جانور
تجربات لیبارٹری جانوروں کی دیکھ بھال اور استعمال کے لیے قومی ادارہ صحت کے رہنما کے مطابق کیے گئے۔ پروٹوکول مقامی جانوروں کی اخلاقیات کمیٹی (کمیٹی چارلس ڈارون نمبر 5، رجسٹریشن نمبر 9529 اور 26889) کے ذریعے منظور کیے گئے تھے اور یورپی پارلیمنٹ کے ڈائریکٹو 2010/63/EU کے ساتھ معاہدے میں کیے گئے تھے۔ لانگ-ایونز نر چوہے جن کی عمر 2 سے 12 ماہ کے درمیان تھی اور WT نر چوہے (C57BL/6J) جن کی عمر 9 ہفتے تھی جانویئر لیبارٹریز سے حاصل کیے گئے تھے۔ P23H (لائن 1) نر ٹرانسجینک چوہوں (9-22 ماہ) کو مقامی طور پر اٹھایا گیا تھا۔
پلازمیڈ کلوننگ اور اے اے وی پروڈکشن
پر مشتمل پلازمیڈ ای کولی ایم ایس سی ایل WT فارم میں ترتیب اور G22S اتپریورتن کے ساتھ فرانسسکو ڈیفاٹو (Addgene plasmids #107454 اور #107455) سے حاصل کیا گیا تھا۔28. RGCs کو نشانہ بنانے کے لیے، SNCG پروموٹر31 AAV بیک بون پلاسمڈ میں داخل کیا گیا تھا جس میں mscL ترتیب کو tdTomato جین اور Kir2.1 ER ایکسپورٹ سگنل میں ملایا گیا، تاکہ پلازما جھلی پر اظہار کیا جا سکے۔ ایک AAV2.7m8 ویکٹر انٹرا ویٹریس ڈلیوری کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔ V1 کارٹیکل تہوں میں نیوران کو نشانہ بنانے کے لیے، SNCG پروموٹر کی جگہ CamKII پروموٹر نے لیا اور AAV9.7m8 ویکٹر کا انتخاب کیا گیا۔ ریکومبیننٹ AAVs کو پلازمڈ شریک منتقلی کے طریقہ کار کے ذریعہ تیار کیا گیا تھا، اور نتیجے میں لائسیٹس کو iodixanol پیوریفیکیشن سے پاک کیا گیا تھا۔31.
امریکی محرک
مختلف مرکزی تعدد کے ساتھ تین فوکسڈ یو ایس ٹرانسڈیوسرز استعمال کیے گئے: 0.50 میگاہرٹز (قطر، Ø = 1.00″ = 25.4 ملی میٹر؛ فوکل فاصلہ، f = 1.25″ = 31.7 ملی میٹر) (V301-SU، Olympus)، 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 ملی میٹر، f = 1.00″ = 25.4 ملی میٹر) (V306-SU, Olympus) اور 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 ملی میٹر، f = 1.00″ = 25.4 ملی میٹر) (V319-SU, Olympus), کے عددی یپرچرز کے مطابق F/Ø = 1.25 اور 2.00۔ ان تین فوکسڈ ٹرانس ڈوسرز کے ذریعہ پھیلے ہوئے صوتی فیلڈز کو تصویر میں پیش کیا گیا ہے۔ 1 (تقلید) اور توسیعی ڈیٹا تصویر۔ 3 (تجرباتی پیمائش) ایک TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) محرک ویوفارم تیار کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا، جسے پھر ٹرانسڈیوسر سے منسلک 80 dB RF پاور ایمپلیفائر (VBA 230-80، Vectawave) سے گزارا گیا تھا۔ ٹرانسڈیوسر پریشر آؤٹ پٹس (فوکس پر دباؤ، تین جہتی (3D) دباؤ کے نقشے) کو ایک ڈیگاسڈ واٹر ٹینک میں Royer-Dieulesaint heterodyne interferometer کے ساتھ ماپا گیا۔47. ایکس ویوو اور ویوو محرک میں استعمال ہونے والی امریکی محرکات میں درج ذیل خصوصیات ہیں: 1% ڈیوٹی سائیکل کے ساتھ 50 کلو ہرٹز پلس ریپیٹیشن فریکوئنسی، سونیکیشن کا دورانیہ 10 اور 200 ms کے درمیان اور انٹرسٹیمولس وقفہ 0.01 اور 2.00 s کے درمیان۔ چوٹی کا صوتی دباؤ بالترتیب 0.11 سے 0.88 MPa، 0.30 سے 1.60 MPa اور 0.20 سے 1.27 MPa 0.50، 2.25 اور 15.00 MHz ٹرانسڈیوسرز کے لیے بالترتیب ہے۔ متعلقہ تخمینہ شدہ مقامی چوٹی نبض کی اوسط شدت (اسپا) کی قدریں 0.39–25.14، 2.92–83.12 اور 1.30–52.37 ڈبلیو سینٹی میٹر تھیں۔2-.
