768 × 4), joka oli kytketty valkoista valoa emittoivaan diodivalonlähteeseen (MNWHL1, Thorlabs), joka oli fokusoitu fotoreseptoritasolle (säteilyvoimakkuus, XNUMX µW cm-2). US-muuntimet yhdistettiin mittatilaustyönä valmistettuun kytkentäkartioon, joka oli täytetty kaasuttomalla vedellä, ja asennettiin moottoroidulle tasolle (PT3/M-Z8, Thorlabs), joka oli sijoitettu kohtisuoraan verkkokalvon yläpuolelle. MEA-sirun ja verkkokalvon heijastunut signaali havaittiin US-avainlaitteella (Lecoeur Electronique). Verkkokalvon ja anturin välinen etäisyys oli sama kuin anturin polttoväli; tämä varmistettiin heijastuneen signaalin lentoajalla. RGC-tallenteista, joissa oli 252-kanavainen esivahvistin ja MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems), piikit lajiteltiin Spyking CIRCUS 0.5 -ohjelmistolla49. RGC-vastaukset analysoitiin MATLABissa (MathWorks 2018b) kirjoitetuilla mukautetuilla skripteillä niiden luokittelua varten ON, ON-OFF tai OFF vasteiden dominanssiindeksillä.50. Latenssit laskettiin ajana ärsykkeen alkamisen ja piikkitiheysfunktion (SDF) derivaatan maksimin välillä. Kaksi US-vastaavien solujen luokkaa tunnistettiin latenssin perusteella – SL ja LL – määrittämällä kynnys, joka on yhtä suuri kuin NT-solujen US-vastausten latenssijakauman minimi (45 ms). Määritimme huippuarvon A SDF:stä vasteen keston laskemiseen, joka määriteltiin aikaväliksi niiden kahden ajankohdan välillä, joiden SDF oli yhtä suuri kuin A/e (missä A on huippudepolarisaatio ja e on Eulerin numero). Fano-tekijä, joka kvantifioi piikkien määrän vaihtelua, laskettiin piikkien määrän varianssin ja keskiarvon suhteena. Kahden aktivoidun solun välinen euklidinen etäisyys painotettiin solujen maksimilaukaisunopeuden mukaan. Aktivoituneiden solujen lukumäärän suhde MEA-sirulla stimuloidun alueen kokoon laskettiin ottaen huomioon USA:n polttopisteen koko taajuudella 2.25 ja 15.00 MHz ja MEA:n koko 0.50 MHz:n kohdalla, koska polttopiste oli suurempi. kuin tämän taajuuden MEA. Vasteen keskipiste arvioitiin painottamalla kunkin solun suurin laukaisunopeus sen etäisyydellä muista reagoivista soluista, ja vasteen siirtymä laskettiin euklidisena etäisyytenä kahden vastekeskuksen sijainnin välillä.
Intrakraniaaliset injektiot
AAV-suspensiot injektoitiin oikeaan pallonpuoliskoon kahteen eri kohtaan rotilla (2.6 mm ML, 6.8 mm AP ja 3.1 mm ML, 7.2 mm AP bregmasta) tai yhteen kohtaan hiirille (2.5 mm ML, 3.5 mm AP). bregma)48. Rotan injektioita varten suspensio (200 nl, joka sisältää 0.2–8.0 × 1015 viruspartikkelit) injektoitiin kolmelle eri syvyydelle (1,100 1,350, 1,500 4 ja 50 XNUMX µm aivokuoren pinnasta) mikroruiskupumpun ohjaimella (MicroXNUMX, World Precision Instruments), joka toimi nopeudella XNUMX nl min.-1 ja 10 µl:n Hamilton-ruisku. Hiirillä AAV-suspensio (1 µl, joka sisältää 0.2–8.0 × 1015 viruspartikkelit) injektoitiin 400 µm:n etäisyydelle aivokuoren pinnasta nopeudella 100 nl min.-1.
