Dyr
Eksperimenter blev udført i overensstemmelse med National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Protokoller blev godkendt af den lokale dyreetiske komité (komité Charles Darwin nr. 5, registreringsnr. 9529 og 26889) og udført i overensstemmelse med Europa-Parlamentets direktiv 2010/63/EU. Long-Evans hanrotter i alderen mellem 2 og 12 måneder og WT hanmus (C57BL/6J) i alderen 9 uger blev opnået fra Janvier Laboratories; P23H (linje 1) transgene hanrotter (9-22 måneder) blev opdrættet lokalt.
Plasmidkloning og AAV-produktion
Plasmider indeholdende E. coli mscL sekvensen i WT-formen og med G22S-mutationen blev opnået fra Francesco Difato (Addgene plasmider #107454 og #107455)28. For at målrette RGC'er, SNCG-promotoren31 blev indsat i et AAV-rygradsplasmid indeholdende mscL sekvens fusioneret til tdTomato-genet og Kir2.1 ER-eksportsignalet for at drive ekspression ved plasmamembranen. En AAV2.7m8-vektor blev anvendt til intravitrøs levering. Til målretning af neuroner i de V1-kortikale lag blev SNCG-promotoren erstattet af CamKII-promotoren, og en AAV9.7m8-vektor blev valgt. Rekombinante AAV'er blev produceret ved plasmid co-transfektionsmetoden, og de resulterende lysater blev oprenset ved iodixanoloprensning31.
Amerikansk stimulus
Tre fokuserede amerikanske transducere med forskellige centrale frekvenser blev brugt: 0.50 MHz (diameter, Ø = 1.00" = 25.4 mm; brændvidde, f = 1.25" = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) og 15.00 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), svarende til numeriske åbninger på F/Ø = 1.25 og 2.00. Akustiske felter udstrålet af disse tre fokuserede transducere er vist i fig. 1 (simuleringer) og udvidede data Fig. 3 (eksperimentelle målinger). Et TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) blev brugt til at producere stimulusbølgeformen, som derefter blev ført gennem en 80 dB RF effektforstærker (VBA 230-80, Vectawave) forbundet til transduceren. Transducertrykoutput (tryk ved fokus, tredimensionelle (3D) trykkort) blev målt i en afgasset vandtank med et Royer-Dieulesaint heterodyne interferometer47. Amerikanske stimuli anvendt til ex vivo og in vivo stimulering havde følgende karakteristika: 1 kHz pulsgentagelsesfrekvens med en 50 % arbejdscyklus, sonikeringsvarighed mellem 10 og 200 ms og interstimulusinterval mellem 0.01 og 2.00 s. Det maksimale akustiske tryk varierede fra 0.11 til 0.88 MPa, 0.30 til 1.60 MPa og 0.20 til 1.27 MPa for henholdsvis 0.50, 2.25 og 15.00 MHz transducerne. De tilsvarende estimerede rumlige maksimale pulsgennemsnitlige intensitetsværdier (Isppa) var 0.39-25.14, 2.92-83.12 og 1.30-52.37 W cm-2.
Intravitrøs genlevering og retinal billeddannelse
Rotter blev bedøvet48 og AAV-suspension (2 µl), indeholdende mellem 8 og 14 × 1010 virale partikler, blev injiceret i midten af glaslegemet. En måned senere blev tdTomato fluorescensbilleddannelse udført på de injicerede øjne med et MICRON IV retinal billeddannelsesmikroskop (Phoenix Research Laboratories) og Micron Discover v.2.2.