انٹرا وٹریئس جین کی ترسیل اور ریٹنا امیجنگ
چوہوں کو بے ہوشی کی گئی۔48 اور AAV معطلی (2 µl)، جس میں 8 اور 14 × 10 کے درمیان ہے۔10 وائرل ذرات، کانچ گہا کے مرکز میں انجکشن کیا گیا تھا. ایک ماہ بعد، ٹی ڈی ٹوماٹو فلوروسینس امیجنگ انجیکشن والی آنکھوں پر کی گئی، ایک مائکرون IV ریٹینل امیجنگ مائکروسکوپ (فینکس ریسرچ لیبارٹریز) اور مائکرون ڈسکوور v.2.2 کے ساتھ۔
MEA ریکارڈنگ
ریٹنا کے ٹکڑوں کو فلٹر میمبرین (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) پر چپٹا کر کے MEA (الیکٹروڈ قطر، 30 µm؛ اسپیسنگ، 200 µm؛ MEA256 200/30 iR-ITO، ملٹی چینل پولی-) پر رکھا گیا تھا۔l-لائسین (0.1%، سگما)، RGCs کے ساتھ الیکٹروڈز کا سامنا کرنا پڑتا ہے۔31. AMPA/kainate گلوٹامیٹ ریسیپٹر مخالف 6-cyano-7-nitroquinoxaline-2,3-dione (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), NMDA گلوٹامیٹ ریسیپٹر مخالف [3H]3-(2-carboxypiperazin-4-proyl) -1-فاسفونک ایسڈ (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) اور ایک منتخب گروپ III میٹابوٹروپک گلوٹامیٹ ریسیپٹر ایگونسٹ، l-(+)-2-امینو-4-فاسفونوبیوٹیرک ایسڈ (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience) کو پرفیوژن لائن کے ذریعے غسل دیا گیا تھا۔ روشنی کے محرکات کو ڈیجیٹل مائکرو مرر ڈسپلے (وائیلکس؛ ریزولوشن، 1,024 × 768) کے ساتھ مل کر ایک سفید روشنی خارج کرنے والے ڈائیوڈ لائٹ سورس (MNWHL4، Thorlabs) کے ساتھ فراہم کیا گیا تھا جو فوٹو ریسیپٹر جہاز (شعاع ریزی، 1 µW سینٹی میٹر) پر مرکوز تھا۔2-)۔ یو ایس ٹرانسڈیوسرز کو اپنی مرضی کے مطابق بنائے گئے کپلنگ کون کے ساتھ جوڑا گیا تھا جو پانی سے بھرا ہوا تھا اور ایک موٹرائزڈ اسٹیج (PT3/M-Z8، Thorlabs) پر نصب کیا گیا تھا جو کہ ریٹنا کے اوپر آرتھوگونلی طور پر رکھا گیا تھا۔ MEA چپ اور ریٹنا کے منعکس سگنل کا پتہ امریکی کلیدی ڈیوائس (Lecoeur Electronique) سے لگایا گیا۔ ریٹنا اور ٹرانس ڈوسر کے درمیان فاصلہ ٹرانس ڈوسر کی فوکل لمبائی کے برابر تھا۔ یہ عکاسی سگنل کی پرواز کے وقت کے ساتھ تصدیق کی گئی تھی. 252 چینل پریمپلیفائر اور MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems) کے ساتھ RGC ریکارڈنگ سے، اسپائکنگ CIRCUS 0.5 سافٹ ویئر کے ساتھ اسپائکس کو ترتیب دیا گیا تھا۔49. RGC کے جوابات کا تجزیہ MATLAB (MathWorks 2018b) میں لکھی گئی حسب ضرورت اسکرپٹس کے ساتھ کیا گیا تھا تاکہ درجہ بندی کو ON، ON–OFF یا OFF کے طور پر کیا گیا، جوابی غلبہ کے اشاریہ کے ساتھ۔50. تاخیر کا حساب محرک کے آغاز اور اسپائک ڈینسٹی فنکشن (SDF) کے زیادہ سے زیادہ اخذ کرنے کے درمیان وقت کے طور پر لگایا گیا تھا۔ US جواب دینے والے خلیوں کی دو کلاسوں کی شناخت تاخیر کی بنیاد پر کی گئی تھی — SL اور LL — NT خلیات کے US (45 ms) کے جوابات کی کم از کم تاخیر کی تقسیم کے مساوی حد طے کر کے۔ ہم نے چوٹی کی قیمت کا تعین کیا۔ A جوابی مدت کے حساب کے لیے SDF کا، جس کی وضاحت دو ٹائم پوائنٹس کے درمیان وقت کے وقفے کے طور پر کی گئی تھی جس کے لیے SDF برابر تھا A/e (کہاں A چوٹی depolarization ہے اور e یولر کا نمبر ہے)۔ فانو فیکٹر، اسپائیک گنتی کی تغیر کو مقدار بخشتا ہے، اسپائک گنتی کے وسط میں فرق کے تناسب کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔ دو فعال خلیوں کے درمیان یوکلیڈین فاصلے کو خلیوں کی زیادہ سے زیادہ فائرنگ کی شرح کے مطابق وزن کیا گیا تھا۔ MEA چپ پر متحرک خلیات کی تعداد کے تناسب کو 2.25 اور 15.00 میگاہرٹز کے لیے امریکی فوکل اسپاٹ کے سائز اور 0.50 میگاہرٹز کے لیے MEA کے سائز کو مدنظر رکھتے ہوئے شمار کیا گیا، کیونکہ فوکل اسپاٹ بڑا تھا۔ اس فریکوئنسی کے لیے MEA کے مقابلے میں۔ ردعمل کے مرکز کا اندازہ ہر سیل کی زیادہ سے زیادہ فائرنگ کی شرح کو دوسرے جواب دینے والے خلیوں سے اس کے فاصلے کے حساب سے لگایا گیا تھا، اور ردعمل کی نقل مکانی کا حساب دو مرکز-آف-ریسپانس پوزیشنوں کے درمیان یوکلیڈین فاصلے کے طور پر کیا گیا تھا۔
انٹراکرینیل انجیکشن
AAV معطلی چوہوں میں دو مختلف مقامات پر (2.6 ملی میٹر ML، 6.8 mm AP اور 3.1 mm ML، 7.2 mm AP بریگما سے) یا چوہوں میں ایک مقام پر (2.5 mm ML، 3.5 mm AP سے چوہوں میں انجکشن لگائے گئے تھے۔ بریگما)48. چوہے کے انجیکشن کے لیے، معطلی (200–0.2 × 8.0 پر مشتمل 10 nl15 وائرل ذرات) کو تین مختلف گہرائیوں (1,100، 1,350 اور 1,500 µm کارٹیکل سطح سے) میں ایک مائیکرو سرنج پمپ کنٹرولر (Micro4, World Precision Instruments) کے ساتھ 50 nl منٹ کی شرح سے کام کیا گیا تھا۔1- اور 10 µl ہیملٹن سرنج۔ چوہوں میں، AAV معطلی (1–0.2 × 8.0 پر مشتمل 10 µl15 وائرل ذرات) کو کارٹیکل سطح سے 400 µm پر 100 nl منٹ کی شرح سے انجیکشن لگایا گیا تھا۔1-.
