Hayvanlar
Deneyler, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Rehberine uygun olarak yapılmıştır. Protokoller, Yerel Hayvan Etik Komitesi (Komite Charles Darwin no. 5, kayıt no. 9529 ve 26889) tarafından onaylandı ve Avrupa Parlamentosu'nun 2010/63/EU Direktifi ile uyumlu olarak yürütüldü. 2 ila 12 aylık Long-Evans erkek fareleri ve 57 haftalık WT erkek fareleri (C6BL/9J) Janvier Laboratories'den alındı; P23H (line 1) erkek transgenik sıçanlar (9-22 aylık) yerel olarak büyütüldü.
Plazmit klonlama ve AAV üretimi
içeren plazmitler E. coli mscL WT formundaki ve G22S mutasyonlu sekans, Francesco Difato'dan elde edildi (Addgene plazmitleri #107454 ve #107455)28. RGC'leri hedeflemek için, SNCG promotörü31 içeren bir AAV omurga plazmitine yerleştirildi. mscL plazma zarında ekspresyonu yönlendirmek için tdTomato genine ve Kir2.1 ER dışa aktarma sinyaline kaynaşmış sekans. İntravitreus uygulama için bir AAV2.7m8 vektörü kullanıldı. V1 kortikal katmanlardaki nöronları hedeflemek için SNCG promotörü, CamKII promotörü ile değiştirildi ve bir AAV9.7m8 vektörü seçildi. Rekombinant AAV'ler, plazmid ortak transfeksiyon yöntemiyle üretildi ve elde edilen lizatlar, iyodiksanol saflaştırması ile saflaştırıldı.31.
ABD teşviki
Farklı merkezi frekanslara sahip üç odaklanmış ABD transdüseri kullanıldı: 0.50 MHz (çap, Ø = 1.00" = 25.4 mm; odak uzaklığı, f = 1.25 inç = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00" = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) ve 15.00 MHz (Ø = 0.50" = 12.7 mm, f = 1.00" = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), sayısal açıklıklara karşılık gelir F/Ø = 1.25 ve 2.00. Bu üç odaklanmış dönüştürücü tarafından yayılan akustik alanlar, Şekil XNUMX'de sunulmaktadır. 1 (simülasyonlar) ve Genişletilmiş Veri Şek. 3 (deneysel ölçümler). Uyaran dalga biçimini üretmek için bir TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) kullanıldı ve bu daha sonra dönüştürücüye bağlı bir 80 dB RF güç amplifikatöründen (VBA 230-80, Vectawave) geçirildi. Dönüştürücü basınç çıktıları (odaktaki basınç, üç boyutlu (3D) basınç haritaları), bir Royer-Dieulesaint heterodin interferometre ile gazı giderilmiş bir su tankında ölçülmüştür.47. Ex vivo ve in vivo stimülasyon için kullanılan ABD uyaranları şu özelliklere sahipti: %1 görev döngüsüyle 50 kHz darbe tekrarlama frekansı, 10 ila 200 ms arasında sonikasyon süresi ve 0.01 ila 2.00 s arasında uyaranlar arası aralık. Pik akustik basınçlar, 0.11, 0.88 ve 0.30 MHz transdüserler için sırasıyla 1.60 ila 0.20 MPa, 1.27 ila 0.50 MPa ve 2.25 ila 15.00 MPa aralığındaydı. Karşılık gelen tahmini uzamsal tepe darbe ortalama yoğunluğu (Isppa) değerleri 0.39–25.14, 2.92–83.12 ve 1.30–52.37 W cm idi.-2.
İntravitreöz gen iletimi ve retinal görüntüleme
Sıçanlar anestezi altına alındı48 ve 2 ila 8 × 14 içeren AAV süspansiyonu (10 µl)10 viral partiküller, vitreus boşluğunun merkezine enjekte edildi. Bir ay sonra, enjekte edilen gözlerde bir MICRON IV retinal görüntüleme mikroskobu (Phoenix Research Laboratories) ve Micron Discover v.2.2 ile tdTomato floresan görüntüleme yapıldı.