MEA optagelser
Nethindestykker blev fladtrykt på en filtermembran (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) og anbragt på en MEA (elektrodediameter, 30 µm; mellemrum, 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems) belagt med poly-l-lysin (0.1%, Sigma), med RGC'er vendt mod elektroderne31. AMPA/kainat-glutamatreceptorantagonist 6-cyano-7-nitroquinoxalin-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), NMDA-glutamatreceptorantagonisten [3H]3-(2-carboxypiperazin-4-yl) propyl -1-phosphonsyre (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) og en selektiv gruppe III metabotropisk glutamatreceptoragonist, l-(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), blev badet påført gennem perfusionsslangen. Lysstimuli blev leveret med et digitalt mikrospejldisplay (Vialux; opløsning, 1,024 × 768) koblet til en hvid lysemitterende diode lyskilde (MNWHL4, Thorlabs) fokuseret på fotoreceptorplanet (irradians, 1 µW cm-2). Amerikanske transducere blev koblet med en specialfremstillet koblingskegle fyldt med afgasset vand og monteret på en motoriseret scene (PT3/M-Z8, Thorlabs) placeret ortogonalt over nethinden. Det reflekterede signal fra MEA-chippen og nethinden blev detekteret med en amerikansk nøgleanordning (Lecoeur Electronique). Afstanden mellem nethinden og transduceren var lig med transducerens brændvidde; dette blev verificeret med flyvetiden for det reflekterede signal. Fra RGC-optagelser med en 252-kanals forforstærker og MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems) blev spikes sorteret med Spyking CIRCUS 0.5-software49. RGC-svar blev analyseret med brugerdefinerede scripts skrevet i MATLAB (MathWorks 2018b) for klassificering som ON, ON-OFF eller OFF, med svardominansindekset50. Latenser blev beregnet som tiden mellem stimulusstart og maksimum af derivatet af spike density function (SDF). To klasser af US-responderende celler blev identificeret på basis af latens - SL og LL - ved at fastsætte en tærskelværdi svarende til minimum af latensfordelingen af responserne fra NT-celler til US (45 ms). Vi bestemte topværdien A af SDF til beregning af svarvarighed, der blev defineret som tidsintervallet mellem de to tidspunkter, for hvilke SDF var lig med A/e (hvor A er top depolarisering og e er Eulers nummer). Fano-faktoren, der kvantificerer variabiliteten i antallet af spikes, blev beregnet som forholdet mellem variansen af spike-tallet og gennemsnittet. Den euklidiske afstand mellem to aktiverede celler blev vægtet i overensstemmelse med den maksimale affyringshastighed for cellerne. Forholdet mellem antallet af aktiverede celler og størrelsen af det stimulerede område på MEA-chippen blev beregnet under hensyntagen til størrelsen af det amerikanske brændpunkt for 2.25 og 15.00 MHz og størrelsen af MEA for 0.50 MHz, fordi brændpunktet var større end MEA for denne frekvens. Midten af responsen blev estimeret ved at vægte den maksimale affyringshastighed for hver celle med dens afstand fra andre reagerende celler, og forskydningen af responsen blev beregnet som den euklidiske afstand mellem to center-of-respons positioner.
Intrakranielle injektioner
AAV-suspensioner blev injiceret i højre hjernehalvdel på to forskellige steder i rotter (2.6 mm ML, 6.8 mm AP og 3.1 mm ML, 7.2 mm AP fra bregma) eller på ét sted i mus (2.5 mm ML, 3.5 mm AP fra bregma)48. Til rotteinjektioner, suspensionen (200 nl indeholdende 0.2-8.0 × 1015 virale partikler) blev injiceret i tre forskellige dybder (1,100, 1,350 og 1,500 µm fra den kortikale overflade) med en mikrosprøjtepumpecontroller (Micro4, World Precision Instruments) med en hastighed på 50 nl min.-1 og 10 µl Hamilton-sprøjte. Hos mus, AAV-suspensionen (1 µl indeholdende 0.2-8.0 × 1015 virale partikler) blev injiceret ved 400 µm fra den kortikale overflade med en hastighed på 100 nl min.-1.