Vivo ایکسٹرا سیلولر ریکارڈنگ میں
AAV انجیکشن کے ایک ماہ بعد، ایک چھوٹی کرینیوٹومی (5 × 5 ملی میٹر2) V1 کے اوپر دائیں نصف کرہ میں انجام دیا گیا تھا۔48. tdTomato fluorescence کو MICRON IV ریٹنا امیجنگ مائکروسکوپ اور Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories) سے چیک کیا گیا۔ ایک 32 سائٹ µEcog الیکٹروڈ سرنی (الیکٹروڈ قطر، 30 µm؛ الیکٹروڈ اسپیسنگ، 300 µm؛ FlexMEA36، MultiChannel Systems) کو منتقلی والے علاقے یا کنٹرول چوہوں کے لیے اسی طرح کے زون میں رکھا گیا تھا۔ MEA ریکارڈنگز دماغ کی سطح پر 16° پر جھکائے ہوئے 45 سائیٹ سلیکون مائکرو پروب کے ساتھ انجام دی گئیں (الیکٹروڈ قطر، 30 µm؛ اسپیسنگ، 50 µm؛ A1x16-5mm-50-703، NeuroNexus Technologies) اور MC_Rack v.4.6.2. MEA کو تین محور والے مائیکرو مینیپلیٹر (Sutter Instruments) کے ساتھ پرانتستا میں 1,100 µm آگے بڑھایا گیا تھا۔ یو ایس ٹرانسڈیوسرز کو دماغ کے ساتھ جوڑا گیا اپنی مرضی کے مطابق بنائے گئے کپلنگ کون سے بھرا ہوا پانی اور یو ایس جیل موٹرائزڈ اسٹیج پر۔ پرانتستا اور ٹرانس ڈوسر کے درمیان فاصلہ ٹرانس ڈوسر کی فوکل لمبائی کے برابر تھا۔ آنکھوں سے 4 سینٹی میٹر کے فاصلے پر رکھے گئے سفید روشنی سے کولیمیٹڈ لائٹ ایمیٹنگ ڈائیوڈ (MNWHL15، Thorlabs) کے ذریعے بصری محرکات پیدا کیے گئے تھے (4.5 میگاواٹ سینٹی میٹر2- کارنیا میں)۔ ریکارڈنگز کو 32 چینل اور 16 چینل ایمپلیفائرز (ماڈل ME32/16-FAI-μPA، ملٹی چینل سسٹمز) کے ساتھ ڈیجیٹائز کیا گیا تھا۔ µEcog ریکارڈنگ کا تجزیہ اپنی مرضی کے مطابق تیار کردہ MATLAB اسکرپٹس کے ساتھ کیا گیا اور MEA ریکارڈنگ کا تجزیہ Spyking CIRCUS سافٹ ویئر اور اپنی مرضی کے مطابق تیار کردہ MATLAB اسکرپٹس کے ساتھ کیا گیا۔ ردعمل کی مدت کا حساب دو ٹائم پوائنٹس کے درمیان وقفہ کے طور پر کیا گیا تھا جس پر کارٹیکل سے پیدا ہونے والی صلاحیت برابر تھی۔ A/e. ایکٹیویٹڈ ایریا کو سیوڈو کلور ایکٹیویشن میپ کے اس علاقے کے طور پر بیان کیا گیا تھا جس پر چوٹی ڈیپولرائزیشن بیک گراؤنڈ شور کی سطح سے تجاوز کر گئی تھی جس کا حساب سگنل کے 2 × sd کے حساب سے کیا گیا تھا۔ رسپانس سینٹر کا اندازہ ہر الیکٹروڈ کی چوٹی ڈیپولرائزیشن کو دوسرے الیکٹروڈ سے فاصلے کے حساب سے لگایا گیا تھا۔ یو ایس ٹرانسڈیوسر کو منتقل کرتے وقت اس کے رشتہ دار نقل مکانی کو دو پوزیشنوں کے یوکلیڈین فاصلے کے طور پر شمار کیا گیا تھا۔ انٹراکارٹیکل ریکارڈنگ کے لیے، سیل لیٹینسی کا اندازہ محرک کے آغاز اور SDF کے زیادہ سے زیادہ اخذ کرنے کے درمیان وقت کے طور پر لگایا گیا تھا۔
Vivo طرز عمل کی جانچ کے لئے سرجری
C57BL6J چوہوں کو subcutanely buprenorphine (0.05 mg kg) لگایا گیا تھا۔1-) (Buprécare، Axience)، اور dexamethasone (0.7 ملی گرام کلوگرام1-) (ڈیکسازون، ویربیک)۔ جانوروں کو isoflurane (5% انڈکشن اور 2% دیکھ بھال، ایک ہوا/آکسیجن مکسچر میں) کے ساتھ بے ہوشی کی گئی اور سر منڈوایا گیا اور اینٹی سیپٹک محلول سے صاف کیا گیا۔ جانوروں کو ایک سٹیریوٹیکٹک فریم پر ایک آئسو فلورین ڈلیوری سسٹم اور آنکھوں پر مرہم لگایا گیا تھا، اور آنکھوں پر سیاہ ٹشو لگایا گیا تھا۔ جسم کا درجہ حرارت 37 ° C پر برقرار رکھا گیا تھا۔ لڈوکین کے مقامی انجیکشن کے بعد (4 ملی گرام کلوگرام1-) (Laocaïne، Centravet)، جلد پر ایک چیرا بنایا گیا تھا۔ ایک چھوٹی کرینیوٹومی (تقریبا 5.0 × 5.0 ملی میٹر) کے بعد، کھوپڑی میں دو پیچ طے کیے گئے تھے۔2) V1 کے اوپر دائیں نصف کرہ (0.5 ملی میٹر اسٹیل ڈرل) میں انجام دیا گیا تھا اور ایک کارٹیکس بفر لگایا گیا تھا۔ پرانتستا کو TPX پلاسٹک شیٹ (125 µm موٹی) سے ڈھانپ دیا گیا تھا اور ڈینٹل ایکریلک سیمنٹ (Tetric Evoflow) سے سیل کیا گیا تھا۔ رویے کے تجربات کے لیے، سر کے تعین کے لیے ایک دھاتی ہیڈ بار (فینوسِس) کو پھر دانتوں کے سیمنٹ (FujiCEM 2) کے ساتھ بائیں نصف کرہ پر کھوپڑی پر چپکا دیا گیا۔ جانوروں کو ایک ریکوری چیمبر میں رکھا گیا تھا، جس میں آنکھوں پر جسمانی سیرم اور مرہم کا ایک subcutaneous انجکشن لگایا گیا تھا (Ophtalon، Centravet)۔ سرجری کے بعد کی نگرانی کے دوران Buprenorphine کا انجکشن لگایا گیا تھا۔
ماؤس کے طرز عمل کے ٹیسٹ
چوہوں کو پانی کی پابندی کے شیڈول پر رکھا گیا جب تک کہ وہ اپنے وزن کے تقریباً 80-85٪ تک نہ پہنچ جائیں۔ ٹیسٹ کے حالات کی عادت کے بعد36، چوہوں کو رضاکارانہ طور پر پتہ لگانے کے کام کو انجام دے کر ایل ایس کا جواب دینے کی تربیت دی گئی تھی: سفید روشنی والی فل فیلڈ محرک (18 اور 5 ایم ایس لمبا) کے جواب میں پانی کے اسپاؤٹ (کند 200 گیج کی سوئی، منہ سے تقریبا 50 ملی میٹر) چاٹنا۔ بائیں آنکھ (ٹروپیکامائیڈ، مائیڈریاٹیکم ڈسپرسا کے ساتھ پھیلی ہوئی) 35 سے زیادہ ٹرائلز فی محرک مدت اور اس لیے 70 ٹرائلز فی دن۔ پانی (~ 4 μl) ایک کیلیبریٹڈ واٹر سسٹم کے ذریعے، لائٹ آن ہونے کے بعد 500 ms پر خود بخود تقسیم ہو گیا۔ طرز عمل پروٹوکول اور چاٹ کا پتہ لگانے کو اپنی مرضی کے مطابق نظام کے ذریعہ کنٹرول کیا گیا تھا۔36. اگلے چار دن (ویک اینڈ کے دوران دو دن کا وقفہ)، امریکی محرکات V1 پر 50 ms کے لیے تین مختلف پریشر ویلیوز (0.2، 0.7 اور 1.2 MPa) پر فراہم کیے گئے۔ یہ دباؤ کی قدریں ہر روز مختلف ترتیب میں دی جاتی تھیں (ہر ایک میں 35 ٹرائلز)۔ انٹر ٹرائل وقفے تصادفی طور پر مختلف ہوتے ہیں اور 10 اور 30 سیکنڈ کے درمیان ہوتے ہیں۔ 15 میگا ہرٹز یو ایس ٹرانسڈیوسر کو پانی اور یو ایس جیل سے بھرا ہوا اپنی مرضی کے مطابق بنائے گئے کپلنگ کون کے ساتھ دماغ سے جوڑا گیا تھا۔ کامیابی کی شرح کا حساب ان آزمائشوں کی تعداد کو گن کر لگایا گیا جس میں چوہوں نے پیشگی چاٹیں (محرک کے آغاز اور پانی کے والو کے کھلنے کے درمیان)۔ متوقع چاٹنے کی شرح (تصویر XNUMX)۔ 6e) سیشن کے لئے ایک آزمائش کی متوقع چاٹ کی شرح سے گھٹا کر حساب کیا گیا تھا، بے ساختہ چاٹنے کی شرح (ہر انفرادی محرک کے آغاز سے پہلے تمام 1 s ٹائم ونڈوز پر شمار کیا جاتا ہے (تصویر XNUMX)۔ 6a) تمام آزمائشوں کے لیے) اور کامیابی کی شرح سے ضرب۔ محرک کے آغاز کے بعد پہلے متوقع چاٹنے کے وقت کا تعین کرکے چاٹنے میں تاخیر کا حساب لگایا گیا۔ تجزیہ کے لیے رکھے گئے چوہوں نے LS کے بعد چوتھے دن کامیابی کی شرح 60% سے زیادہ یا مساوی پیش کی۔ اس کے بعد، ROUT طریقہ (Q = 1%) سیشن کی بے ساختہ چاٹنے کی شرح پر جو کہ ٹرائل کے محرک شروع ہونے سے پہلے 1 s ٹائم ونڈو میں سیشن کے تمام ٹرائلز کی پیمائش کی اوسط ہے۔
امیونو ہسٹو کیمسٹری اور کنفوکل امیجنگ