MEA kayıtları
Retina parçaları bir filtre zarı (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) üzerinde düzleştirildi ve poli- ile kaplanmış bir MEA (elektrot çapı, 30 um; aralık, 200 um; MEA256 200/30 iR-ITO, Çok Kanallı Sistemler) üzerine yerleştirildi.l-lizin (%0.1, Sigma), elektrotlara bakan RGC'ler ile31. AMPA/kainat glutamat reseptörü antagonisti 6-siyano-7-nitrokinoksalin-2,3-dion (CNQX, 25 uM, Sigma-Aldrich), NMDA glutamat reseptörü antagonisti [3H]3-(2-karboksipiperazin-4-il) propil -1-fosfonik asit (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) ve seçici bir grup III metabotropik glutamat reseptörü agonisti, l-(+)-2-amino-4-fosfonobütirik asit (LAP4, 50 uM, Tocris Bioscience), perfüzyon hattından banyo uygulandı. Işık uyaranları, fotoreseptör düzlemine (ışıma, 1,024 µW cm-768) odaklanan beyaz bir ışık yayan diyot ışık kaynağına (MNWHL4, Thorlabs) bağlı bir dijital mikro ayna ekranı (Vialux; çözünürlük, 1 × XNUMX) ile verildi.-2). ABD transdüserleri, gazı giderilmiş suyla doldurulmuş ve retinanın üzerine dikey olarak yerleştirilmiş motorlu bir aşamaya (PT3/M-Z8, Thorlabs) monte edilmiş, ısmarlama bir bağlantı konisi ile birleştirildi. MEA çipinin ve retinanın yansıyan sinyali, bir ABD anahtar cihazı (Lecoeur Electronique) ile tespit edildi. Retina ve dönüştürücü arasındaki mesafe, dönüştürücünün odak uzaklığına eşitti; bu, yansıyan sinyalin uçuş süresi ile doğrulandı. 252 kanal ön amplifikatör ve MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems) ile RGC kayıtlarından, spike'lar Spyking CIRCUS 0.5 yazılımı ile sıralandı49. RGC yanıtları, yanıt baskınlık indeksi ile AÇIK, AÇIK-KAPALI veya KAPALI olarak sınıflandırmak için MATLAB'da (MathWorks 2018b) yazılmış özel komut dosyalarıyla analiz edildi.50. Gecikmeler, uyaran başlangıcı ile ani yoğunluk fonksiyonunun (SDF) türevinin maksimum değeri arasındaki süre olarak hesaplandı. NT hücrelerinin US'ye yanıtlarının gecikme dağılımının minimumuna (45 ms) eşit bir eşik sabitlenerek, gecikmeye dayalı olarak ABD'ye yanıt veren iki hücre sınıfı belirlendi: SL ve LL. Pik değeri belirledik A SDF'nin eşit olduğu iki zaman noktası arasındaki zaman aralığı olarak tanımlanan yanıt süresinin hesaplanması için SDF'nin A/e (nerede A tepe depolarizasyon ve e Euler sayısıdır). Spike sayısı değişkenliğini ölçen Fano faktörü, spike sayısındaki varyansın ortalamaya oranı olarak hesaplandı. Etkinleştirilmiş iki hücre arasındaki Öklid mesafesi, hücrelerin maksimum ateşleme hızına göre ağırlıklandırılmıştır. Aktif hücre sayısının MEA çipinde uyarılan alanın boyutuna oranı, 2.25 ve 15.00 MHz için ABD odak noktasının boyutu ve 0.50 MHz için MEA'nın boyutu dikkate alınarak hesaplandı, çünkü odak noktası daha büyüktü. bu frekans için MEA'dan daha fazla. Yanıtın merkezi, her bir hücrenin maksimum ateşleme hızının diğer yanıt veren hücrelerden uzaklığına ağırlık verilerek tahmin edildi ve yanıtın yer değiştirmesi, iki yanıt merkezi konumu arasındaki Öklid mesafesi olarak hesaplandı.
intrakraniyal enjeksiyonlar
AAV süspansiyonları sağ hemisfere sıçanlarda iki farklı lokasyona (2.6 mm ML, 6.8 mm AP ve 3.1 mm ML, bregmadan 7.2 mm AP) veya farelerde bir lokasyona (2.5 mm ML, 3.5 mm AP bregmadan) enjekte edildi. bregma)48. Sıçan enjeksiyonları için süspansiyon (200–0.2 × 8.0 içeren 10 nl15 viral partiküller) üç farklı derinliğe (kortikal yüzeyden 1,100, 1,350 ve 1,500 µm) 4 n/dk hızında çalışan bir mikro şırınga pompası kontrolörü (Micro50, World Precision Instruments) ile enjekte edildi.-1 ve 10 ul Hamilton şırıngası. Farelerde, AAV süspansiyonu (1–0.2 × 8.0 içeren 10 µl15 viral partiküller) kortikal yüzeyden 400 µm'de 100 nl dk hızında enjekte edildi-1.