In vivo solunulkoiset tallenteet
Kuukausi AAV-injektioiden jälkeen pieni kraniotomia (5 × 5 mm2) suoritettiin V1:n yläpuolella oikealla pallonpuoliskolla48. tdTomato-fluoresenssi tarkistettiin MICRON IV verkkokalvon kuvantamismikroskoopilla ja Micron Discover v. 2.2:lla (Phoenix Research Laboratories). 32-paikan uEcog-elektrodiryhmä (elektrodin halkaisija, 30 um; elektrodien etäisyys, 300 um; FlexMEA36, MultiChannel Systems) sijoitettiin transfektoidun alueen päälle tai vastaavalle vyöhykkeelle kontrollirotille. MEA-tallenteet suoritettiin 16-paikkaisella piimikrokoettimella, joka oli kallistettu 45° aivojen pintaan nähden (elektrodin halkaisija, 30 µm; etäisyys, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) ja MC_Rack v. 4.6.2. MEA työnnettiin eteenpäin 1,100 um aivokuoreen kolmiakselisella mikromanipulaattorilla (Sutter Instruments). US-anturit kytkettiin aivoihin mittatilaustyönä tehdyllä kytkentäkartiolla, joka oli täytetty kaasuttomalla vedellä ja US-geelillä moottoroidulla tasolla. Aivokuoren ja anturin välinen etäisyys oli sama kuin anturin polttoväli. Visuaaliset ärsykkeet tuotettiin valkoisen valon kollimoidulla valoa emittoivalla diodilla (MNWHL4, Thorlabs), joka sijoitettiin 15 cm:n etäisyydelle silmästä (4.5 mW cm).-2 sarveiskalvossa). Tallenteet digitalisoitiin 32-kanavaisella ja 16-kanavaisella vahvistimella (malli ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). µEcog-tallenteet analysoitiin asiakaskohtaisesti kehitetyillä MATLAB-skripteillä ja MEA-tallenteet analysoitiin Spyking CIRCUS -ohjelmistolla ja räätälöidyillä MATLAB-skripteillä. Vasteen kesto laskettiin ajanjaksona kahden ajankohdan välillä, jolloin aivokuoren aiheuttama potentiaali oli yhtä suuri kuin A/e. Aktivoitu alue määriteltiin pseudoväriaktivaatiokartan alueeksi, jolla depolarisaatiohuippu ylitti taustakohinatason laskettuna signaalin 2 × sd:nä. Vastekeskus arvioitiin painottamalla kunkin elektrodin huippudepolarisaatio sen etäisyydellä muista elektrodeista. Sen suhteellinen siirtymä siirrettäessä US-anturia laskettiin näiden kahden asennon euklidisena etäisyydenä. Aivokuorensisäisiä tallennuksia varten solulatenssi arvioitiin ajaksi ärsykkeen alkamisen ja SDF:n johdannaisen maksimin välillä.
Leikkaus in vivo -käyttäytymistestiä varten
C57BL6J-hiirille injektoitiin subkutaanisesti buprenorfiinia (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) ja deksametasoni (0.7 mg kg-1) (Deksatsoni, Virbac). Eläimet nukutettiin isofluraanilla (5 % induktio ja 2 % ylläpito, ilma/happi-seoksessa) ja pää ajeltiin ja puhdistettiin antiseptisellä liuoksella. Eläinten pää kiinnitettiin stereotaktiseen runkoon isofluraanin annostelujärjestelmällä ja silmävoiteella, ja silmien päälle laitettiin musta kudos. Kehon lämpötila pidettiin 37 °C:ssa. Paikallisen lidokaiini-injektion jälkeen (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), iholle tehtiin viilto. Kalloon kiinnitettiin kaksi ruuvia pienen kraniotomian jälkeen (noin 5.0 × 5.0 mm2) suoritettiin V1:n yläpuolella oikealla pallonpuoliskolla (0.5 mm teräspora) ja käytettiin aivokuoren puskuria. Aivokuori peitettiin TPX-muovilevyllä (125 µm paksu) ja tiivistettiin hammasakryylisementillä (Tetric Evoflow). Käyttäytymiskokeita varten metallinen päätanko (PhenoSys) pään kiinnitystä varten liimattiin sitten kalloon vasemmalle pallonpuoliskolle hammassementillä (FujiCEM 2). Eläimet sijoitettiin talteenottokammioon, jossa fysiologista seerumia ja voidetta ihonalaisesti ruiskutettiin silmiin (Ophtalon, Centravet). Leikkauksen jälkeisen seurannan aikana annettiin buprenorfiinia.