ریٹنا کے لیے ایک مونوکلونل اینٹی آر بی پی ایم ایس اینٹی باڈی (4:1، خرگوش؛ ABN500، مرک ملی پور) کے ساتھ نمونے راتوں رات 1362 ° C پر لگائے گئے تھے۔31دماغی حصوں کے لیے مونوکلونل اینٹی نیو این اینٹی باڈی (1:500، ماؤس، کلون A60؛ MAB377، مرک ملی پور) کے ساتھ48. اس کے بعد حصوں کو الیکسا فلور 488 (1:500، گدھا اینٹی ماؤس اور گدھا اینٹی خرگوش IgG 488، پولی کلونل؛ A-21202 اور A-21206، Invitrogen، بالترتیب) اور DAPI (1:1,000) کے ساتھ مل کر سیکنڈری اینٹی باڈیز کے ساتھ انکیوبیٹ کیا گیا۔ D9542، مرک ملی پور) کمرے کے درجہ حرارت پر 1 گھنٹے کے لیے۔ ایک Olympus FV1000 confocal microscope with ×20 مقصد (UPLSAPO 20XO جس کا عددی یپرچر 0.85 ہے) فلیٹ ماونٹڈ ریٹینا اور دماغی حصوں (FV10-ASW v. 4.2 سافٹ ویئر) کی تصاویر حاصل کرنے کے لیے استعمال کیا گیا تھا۔
فجی (ImageJ v. 1.53q) کے ساتھ پروسیس شدہ کنفوکل امیجز پر، RBPMS- اور NeuN-مثبت خلیات خود بخود 'تجزیہ پارٹیکلز' پلگ ان کے ساتھ شمار کیے گئے۔ سیل کو دو مختلف صارفین نے دستی طور پر شمار کیا، 'سیل کاؤنٹر' پلگ ان کے ساتھ۔ 0.4 ملی میٹر کے کم از کم چار تصادفی طور پر منتخب کردہ منتقلی والے علاقوں میں کنفوکل اسٹیکس حاصل کرکے مقدار کا تعین کیا گیا تھا۔2 (توسیعی اعداد و شمار 1)۔ V1 نیوران کے لیے، ہر جانور کے لیے سب سے بڑے tdTomato فلوروسینس زون کے ساتھ sagittal دماغ کا ٹکڑا منتخب کیا گیا تھا۔ دلچسپی کا ایک علاقہ V1 میں دستی طور پر بیان کیا گیا تھا اور مقدار کو 0.4 ملی میٹر کے کم از کم چھ تصادفی طور پر منتخب کردہ علاقوں میں انجام دیا گیا تھا۔2.
امریکی حوصلہ افزائی ٹشو ہیٹنگ سمیلیشنز
تھرمل اثرات کے تخمینے کے لیے تین گنا عمل کا استعمال کیا گیا: (1) حقیقت پسندانہ صوتی پیرامیٹرز کے ساتھ تین ٹرانس ڈوسرز کے ذریعہ تیار کردہ صوتی شعبوں کی نقل؛ (2) اس بات کی تصدیق کہ غیر لکیری صوتیات نے حرارت کی منتقلی میں اہم کردار ادا نہیں کیا۔ اور (3) حرارت کی منتقلی اور درجہ حرارت میں اضافے کی حقیقت پسندانہ نقلیں جو اس مطالعے میں استعمال کیے گئے پیرامیٹرز کے لیے ایک لکیری نظام میں امریکہ کی توجہ پر مرکوز ہیں۔
نان لائنر سمیلیشنز کے لیے، ہم نے MATLAB کے k-Wave ٹول باکس کو تین جہتوں میں ٹرانسڈیوسر کی جیومیٹری کی وضاحت کرکے اور پروپیگیشن میڈیم (پانی) کے لیے درج ذیل پیرامیٹرز کا استعمال کرتے ہوئے استعمال کیا: آواز کی رفتار، c = 1,500 میٹر سیکنڈ1-; حجمی ماس، ρ = 1,000 کلو میٹر3-; غیر خطوطی گتانک، B/A = 5; کشندگی گتانک، α = 2.2 × 103- ڈی بی سینٹی میٹر1- میگاہرٹز-y; کشندگی گتانک کا فریکوئنسی پاور قانون، y = 2 (ریفری۔ 51)۔ ہم نے 3 سائیکلوں کے لمبے برسٹ کا استعمال کرتے ہوئے نیم یک رنگی 50D ویو فیلڈز کی نقل تیار کی۔ اس نے ہمیں تین جہتوں میں زیادہ سے زیادہ پریشر فیلڈ کے ساتھ ساتھ فوکس میں ویوفارم فراہم کیا۔ اصلی ٹرانسڈیوسرز کے ساتھ پانی کے ٹینک میں ماپا فوکس پر دباؤ تک پہنچنے کے لیے ان پٹ پریشر (نقلی ٹرانسڈیوسر کی حوصلہ افزائی) کو ایڈجسٹ کرکے سمولیشنز کیلیبریٹ کی گئیں۔ مکمل چوڑائی نصف زیادہ سے زیادہ (FWHM) فوکل اسپاٹ قطر میں x-y طیارہ 4.360، 1.610 اور 0.276 ملی میٹر تھا، اور بڑے محور کی لمبائی x-z طیارہ بالترتیب 32.3، 20.6 اور 3.75 میگاہرٹز ٹرانسڈیوسرز کے لیے 0.50، 2.25 اور 15.00 ملی میٹر تھا۔ 1b–d)۔ فوکس پر ویوفارم کے رشتہ دار ہارمونک مواد کا تخمینہ لگا کر نان لائنر اثرات کا اندازہ کیا گیا۔ تصویر میں 15 میگاہرٹز فوکس ٹرانسڈیوسر کی مثال میں۔ 1d، فوکل اسپاٹ پر تجرباتی اور نقلی سگنلز کا موازنہ کیا گیا اور انہیں انتہائی ہم آہنگ پایا گیا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر۔ 4a)۔ مزید برآں، دوسرے ہارمونک کا طول و عرض بنیادی سے 19.8 dB نیچے ہے (نقلی صورت میں 20.9 dB)، یعنی اگر بنیادی توانائی E، دوسرے ہارمونک میں توانائی ہوتی ہے۔ E/95 (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر۔ 4b)۔ لہذا، ہم تھرمل اثرات کے حساب کتاب میں غیر لکیری اثرات کو معقول طور پر نظر انداز کر سکتے ہیں، کیونکہ ان میں شامل توانائی کا 1% حصہ ہے۔ 0.5 میگا ہرٹز اور 15.0 میگاہرٹز پر ایک ہی نتیجہ اخذ کیا گیا تھا۔ لکیری لہر کے پھیلاؤ کے تخمینے نے تخروپن کی کمپیوٹنگ لاگت میں کافی حد تک کمی کی۔ MATLAB میں فیلڈ II ٹول باکس کے ساتھ لکیری پھیلاؤ کی نقلیں کی گئیں۔52,53, یک رنگی موڈ میں، k-Wave (پانی) جیسی درمیانی خصوصیات کے ساتھ، 3D زیادہ سے زیادہ دباؤ والے فیلڈز حاصل کرنے کے لیے۔ یہ زیادہ سے زیادہ دباؤ والے فیلڈز ہیٹنگ سورس ٹرم بنانے کے لیے استعمال کیے گئے تھے۔ (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}})، کہاں αnp سمجھی گئی فریکوئنسی پر دماغ کا جذب گتانک ہے (59.04 Np m1- 15 میگاہرٹز پر، سے حساب کیا جاتا ہے۔ αدماغ = 0.21 ڈی بی سینٹی میٹر1- میگاہرٹز-y اور y = 1.18)، دماغ والیومیٹرک ماس ρدماغ = 1,046 کلو میٹر-3، دماغ کی آواز کی رفتار cدماغ = 154 سیکنڈ1- اور pمیکس 3D زیادہ سے زیادہ پریشر فیلڈ ہے۔ اس ماخذ کی اصطلاح کو پھر پینی کی بائیو ہیٹ مساوات کے حل میں استعمال کیا گیا۔ (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}بائیں ({K_mathrm{t}timesnabla T} دائیں) - rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}بائیں ({T – T_mathrm{a}} دائیں) + Q) k-Wave میں، کہاں Cدماغ خون کی مخصوص حرارت کی گنجائش ہے (3,630 J kg1- ° C1-), Kt دماغ کی تھرمل چالکتا ہے (0.51 ڈبلیو میٹر1- ° C1-), ρخون خون کی کثافت ہے (1,050 kg m3-), Cخون خون کی مخصوص حرارت کی گنجائش ہے (3,617 J kg1- ° C1-), Pخون خون پرفیوژن گتانک ہے (9.7 × 103- s1-), Ta شریان کا درجہ حرارت ہے (37 ° C)، Q = QUS + ρدماغγدماغ اور γدماغ دماغی بافتوں کی حرارت کی پیداوار ہے (11.37 W kg1-) (حوالہ. 54,55)۔ دماغی درجہ حرارت کے لیے ابتدائی شرط مقرر کی گئی تھی۔ T0 = 37 °C
یہ نقلی درجہ حرارت میں اضافے کے حوالے سے بدترین صورت حال سے مماثل ہے۔ (1) صوتی پھیلاؤ کو صرف پانی میں نقل کیا جاتا ہے (غیر ڈیریٹڈ ویلیو)، جس میں کم کشندگی گتانک (2.2 × 10) ہوتا ہے۔3- dB cm MHz2.00-دماغ سے (0.59 ڈی بی سینٹی میٹر میگاہرٹز1.27-)، یہاں تک کہ اگر تبلیغ کا ایک حصہ دماغ کے اندر ہوتا ہے۔ دی pمیکس نقشے، اس وجہ سے، بہت زیادہ ہیں. (2) تھرمل جذب صرف دماغی بافتوں میں نقل کیا جاتا ہے، جس میں زیادہ جذب کے قابلیت (0.21 dB cm MHz1.18-) پانی کے مقابلے میں، یہاں تک کہ اگر زیادہ سے زیادہ دباؤ والے فیلڈ کا ایک حصہ درحقیقت صوتی کپلنگ کون کے پانی کے اندر واقع ہو۔ لہذا، QUS قدرے زیادہ اندازہ لگایا گیا ہے۔ ہم نے درجہ حرارت کو تین مقامی جہتوں اور وقت میں نقشہ بنایا، اور زیادہ سے زیادہ درجہ حرارت میں اضافے کے نقطہ کو تلاش کیا (توسیع شدہ ڈیٹا تصویر۔ 4c–f).