In vivo ekstracellulære optagelser
En måned efter AAV-injektioner, en lille kraniotomi (5 × 5 mm2) blev udført over V1 i højre hjernehalvdel48. tdTomat fluorescensen blev kontrolleret med et MICRON IV retinal billeddannelsesmikroskop og Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories). Et 32-steds µEcog-elektrodearray (elektrodediameter, 30 µm; elektrodeafstand, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) blev placeret over det transficerede område eller i en lignende zone for kontrolrotter. MEA-optagelser blev udført med en siliciummikroprobe med 16 steder vippet 45° i forhold til hjerneoverfladen (elektrodediameter, 30 µm; afstand, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) og MC_Rack v. 4.6.2. MEA blev fremført 1,100 µm ind i cortex med en tre-akset mikromanipulator (Sutter Instruments). US-transducere blev koblet til hjernen med en specialfremstillet koblingskegle fyldt med afgasset vand og US-gel på en motoriseret scene. Afstanden mellem cortex og transducer var lig med transducerens brændvidde. Visuelle stimuli blev genereret af en hvid-lys-kollimeret lysemitterende diode (MNWHL4, Thorlabs) placeret 15 cm væk fra øjet (4.5 mW cm)-2 ved hornhinden). Optagelser blev digitaliseret med 32-kanals og 16-kanals forstærkere (model ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). µEcog-optagelserne blev analyseret med specialudviklede MATLAB-scripts, og MEA-optagelserne blev analyseret med Spyking CIRCUS-software og specialudviklede MATLAB-scripts. Responsvarigheden blev beregnet som intervallet mellem de to tidspunkter, hvor det kortikalt fremkaldte potentiale var lig med A/e. Det aktiverede område blev defineret som området af pseudofarveaktiveringskortet, over hvilket topdepolarisering oversteg baggrundsstøjniveauet beregnet som 2 × sd af signalet. Responscentret blev estimeret ved at vægte topdepolariseringen af hver elektrode med dens afstand fra de andre elektroder. Dens relative forskydning ved flytning af den amerikanske transducer blev beregnet som den euklidiske afstand af de to positioner. For intrakortikale optagelser blev cellelatens estimeret som tiden mellem stimulusstart og maksimum af derivatet af SDF.
Kirurgi til in vivo adfærdstestning
C57BL6J mus blev subkutant injiceret med buprenorphin (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) og dexamethason (0.7 mg kg-1) (Dexazon, Virbac). Dyrene blev bedøvet med isofluran (5 % induktion og 2 % vedligeholdelse, i en luft/ilt-blanding), og hovedet blev barberet og renset med en antiseptisk opløsning. Dyrene blev hovedfikseret på en stereotaktisk ramme med et isoflurantilførselssystem og øjensalve, og et sort væv blev påført over øjnene. Kropstemperaturen blev holdt på 37°C. Efter en lokal injektion af lidocaïne (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), blev der lavet et snit på huden. To skruer blev fastgjort i kraniet efter en lille kraniotomi (ca. 5.0 × 5.0 mm2) blev udført over V1 i højre hjernehalvdel (0.5 mm stålbor), og en cortexbuffer blev påført. Cortex blev dækket med et TPX-plastark (125 µm tykt) og forseglet med dental akrylcement (Tetric Evoflow). Til adfærdseksperimenter blev en metallisk hovedstang (PhenoSys) til hovedfiksering derefter limet til kraniet på venstre hjernehalvdel med dental cement (FujiCEM 2). Dyrene blev anbragt i et genopretningskammer med en subkutan injektion af fysiologisk serum og salve på øjnene (Ophtalon, Centravet). Buprenorphin blev injiceret under overvågning efter operationen.