Hiiren käyttäytymistestit
Hiiret asetettiin vedenrajoitusaikataululle, kunnes ne saavuttivat noin 80–85 % painostaan. Testiolosuhteisiin totuttelun jälkeen36, hiiret koulutettiin reagoimaan LS:ään suorittamalla vapaaehtoisen tunnistustehtävän: nuolemalla vesinokkaa (tylppä 18 gaugen neula, noin 5 mm suusta) vasteena valkoisen valon täyden kentän stimulaatiolle (200 ja 50 ms pitkä) vasen silmä (laajennettu tropikamidilla, Mydriaticum Dispersa) yli 35 koetta stimulaation kestoa kohti ja siten 70 koetta päivässä. Vettä (~4 μl) annosteltiin automaattisesti 500 ms valon syttymisen jälkeen kalibroidun vesijärjestelmän kautta. Käyttäytymisprotokollaa ja nuolemisen havaitsemista ohjattiin räätälöidyllä järjestelmällä36. Seuraavien neljän päivän aikana (kahden päivän tauko viikonlopun aikana) US-stimulaatioita annettiin V1:llä 50 ms:n ajan kolmella eri painearvolla (0.2, 0.7 ja 1.2 MPa). Nämä painearvot toimitettiin eri järjestyksessä joka päivä (35 koetta kukin). Kokeiden välit vaihtelivat satunnaisesti ja vaihtelivat 10 ja 30 sekunnin välillä. 15 MHz US-anturi kytkettiin aivoihin mittatilaustyönä tehdyllä kytkentäkartiolla, joka oli täytetty vedellä ja US-geelillä. Onnistumisprosentti laskettiin laskemalla niiden kokeiden lukumäärä, joissa hiiret suorittivat ennakoivia nuoluja (ärsykkeen alkamisen ja vesiventtiilin avaamisen välillä). Ennakoiva nuolemisnopeus (Kuva. 6e) istunnon osalta laskettiin vähentämällä kokeilun ennakoivasta nuolemisnopeudesta, spontaani nuollaustaso (laskettu kaikilla 1 sekunnin aikaikkunoilla ennen jokaista yksittäistä ärsykkeen alkamista (kuva XNUMX). 6a) kaikille kokeille) ja kertomalla onnistumisprosentilla. Nuoluslatenssi laskettiin määrittämällä aika ensimmäiseen ennakoivaan nuolemiseen ärsykkeen alkamisen jälkeen. Analyyseihin pidettyjen hiirten onnistumisprosentti oli parempi tai yhtä suuri kuin 60 % neljäntenä päivänä LS:n jälkeen. Sitten kevyet tai US-istunnot, joissa oli pakko-oireinen nuolemiskäyttäytyminen, suljettiin pois ROUT-menetelmällä tehdyn poikkeavien tunnisteiden perusteella (Q = 1 %) istunnon spontaanista nuolutaajuudesta laskemalla mittausten keskiarvon kaikkiin istunnon kokeisiin 1 sekunnin aikaikkunassa ennen kokeen ärsykkeen alkamista.