شماریاتی تجزیہ
شماریاتی تجزیے پرزم سافٹ ویئر (پرزم 9، گراف پیڈ) کے ذریعے کیے گئے تھے۔ اقدار کا اظہار کیا جاتا ہے اور اسے اوسط قدروں کے طور پر دکھایا جاتا ہے ± اعداد و شمار پر اور متن میں اوسط (sem) کی معیاری غلطی، جب تک کہ دوسری صورت میں بیان نہ کیا گیا ہو۔ ڈیٹا کا تجزیہ غیر جوڑا ویلچز میں کیا گیا۔ t-ٹیسٹ (دو دم والا) یا ایک غیر جوڑا متعدد t- متعدد موازنہ کے لیے Sidak-Bonferroni تصحیح کے ساتھ ٹیسٹ کریں۔ اعداد و شمار کے ٹیسٹ فگر لیجنڈز میں فراہم کیے گئے ہیں۔
رپورٹنگ کا خلاصہ۔
تحقیقاتی ڈیزائن کے بارے میں مزید معلومات اس میں دستیاب ہے۔ نیچر پورٹ فولیو رپورٹنگ کا خلاصہ اس مضمون سے منسلک
- SEO سے چلنے والا مواد اور PR کی تقسیم۔ آج ہی بڑھا دیں۔
- پلیٹو بلاک چین۔ Web3 Metaverse Intelligence. علم میں اضافہ۔ یہاں تک رسائی حاصل کریں۔
- ماخذ: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- : ہے
- ][p
- $UP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- اوپر
- تعلیمی
- رسائی
- کے مطابق
- اکاؤنٹ
- حاصل
- حاصل کرنا
- چالو کرنے کی
- سرگرمی
- اصل میں
- اعلی درجے کی
- کے بعد
- عمر
- معاہدہ
- AL
- Alexaکی بنیاد پر IQ Option ، بائنومو سے اوپری پوزیشن پر ہے۔
- تمام
- کی اجازت دیتا ہے
- تجزیہ
- لنگر
- اور
- جانور
- جانوروں
- مائپنڈوں
- اطلاقی
- کی منظوری دے دی
- تقریبا
- کیا
- رقبہ
- لڑی
- مضمون
- AS
- تشخیص
- At
- اگست
- خود کار طریقے سے
- دستیاب
- اوسط
- نگرانی
- محور
- ریڑھ کی ہڈی
- کی بنیاد پر
- بنیاد
- BE
- کیونکہ
- اس سے پہلے
- نیچے
- کے درمیان
- سیاہ
- خون
- جسم
- دماغ
- توڑ
- بفر
- تعمیر
- by
- حساب
- کر سکتے ہیں
- اہلیت
- پرواہ
- کیس
- خلیات
- مرکزی
- مرکز
- چیمبر
- چینل
- خصوصیات
- چارلس
- چپ
- منتخب کیا
- کلاس
- درجہ بندی
- کلک کریں
- کمیٹی
- مقابلے میں
- وسیع
- کمپیوٹنگ
- شرط
- منعقد
- چالکتا
- منسلک
- سمجھا
- پر غور
- مواد
- کنٹرول
- کنٹرول
- کنٹرولر
- اسی کے مطابق
- مساوی ہے
- قیمت
- مل کر
- احاطہ کرتا ہے
- اپنی مرضی کے
- سائیکل
- سائیکل
- اعداد و شمار
- ڈیٹا بیس
- دن
- دن
- کی وضاحت
- وضاحت
- ڈیلیور
- ترسیل
- کثافت
- گہرائی
- ڈیزائن
- پتہ چلا
- کھوج
- کا تعین
- کا تعین کرنے
- ترقی
- آلہ
- DID
- مختلف
- ڈیجیٹل
- ڈیجیٹل
- طول و عرض
- دریافت
- دکھائیں
- فاصلے
- تقسیم
- غلبے
- مواقع
- ڈرائیو
- کے دوران
- e
- ہر ایک
- اثرات
- توانائی
- انجنیئرنگ
- بہتر
- خرابی
- اندازے کے مطابق
- Ether (ETH)
- اخلاقیات
- یورپی
- یورپی پارلیمان
- اندازہ
- بھی
- مثال کے طور پر
- بہت پرجوش
- خارج کر دیا گیا
- تجربہ
- برآمد
- اظہار
- آنکھ
- آنکھیں
- سامنا کرنا پڑا
- میدان
- قطعات
- انجیر
- اعداد و شمار
- اعداد و شمار
- بھرے
- فلٹر
- فائرنگ
- پہلا
- مقرر
- پرواز
- توجہ مرکوز
- توجہ مرکوز
- کے بعد
- کے لئے
- فارم
- ملا
- چوتھے نمبر پر
- فریم
- فرکوےنسی
- سے
- تقریب
- فنکشنل
- بنیادی
- مزید برآں
- ge
- GE صحت کا خیال
- پیدا
- نسل
- ستادوستی
- دی
- گراؤنڈ
- گروپ
- رہنمائی