Mus adfærdstest
Mus blev anbragt på et vandrestriktionsskema, indtil de nåede cirka 80-85% af deres vægt. Efter tilvænning til testforholdene36, blev mus trænet til at reagere på en LS ved at udføre en frivillig detektionsopgave: slikke en vandtud (stump 18 gauge nål, ca. 5 mm fra munden) som reaktion på hvidt-lys fuldfeltsstimulering (200 og 50 ms lang) af venstre øje (dilateret med tropicamid, Mydriaticum Dispersa) over 35 forsøg pr. stimulationsvarighed og derfor 70 forsøg pr. dag. Vand (~4 μl) blev automatisk dispenseret 500 ms efter at lyset blev tændt, gennem et kalibreret vandsystem. Adfærdsprotokollen og slikdetektion blev kontrolleret af et specialfremstillet system36. De næste fire dage (to-dages pause i weekenden) blev US-stimuleringer leveret på V1 i 50 ms ved tre forskellige trykværdier (0.2, 0.7 og 1.2 MPa). Disse trykværdier blev leveret i en anden rækkefølge hver dag (35 forsøg hver). Interforsøgsintervallerne varierede tilfældigt og varierede mellem 10 og 30 s. 15 MHz US-transduceren blev koblet til hjernen med en specialfremstillet koblingskegle fyldt med vand og US-gel. Succesraten blev beregnet ved at tælle antallet af forsøg, hvor musene udførte anticiperende slik (mellem stimulusstart og åbning af vandventilen). Den forventede slikkehastighed (fig. 6e) for sessionen blev beregnet ved at trække fra den forventede slikkehastighed i et forsøg, den spontane slikkehastighed (beregnet på alle 1 s tidsvinduer før hver individuel stimulusstart (fig. 6a) for alle forsøgene) og gange med succesraten. Slikkelatensen blev beregnet ved at bestemme tiden til det første anticipatoriske slik efter stimulusstart. Musene tilbageholdt til analyse havde en succesrate på over eller lig med 60 % på den fjerde dag efter LS. Derefter blev lette eller amerikanske sessioner, der viste en kompulsiv slikkeadfærd, udelukket baseret på outlier-identifikationen foretaget ved hjælp af ROUT-metoden (Q = 1 %) på sessionens spontane slikkehastighed med et gennemsnit af målingerne på alle forsøgene i sessionen i 1 s tidsvinduet før stimulusstarten af forsøget.
Immunhistokemi og konfokal billeddannelse
Prøver blev inkuberet natten over ved 4 °C med et monoklonalt anti-RBPMS-antistof (1:500, kanin; ABN1362, Merck Millipore) til nethinden31, med et monoklonalt anti-NeuN-antistof (1:500, mus, klon A60; MAB377, Merck Millipore) til hjernesektioner48. Sektionerne blev derefter inkuberet med sekundære antistoffer konjugeret med Alexa Fluor 488 (1:500, æsel anti-mus og æsel anti-kanin IgG 488, polyklonalt; A-21202 og A-21206, henholdsvis Invitrogen) og DAPI (1:1,000 D9542, Merck Millipore) i 1 time ved stuetemperatur. Et Olympus FV1000 konfokalmikroskop med ×20 objektiv (UPLSAPO 20XO med en numerisk blænde på 0.85) blev brugt til at tage billeder af fladmonterede nethinder og hjernesektioner (FV10-ASW v. 4.2 software).
På de konfokale billeder behandlet med Fiji (ImageJ v. 1.53q) blev RBPMS- og NeuN-positive celler automatisk talt med 'analyse partikler'-plugin'et. Cellerne blev manuelt talt af to forskellige brugere med plugin'et 'celletæller'. Kvantificering blev udført ved at erhverve konfokale stakke i mindst fire tilfældigt udvalgte transficerede områder på 0.4 mm2 (Udvidede data, fig. 1). For V1-neuroner blev den sagittale hjerneskive med den største tdTomat-fluorescenszone valgt for hvert dyr. Et område af interesse blev manuelt defineret i V1, og kvantificeringerne blev udført i mindst seks tilfældigt udvalgte områder på 0.4 mm2.
USA-inducerede vævsopvarmningssimuleringer
En tredobbelt proces blev brugt til estimering af termiske effekter: (1) simulering af de akustiske felter genereret af de tre transducere med realistiske akustiske parametre; (2) verifikation af, at ikke-lineær akustik ikke spillede en vigtig rolle i varmeoverførsel; og (3) realistiske simuleringer af varmeoverførsel og temperaturstigning induceret i fokus af USA i et lineært regime for parametrene brugt i denne undersøgelse.