Immunohistokemia ja konfokaalinen kuvantaminen
Näytteitä inkuboitiin yön yli 4 °C:ssa verkkokalvon monoklonaalisen anti-RBPMS-vasta-aineen (1:500, kani; ABN1362, Merck Millipore) kanssa.31, monoklonaalisella anti-NeuN-vasta-aineella (1:500, hiiri, klooni A60; MAB377, Merck Millipore) aivoleikkeille48. Sitten leikkeitä inkuboitiin sekundaaristen vasta-aineiden kanssa, jotka oli konjugoitu Alexa Fluor 488:aan (1:500, aasin anti-hiiri ja aasin anti-kani IgG 488, polyklonaalinen; A-21202 ja A-21206, Invitrogen, vastaavasti) ja DAPI:lla (1:1,000). D9542, Merck Millipore) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Olympus FV1000 konfokaalimikroskooppia, jossa oli ×20 objektiivi (UPLSAPO 20XO, numeerinen aukko 0.85), käytettiin kuvien hankkimiseen litteistä verkkokalvoista ja aivoleikkeistä (FV10-ASW v. 4.2 -ohjelmisto).
Fidžin kanssa käsitellyissä konfokaalikuvissa (ImageJ v. 1.53q) RBPMS- ja NeuN-positiiviset solut laskettiin automaattisesti "analyze particles" -pluginilla. Kaksi eri käyttäjää laski solut manuaalisesti "solulaskuri"-laajennuksella. Kvantifiointi suoritettiin hankkimalla konfokaaliset pinot vähintään neljältä satunnaisesti valitulta 0.4 mm:n transfektoidulta alueelta2 (Laajennettu data Fig. 1). V1-hermosoluille valittiin kullekin eläimelle sagitaalinen aivoviipale, jolla oli suurin tdTomato-fluoresenssivyöhyke. Kiinnostuksen kohteena oleva alue määritettiin manuaalisesti V1:ssä ja kvantifiointi suoritettiin vähintään kuudessa satunnaisesti valitussa 0.4 mm:n alueella.2.
USA:n aiheuttamat kudosten kuumenemisen simulaatiot
Lämpövaikutusten arvioimiseen käytettiin kolminkertaista prosessia: (1) kolmen muuntimen synnyttämien akustisten kenttien simulointi realistisilla akustisilla parametreilla; (2) varmistus, että epälineaarisella akustiikalla ei ollut tärkeää roolia lämmönsiirrossa; ja (3) realistiset simulaatiot lämmönsiirrosta ja lämpötilan noususta, jonka US indusoi fokuksessa lineaarisessa järjestelmässä tässä tutkimuksessa käytetyille parametreille.
Epälineaarisissa simulaatioissa käytimme MATLABin k-Wave-työkalupakkia määrittämällä anturin geometria kolmiulotteisesti ja käyttämällä seuraavia etenemisväliaineen (veden) parametreja: äänen nopeus, c = 1,500 m s-1; tilavuusmassa, ρ = 1,000 kg m-3; epälineaarisuuskerroin, B/A = 5; vaimennuskerroin, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; vaimennuskertoimen taajuusteholaki, y = 2 (viite 51). Simuloimme kvasi-monokromaattisia 3D-aaltokenttiä käyttämällä pitkiä 50 syklin purskeita; tämä antoi meille suurimman painekentän kolmessa ulottuvuudessa sekä aaltomuodon fokuskohdassa. Simulaatiot kalibroitiin säätämällä syöttöpainetta (simuloidun anturin viritys) vesisäiliössä oikeilla antureilla mitatun fokuksen paineen saavuttamiseksi. Täysi leveys puolen suurimman (FWHM) polttopisteen halkaisijalla x-y taso oli 4.360, 1.610 ja 0.276 mm, ja pääakselin pituus x-z taso oli 32.3, 20.6 ja 3.75 mm 0.50, 2.25 ja 15.00 MHz muuntimissa. 1b-d). Epälineaariset vaikutukset arvioitiin arvioimalla aaltomuodon suhteellinen harmoninen sisältö polttopisteessä. Kuvan 15 MHz tarkennusanturin esimerkissä. 