- ہیملٹن
- سر
- صحت
- صحت کی دیکھ بھال
- اعلی
- انتہائی
- HTTPS
- انسانی
- i
- شناخت
- کی نشاندہی
- IEEE
- تصاویر
- امیجنگ
- اہم
- in
- انکیوبیٹڈ
- انفرادی
- معلومات
- ابتدائی
- ان پٹ
- آلات
- دلچسپی
- ملوث
- میں
- کلیدی
- تجربہ گاہیں
- بڑے
- سب سے بڑا
- تاخیر
- قانون
- تہوں
- کنودنتیوں
- لمبائی
- سطح
- چاٹ
- زندگی
- زندگی سائنس
- روشنی
- لائن
- LINK
- منسلک
- مقامی
- مقامی طور پر
- واقع ہے
- محل وقوع
- مقامات
- لانگ
- دیکھا
- بنا
- دیکھ بھال
- اہم
- دستی طور پر
- نقشہ
- نقشہ جات
- ماس
- مواد
- زیادہ سے زیادہ
- وزارت خارجہ
- مطلب
- پیمائش
- میکانی
- درمیانہ
- مرک
- طریقہ
- چوہوں
- مائکرون
- خوردبین
- کم سے کم
- مرکب
- ML
- موڈ
- ماڈل
- MOL
- نگرانی
- مہینہ
- ماہ
- منہ
- منتقل
- MS
- ایک سے زیادہ
- اتپریورتن
- قومی
- قومی صحت کے اداروں
- فطرت، قدرت
- نیٹ ورک
- نیٹ ورک
- نیورسن
- نئی
- اگلے
- تعداد
- مقصد
- حاصل
- حاصل کی
- of
- اولمپکس
- on
- ایک
- کھولنے
- کام
- حکم
- دیگر
- دوسری صورت میں
- رات بھر
- پیرامیٹرز
- پارلیمنٹ
- حصہ
- منظور
- چوٹی
- کارکردگی کا مظاہرہ
- فونکس
- جسمانی
- ٹکڑے ٹکڑے
- پلازما
- پلاسٹک
- پلاٹا
- افلاطون ڈیٹا انٹیلی جنس
- پلیٹو ڈیٹا
- کھیلیں
- رابطہ بحال کرو
- پوائنٹ
- پوائنٹس
- پورٹ فولیو
- پوزیشن میں
- پوزیشنوں
- ممکنہ
- طاقت
- صحت سے متعلق
- پیش
- پریس
- دباؤ
- عمل
- پیدا
- تیار
- پروگرام
- خصوصیات
- پروٹوکول
- پروٹوکول
- فراہم
- پلس
- پمپ
- خرگوش
- اٹھایا
- چوہا
- شرح
- تناسب
- تک پہنچنے
- پہنچ گئی
- اصلی
- حقیقت
- وصولی
- جھلکتی ہے
- کے بارے میں
- حکومت
- خطے
- خطوں
- رجسٹریشن
- کی جگہ
- رپورٹ
- نمائندگی
- تحقیق
- تحقیقی لیبارٹریز
- قرارداد
- بالترتیب
- جواب
- جواب دیں
- جواب
- باقی
- بحالی
- بحال
- پابندی
- نتیجے
- ریٹنا
- اضافہ
- کردار
- کمرہ
- روٹ
- s
- اسی
- منظر نامے
- شیڈول
- ایس سی آئی
- سائنس
- سائنس
- سکرپٹ
- دوسری
- ثانوی
- سیکشنز
- منتخب
- انتخابی
- حساسیت
- سینسر
- تسلسل
- سیرم
- اجلاس
- سیشن
- مقرر
- سائز
- سگما
- اشارہ
- سگنل
- سلیکن
- اسی طرح
- تخروپن
- سائٹ
- چھ
- سائز
- جلد
- سلائس
- چھوٹے
- سافٹ ویئر کی
- حل
- آواز
- ماخذ
- مقامی
- مخصوص
- مخصوص
- تیزی
- بڑھتی ہوئی وارداتوں
- spikes
- کمرشل
- پھیلانا
- Stacks
- اسٹیج
- معیار
- شماریات
- سٹیل
- محرک
- مطالعہ
- کامیابی
- اعلی
- سطح
- معطلی
- معطلی
- سوئچڈ
- کے نظام
- سسٹمز
- ٹینک
- ہدف
- ھدف بندی
- ٹاسک
- ٹیکنالوجی
- ٹیسٹ
- ٹیسٹ
- کہ
- ۔
- علاقہ
- ان
- لہذا
- تھرمل
- یہ
- تھامسن
- ہزاروں
- تین
- تین جہتی
- حد
- کے ذریعے
- وقت
- ؤتکوں کو
- کرنے کے لئے
- آلات
- تربیت یافتہ
- منتقل
- مقدمے کی سماعت
- ٹرائلز
- حقیقت
- الٹراساؤنڈ
- us
- استعمال کی شرائط
- صارفین
- v1
- توثیقی
- قیمت
- اقدار
- والو
- VBA
- توثیق
- تصدیق
- نقطہ نظر
- vivo
- مقدار
- W
- پانی
- لہر
- ہفتے کے آخر میں
- مہینے
- وزن
- اچھا ہے
- جس
- سفید
- کھڑکیاں
- ساتھ
- کے اندر
- دنیا
- لکھا
- زیفیرنیٹ