Til ikke-lineære simuleringer brugte vi MATLABs k-Wave værktøjskasse ved at definere transducerens geometri i tre dimensioner og bruge følgende parametre for udbredelsesmediet (vand): lydhastighed, c = 1,500 m s-1; volumetrisk masse, ρ = 1,000 kg m-3; ikke-linearitetskoefficient, B/A = 5; dæmpningskoefficient, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; frekvenseffektloven for dæmpningskoefficienten, y = 2 (ref. 51). Vi simulerede kvasi-monokromatiske 3D-bølgefelter ved hjælp af lange udbrud på 50 cyklusser; dette gav os det maksimale trykfelt i tre dimensioner samt bølgeformen ved fokus. Simuleringer blev kalibreret ved at justere inputtrykket (excitation af den simulerede transducer) for at nå trykket ved fokus målt i vandtanken med rigtige transducere. Fuldbredden ved halvmaksimum (FWHM) brændpunktsdiameter i x-y planet var 4.360, 1.610 og 0.276 mm, og længden af hovedaksen i x-z plan var 32.3, 20.6 og 3.75 mm for henholdsvis 0.50, 2.25 og 15.00 MHz transducerne (fig. 1b-d). Ikke-lineære effekter blev evalueret ved at estimere det relative harmoniske indhold af bølgeformen ved fokus. I eksemplet med 15 MHz fokustransducer i fig. 1d, blev de eksperimentelle og simulerede signaler ved brændpunktet sammenlignet og fundet at være meget konkordante (Udvidet data Fig. 4a). Ydermere er amplituden af den anden harmoniske 19.8 dB under grundtonen (20.9 dB i det simulerede tilfælde), hvilket betyder, at hvis grundenergien er E, den anden harmoniske har energi E/95 (Udvidede data Fig. 4b). Derfor kan vi med rimelighed negligere de ikke-lineære effekter i beregningerne af de termiske effekter, da de tegner sig for ~1% af den involverede energi. De samme konklusioner blev draget ved 0.5 MHz og 15.0 MHz. Lineære bølgeudbredelsestilnærmelser reducerede beregningsomkostningerne for simuleringerne betydeligt. Lineære udbredelsessimuleringer blev udført med Field II værktøjskassen i MATLAB52,53, i den monokromatiske tilstand, med de samme medieegenskaber som k-Wave (vand), for at opnå de maksimale 3D-trykfelter. Disse maksimale trykfelter blev brugt til at bygge et varmekildeudtryk (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}})Hvor αnp er hjernens absorptionskoefficient ved den betragtede frekvens (59.04 Np m-1 ved 15 MHz, regnet ud fra αhjernen = 0.21 dB cm-1 MHz-y , y = 1.18), hjernens volumetriske masse ρhjernen = 1,046 kg m-3, hjernens lydhastighed chjernen = 154 sek-1 , pmax er det maksimale 3D-trykfelt. Dette kildeudtryk blev derefter brugt i opløsningen af en Pennes biovarmeligning (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}venstre( {K_mathrm{t}timesnabla T} højre) – rho _{ mathrm{blod}}C_{mathrm{blod}}P_{mathrm{blod}}venstre( {T – T_mathrm{a}} højre) + Q) i k-Wave, hvor Chjernen er den blodspecifikke varmekapacitet (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt er hjernens varmeledningsevne (0.51 W m-1 ° C-1), ρblod er blodtætheden (1,050 kg m-3), Cblod er den blodspecifikke varmekapacitet (3,617 J kg-1 ° C-1), Pblod er blodperfusionskoefficienten (9.7 × 10-3 s-1), Ta er den arterielle temperatur (37 °C), Q = QUS + ρhjernenγhjernen , γhjernen er varmeudviklingen af hjernevævet (11.37 W kg-1) (ref. 54,55). Den oprindelige betingelse for hjernetemperatur blev sat til T0 = 37 °C.