1d, kokeellisia ja simuloituja signaaleja polttopisteessä verrattiin ja niiden todettiin olevan erittäin yhdenmukaisia (Extended Data Fig. 4a). Lisäksi toisen harmonisen amplitudi on 19.8 dB perusarvon alapuolella (20.9 dB simuloidussa tapauksessa), mikä tarkoittaa, että jos perusenergia on E, toisella harmonisella on energiaa E/95 (Laajennettu data Kuva. 4b). Siksi voimme kohtuudella jättää huomioimatta epälineaariset vaikutukset lämpövaikutusten laskelmissa, koska ne muodostavat ~ 1 % käytetystä energiasta. Samat johtopäätökset tehtiin taajuuksilla 0.5 MHz ja 15.0 MHz. Lineaarisen aallon etenemisen approksimaatiot laskivat huomattavasti simulaatioiden laskentakustannuksia. Lineaariset etenemissimulaatiot suoritettiin MATLABin Field II -työkalulaatikolla52,53, monokromaattisessa tilassa, samoilla väliaineominaisuuksilla kuin k-Wave (vesi), 3D-maksimipainekenttien saamiseksi. Näitä maksimipainekenttiä käytettiin lämpölähdetermin rakentamiseen (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Jossa αnp on aivojen absorptiokerroin tarkasteltavalla taajuudella (59.04 Np m-1 taajuudella 15 MHz, laskettuna αaivot = 0.21 dB cm-1 MHz-y ja y = 1.18), aivojen tilavuusmassa ρaivot = 1,046 kg m-3, aivojen äänen nopeus caivot = 154 s-1 ja pmax on 3D-maksimipainekenttä. Tätä lähdetermiä käytettiin sitten Pennen biolämpöyhtälön ratkaisussa (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}vasen( {K_mathrm{t}timesnabla T} oikea) – rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}vasen( {T – T_mathrm{a}} oikea) + Q) k-Wavessa, missä Caivot on veren ominaislämpökapasiteetti (3,630 XNUMX J kg-1 ° C-1), Kt on aivojen lämmönjohtavuus (0.51 W m-1 ° C-1), ρveri on veren tiheys (1,050 XNUMX kg m-3), Cveri on veren ominaislämpökapasiteetti (3,617 XNUMX J kg-1 ° C-1), Pveri on veren perfuusiokerroin (9.7 × 10-3 s-1), Ta on valtimon lämpötila (37 °C), Q = QUS + ρaivotγaivot ja γaivot on aivokudoksen lämmöntuotto (11.37 W kg-1) (viitteet. 54,55). Aivojen lämpötilan alkuehto asetettiin T0 = 37 °C.
Tämä simulaatio vastaa pahimman mahdollisen skenaarion annetusta lämpötilan noususta. (1) Akustista etenemistä simuloidaan vain vedessä (arvo, jota ei ole vähennetty) pienemmällä vaimennuskertoimella (2.2 × 10).-3 dB cm MHz-2.00) kuin aivot (0.59 dB cm MHz-1.27), vaikka osa etenemisestä tapahtuisi aivoissa. The pmax kartat ovat siksi yliarvioituja. (2) Lämpöabsorptio simuloidaan vain aivokudoksessa korkeammalla absorptiokertoimella (0.21 dB cm MHz-1.18) kuin vesi, vaikka osa maksimipainekentästä todella sijaitsee akustisen kytkentäkartion vedessä. Siksi, QUS on hieman yliarvioitu. Kartoimme lämpötilan kolmeen tilaulottuvuuteen ja aikaan ja etsimme lämpötilan maksiminousupistettä (Extended Data Fig. 4c-f).
Tilastollinen analyysi
Tilastolliset analyysit suoritettiin Prism-ohjelmistolla (Prism 9, GraphPad). Arvot ilmaistaan ja esitetään keskiarvoina ± keskiarvon (sem) keskivirhe kuvissa ja tekstissä, ellei toisin mainita. Tiedot analysoitiin parittomissa Welchissä t-testit (kaksipyrstö) tai pariton monikerta t-testaa Sidak–Bonferroni-korjauksella useita vertailuja varten. Tilastolliset testit on esitetty kuvioiden selitteissä.
Raportointiyhteenveto
Lisätietoja tutkimussuunnittelusta on saatavana Nature Portfolio Reporting Summary linkitetty tähän artikkeliin.
- SEO-pohjainen sisällön ja PR-jakelu. Vahvista jo tänään.
- Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. Tietoa laajennettu. Pääsy tästä.
- Lähde: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :On
- ][s
- $ YLÖS
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- edellä
- akateeminen
- Accessed
- Mukaan
- Tili
- hankkia
- hankkiminen
- Aktivointi
- toiminta
- todella
- kehittynyt
- Jälkeen
- ikäinen
- sopimus
- AL
- Alexa
- Kaikki
- mahdollistaa
- analyysi
- Ankkuri
- ja
- eläin
- eläimet
- vasta-aineita
- sovellettu
- hyväksytty
- suunnilleen
- OVAT
- ALUE
- Ryhmä
- artikkeli
- AS
- arviointi
- At
- Elokuu
- automaattisesti
- saatavissa
- keskimäärin
- keskimäärin
- Akseli
- Selkäranka
- perustua
- perusta
- BE
- koska
- ennen
- alle
- välillä
- Musta
- veri
- elin
- Aivot
- Tauko
- puskuri
- rakentaa
- by
- laskettu
- CAN
- Koko
- joka
- tapaus
- Solut
- keskeinen
- keskus
- kammio
- Kanava
- ominaisuudet
- Kaarle
- siru
- valittu
- luokat
- luokittelu
- napsauttaa
- valiokunta
- verrattuna
- kattava
- tietojenkäsittely
- ehto
- tehty
- johtokyky
- kytketty
- harkittu
- ottaen huomioon
- pitoisuus
- ohjaus
- hallinnassa
- ohjain
- vastaava
- vastaa
- Hinta
- kytketty
- katettu
- asiakassuhde
- sykli
- jaksoa
- tiedot
- tietokanta
- päivä
- päivää
- määritelty
- määrittelemällä
- toimitettu
- toimitus
- tiheys
- syvyydet
- Malli
- havaittu
- Detection
- määritetty
- määritetään
- Kehitys
- laite
- DID
- eri
- digitaalinen
- Digitalisoinnin
- mitat
- löytää
- näyttö
- etäisyys
- jakelu
- Valta-asema
- laadittu
- ajaa
- aikana
- e
- kukin
- vaikutukset
- energia
- Tekniikka
- tehostettu
- virhe
- arvioidaan
- Eetteri (ETH)
- etiikka
- Eurooppalainen
- Euroopan parlamentti
- arvioitu
- Jopa
- esimerkki
- innoissaan
- ulkopuolelle
- experience
- vienti
- ilmaistuna
- silmä
- katse
- päin
- ala
- Fields
- Viikuna
- Kuva
- luvut
- täynnä
- suodattaa
- ampua
- Etunimi
- kiinteä
- lento
- Keskittää
- keskityttiin
- jälkeen
- varten
- muoto
- löytyi
- Neljäs
- FRAME
- Taajuus
- alkaen
- toiminto
- toiminnallinen
- perus-
- Lisäksi
- ge
- GE Healthcare
- syntyy
- sukupolvi
- geometria
- tietty
- Maa
- Ryhmä
- ohjaavat
- Hamilton
- pää
- terveys
- terveydenhuollon
- korkeampi
- erittäin
- HTTPS
- ihmisen
- i
- Tunnistaminen
- tunnistettu
- IEEE
- kuvien
- Imaging
- tärkeä
- in
- inkuboitu
- henkilökohtainen
- tiedot
- ensimmäinen
- panos
- välineet
- korko
- osallistuva
- SEN
- avain
- laboratorio
- suurempi
- suurin
- Viive
- Laki
- kerrokset
- Legends
- Pituus
- Taso
- selkäsauna
- elämä
- Life Sciences