Denne simulering svarer til det værst tænkelige scenarie vedrørende den givne temperaturstigning. (1) Den akustiske udbredelse simuleres kun i vand (ikke-nedsat værdi) med en lavere dæmpningskoefficient (2.2 × 10)-3 dB cm MHz-2.00) end hjernen (0.59 dB cm MHz-1.27), selvom en del af udbredelsen sker i hjernen. Det pmax kort er derfor overvurderet. (2) Termisk absorption simuleres kun i hjernevævet med en højere absorptionskoefficient (0.21 dB cm MHz)-1.18) end vand, selvom en del af det maksimale trykfelt faktisk er placeret i vandet i den akustiske koblingskegle. Derfor, QUS er lidt overvurderet. Vi kortlagde temperaturen i tre rumlige dimensioner og tid og ledte efter punktet for maksimal temperaturstigning (Udvidet data Fig. 4c-f).
Statistisk analyse
Statistiske analyser blev udført med Prism-software (Prism 9, GraphPad). Værdier er udtrykt og repræsenteret som middelværdier ± standardfejl af middelværdien (sem) på figurer og i teksten, medmindre andet er angivet. Data blev analyseret i uparrede Welch's t-tests (to-halede) eller et uparret multiplum t-test med Sidak-Bonferroni-korrektion for flere sammenligninger. Statistiske test findes i figurforklaringerne.
Rapporteringsoversigt
Yderligere information om forskningsdesign er tilgængelig i Nature Portfolio Reporting Summary knyttet til denne artikel.
- SEO Powered Content & PR Distribution. Bliv forstærket i dag.
- Platoblokkæde. Web3 Metaverse Intelligence. Viden forstærket. Adgang her.
- Kilde: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :er
- ][s
- $OP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- over
- akademisk
- af udleverede
- Ifølge
- Konto
- erhverve
- erhverve
- Aktivering
- aktivitet
- faktisk
- fremskreden
- Efter
- alderen
- Aftale
- AL
- Alexa
- Alle
- tillader
- analyse
- Anchor
- ,
- dyr
- dyr
- Antistoffer
- anvendt
- godkendt
- cirka
- ER
- OMRÅDE
- Array
- artikel
- AS
- vurdering
- At
- AUGUST
- automatisk
- til rådighed
- gennemsnit
- gennemsnit
- Axis
- Backbone
- baseret
- grundlag
- BE
- fordi
- før
- jf. nedenstående
- mellem
- Sort
- blod
- krop
- Brain
- Pause
- buffer
- bygge
- by
- beregnet
- CAN
- Kapacitet
- hvilken
- tilfælde
- Celler
- central
- center
- Kammer
- Kanal
- karakteristika
- Charles
- chip
- valgt
- klasser
- klassificering
- klik
- udvalg
- sammenlignet
- omfattende
- computing
- betingelse
- gennemført
- ledningsevne
- tilsluttet
- betragtes
- Overvejer
- indhold
- kontrol
- kontrolleret
- controller
- Tilsvarende
- svarer
- Koste
- koblede
- dækket
- skik
- cyklus
- cykler
- data
- Database
- dag
- Dage
- definerede
- definere
- leveret
- levering
- tæthed
- Dybder
- Design
- opdaget
- Detektion
- bestemmes
- bestemmelse
- Udvikling
- enhed
- DID
- forskellige
- digital
- digitaliseret
- størrelse
- opdage
- Skærm
- afstand
- fordeling
- Dominans
- trukket
- køre
- i løbet af
- e
- hver
- effekter
- energi
- Engineering
- forbedret
- fejl
- anslået
- Ether (ETH)
- etik
- europæisk
- Europa-Parlamentet
- evalueret
- Endog
- eksempel
- ophidset
- udelukket
- erfaring
- eksport
- udtrykt
- øje
- Øjne
- vender
- felt
- Fields
- Fig
- Figur
- tal
- fyldt
- filtrere
- fyring
- Fornavn
- fast
- fly