- valo
- linja
- LINK
- liittyvät
- paikallinen
- paikallisesti
- sijaitsevat
- sijainti
- sijainnit
- Pitkät
- Katsoin
- tehty
- huolto
- merkittävä
- käsin
- kartta
- Kartat
- Massa
- materiaali
- maksimi
- MEA
- merkitys
- mitat
- mekaaninen
- keskikokoinen
- Merck
- menetelmä
- hiiret
- mikroni
- Mikroskooppi
- minimi
- seos
- ML
- tila
- malli
- MOL
- seuranta
- Kuukausi
- kk
- suu
- liikkuvat
- MS
- moninkertainen
- Mutaatio
- kansallinen
- National Institutes of Health
- luonto
- verkko
- verkot
- neuronien
- Uusi
- seuraava
- numero
- tavoite
- saada
- saatu
- of
- Olympus
- on
- ONE
- avaaminen
- toiminta
- tilata
- Muut
- muuten
- yön aikana
- parametrit
- eduskunta
- osa
- Hyväksytty
- Peak
- esittävä
- feeniks
- fyysinen
- kappaletta
- Plasma
- muovi
- Platon
- Platonin tietotieto
- PlatonData
- Pelaa
- kytkeä
- Kohta
- pistettä
- salkku
- asemoitu
- kantoja
- mahdollinen
- teho
- Tarkkuus
- esitetty
- painaa
- paine
- prosessi
- tuottaa
- valmistettu
- Ohjelma
- ominaisuudet
- protokolla
- protokollat
- mikäli
- pulssi
- pumppu
- Kani
- esille
- RAT
- hinta
- suhde
- tavoittaa
- saavutettu
- todellinen
- realistinen
- elpyminen
- heijastunut
- suhteen
- järjestelmä
- alue
- alueet
- Rekisteröinti
- korvataan
- Raportointi
- edustettuina
- tutkimus
- tutkimuslaboratoriot
- päätöslauselma
- vastaavasti
- Vastata
- vastaamisen
- vastaus
- REST
- palauttaminen
- palauttaminen
- rajoitus
- Saatu ja
- verkkokalvo
- Nousta
- Rooli
- Huone
- murskatappio
- s
- sama
- skenaario
- aikataulu
- SCI
- tiede
- tieteet
- skriptejä
- Toinen
- toissijainen
- osiot
- valittu
- valikoiva
- Herkkyys
- anturit
- Järjestys
- Seerumi
- Istunto
- istuntoja
- setti
- muotoinen
- Sigma
- signaali
- signaalit
- Pii
- samankaltainen
- simulointi
- paikka
- SIX
- Koko
- iho
- Viipale
- pieni
- Tuotteemme
- ratkaisu
- kuulostaa
- lähde
- tila-
- erityinen
- määritelty
- nopeus
- piikki
- piikkarit
- Kaupallinen
- leviäminen
- Stacks
- Vaihe
- standardi
- tilastollinen
- teräs
- ärsyke
- tutkimus
- menestys
- esimies
- pinta
- jousitus
- suspensiot
- kytketty
- järjestelmä
- järjestelmät
- säiliö
- Kohde
- kohdistaminen
- Tehtävä
- Technologies
- testi
- testit
- että
- -
- Alue
- heidän
- siksi
- lämpö-
- Nämä
- Thompson
- tuhansia
- kolmella
- kolmiulotteinen
- kynnys
- Kautta
- aika
- kudokset
- että
- Toolbox
- koulutettu
- siirtää
- oikeudenkäynti
- tutkimuksissa
- Totuus
- ultraääni
- us
- käyttää
- Käyttäjät
- v1
- validoitu
- arvo
- arvot
- venttiili
- VBA
- Vahvistus
- todennettu
- visio
- vivo
- tilavuudeltaan
- W
- vesi
- Aalto
- viikonloppu
- viikkoa
- paino
- HYVIN
- joka
- valkoinen
- ikkunat
- with
- sisällä
- maailman-
- kirjallinen
- zephyrnet