- Fokus
- fokuserede
- efter
- Til
- formular
- fundet
- Fjerde
- FRAME
- Frekvens
- fra
- funktion
- funktionel
- fundamental
- Endvidere
- ge
- GE Healthcare
- genereret
- generation
- geometri
- given
- Ground
- gruppe
- vejlede
- Hamilton
- hoved
- Helse
- sundhedspleje
- højere
- stærkt
- HTTPS
- menneskelig
- i
- Identifikation
- identificeret
- IEEE
- billeder
- Imaging
- vigtigt
- in
- inkuberet
- individuel
- oplysninger
- initial
- indgang
- instrumenter
- interesse
- involverede
- ITS
- Nøgle
- laboratorium
- større
- største
- Latency
- Lov
- lag
- Legends
- Længde
- Niveau
- slikning
- Livet
- Life Sciences
- lys
- Line (linje)
- LINK
- forbundet
- lokale
- lokalt
- placeret
- placering
- placeringer
- Lang
- kiggede
- lavet
- vedligeholdelse
- større
- manuelt
- kort
- Maps
- Masse
- materiale
- maksimal
- MEA
- betyder
- målinger
- mekanisk
- medium
- Merck
- metode
- mus
- micron
- Mikroskop
- minimum
- blanding
- ML
- tilstand
- model
- MOL
- overvågning
- Måned
- måned
- munden
- flytning
- MS
- flere
- Mutation
- national
- National Institutes of Health
- Natur
- netværk
- net
- Neuroner
- Ny
- næste
- nummer
- objektiv
- opnå
- opnået
- of
- olympus
- on
- ONE
- åbning
- drift
- ordrer
- Andet
- Ellers
- overnight
- parametre
- Europa-Parlamentet
- del
- Bestået
- Peak
- udfører
- phoenix
- fysisk
- stykker
- Plasma
- plast
- plato
- Platon Data Intelligence
- PlatoData
- Leg
- plugin
- Punkt
- punkter
- portefølje
- positionerede
- positioner
- potentiale
- magt
- Precision
- forelagt
- trykke
- tryk
- behandle
- producere
- produceret
- Program
- egenskaber
- protokol
- protokoller
- forudsat
- puls
- pumpe
- Kanin
- hævet
- ROTTE
- Sats
- forholdet
- nå
- nået
- ægte
- realistisk
- opsving
- afspejles
- om
- regime
- region
- regioner
- Registrering
- udskiftes
- Rapportering
- repræsenteret
- forskning
- forskningslaboratorier
- Løsning
- henholdsvis
- Svar
- reagere
- svar
- REST
- restaurering
- genoprette
- begrænsning
- resulterer
- Retina
- Rise
- roller
- Værelse
- Rout
- s
- samme
- scenarie
- planlægge
- SCI
- Videnskab
- VIDENSKABER
- scripts
- Anden
- sekundær
- sektioner
- valgt
- selektiv
- Følsomhed
- sensorer
- Sequence
- Serum
- Session
- sessioner
- sæt
- formet
- Sigma
- Signal
- signaler
- Silicon
- lignende
- simulation
- websted
- SIX
- Størrelse
- hud
- Slice
- lille
- Software
- løsninger
- Lyd
- Kilde
- rumlige
- specifikke
- specificeret
- hastighed
- spike
- spikes
- Spot
- Spredning
- Stakke
- Stage
- standard
- statistiske
- stål
- stimulus
- Studere
- succes
- overlegen
- overflade
- suspension
- suspensioner
- skiftede
- systemet
- Systemer
- tanken
- mål
- rettet mod
- Opgaver
- Teknologier
- prøve
- tests
- at
- Området
- deres
- derfor
- termisk
- Disse
- thompson
- tusinder
- tre
- tredimensionale
- tærskel
- Gennem
- tid
- væv
- til
- Værktøjskasse
- uddannet
- overførsel
- retssag
- forsøg
- Sandheden
- ultralyd
- us
- brug
- brugere
- v1
- valideret
- værdi
- Værdier
- ventil
- VBA
- Verifikation
- verificeres
- vision
- vivo
- volumetrisk
- W
- Vand
- Wave
- weekend
- uger
- vægt
- GODT
- som
- hvid
- vinduer
- med
- inden for
- world
- skriftlig
- zephyrnet