In vivo hücre dışı kayıtlar
AAV enjeksiyonlarından bir ay sonra küçük bir kraniyotomi (5×5 mm)2) sağ hemisferde V1'in üzerinde gerçekleştirildi48. tdTomato floresansı, bir MICRON IV retina görüntüleme mikroskobu ve Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories) ile kontrol edildi. 32 alanlı bir uEcog elektrot dizisi (elektrot çapı, 30 um; elektrot aralığı, 300 um; FlexMEA36, Çok Kanallı Sistemler), transfekte edilmiş bölge üzerine veya kontrol fareleri için benzer bir bölgeye yerleştirildi. MEA kayıtları, beyin yüzeyine 16° eğimli 45 bölgeli bir silikon mikroprob (elektrot çapı, 30 um; aralık, 50 um; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) ve MC_Rack v. 4.6.2 ile yapıldı. MEA, üç eksenli bir mikromanipülatör (Sutter Instruments) ile kortekse 1,100 µm ilerletildi. US transdüserleri, motorize bir aşamada gazdan arındırılmış su ve US jeli ile doldurulmuş özel yapım bir bağlantı konisi ile beyne bağlandı. Korteks ile dönüştürücü arasındaki mesafe, dönüştürücünün odak uzaklığına eşitti. Görsel uyaranlar, gözden 4 cm uzağa (15 mW cm-4.5) yerleştirilmiş beyaz ışıkla koşutlanmış bir ışık yayan diyot (MNWHLXNUMX, Thorlabs) tarafından üretildi.-2 korneada). Kayıtlar 32 kanal ve 16 kanal amplifikatörler (model ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems) ile sayısallaştırıldı. µEcog kayıtları, özel olarak geliştirilmiş MATLAB betikleri ile analiz edildi ve MEA kayıtları, Spyking CIRCUS yazılımı ve özel olarak geliştirilmiş MATLAB betikleri ile analiz edildi. Tepki süresi, kortikal uyarılmış potansiyelin şuna eşit olduğu iki zaman noktası arasındaki aralık olarak hesaplandı: A/e. Aktive edilmiş alan, tepe depolarizasyonun sinyalin 2 x sd'si olarak hesaplanan arka plan gürültü seviyesini aştığı sahte renkli aktivasyon haritasının alanı olarak tanımlandı. Tepki merkezi, her elektrotun tepe depolarizasyonunun diğer elektrotlardan uzaklığı ile ağırlıklandırılmasıyla tahmin edildi. ABD dönüştürücüsünü hareket ettirirken göreli yer değiştirmesi, iki konumun Öklid mesafesi olarak hesaplandı. İntrakortikal kayıtlar için hücre gecikmesi, uyaran başlangıcı ile SDF türevinin maksimum değeri arasındaki süre olarak tahmin edildi.
İn vivo davranış testleri için cerrahi
C57BL6J farelerine deri altından buprenorfin (0.05 mg kg-XNUMX) enjekte edildi.-1) (Buprécare, Axience) ve deksametazon (0.7 mg kg--1) (Dexazone, Virbac). Hayvanlara izofluran (%5 indüksiyon ve %2 bakım, hava/oksijen karışımı içinde) ile anestezi uygulandı ve başları tıraş edildi ve antiseptik bir solüsyonla temizlendi. Hayvanlar, bir izofluran dağıtım sistemi ve göz merhemi ile stereotaktik bir çerçeveye sabitlendi ve gözlerin üzerine siyah bir doku uygulandı. Vücut ısısı 37 °C'de tutuldu. Lokal bir lidokain enjeksiyonundan sonra (4 mg kg--1) (Laocaïne, Centravet), ciltte bir kesi yapıldı. Küçük bir kraniyotomi (yaklaşık 5.0 x 5.0 mm) sonrasında kafatasına iki vida sabitlendi.2) sağ hemisferde V1'in üzerinde gerçekleştirildi (0.5 mm çelik matkap) ve bir korteks tamponu uygulandı. Korteks, bir TPX plastik levha (125 um kalınlığında) ile kaplandı ve dental akrilik çimento (Tetric Evoflow) ile kapatıldı. Davranış deneyleri için, baş sabitleme için metalik bir başlık (PhenoSys) daha sonra diş çimentosu (FujiCEM 2) ile sol yarımkürede kafatasına yapıştırılmıştır. Hayvanlar, gözlerine deri altından fizyolojik serum ve merhem (Ophtalon, Centravet) enjeksiyonu yapılan bir kurtarma odasına yerleştirildi. Ameliyat sonrası izlemde buprenorfin enjekte edildi.
Fare davranış testleri
Fareler, ağırlıklarının yaklaşık %80-85'ine ulaşana kadar bir su kısıtlama programına yerleştirildi. Test koşullarına alışmanın ardından36, fareler, gönüllü bir tespit görevi gerçekleştirerek bir LS'ye yanıt verecek şekilde eğitildi: beyaz ışıklı tam alan stimülasyonuna (18 ve 5 ms uzunluğunda) yanıt olarak bir su hortumu yalama (200 gauge keskin iğne, ağızdan yaklaşık 50 mm) sol göz (tropikamid, Mydriaticum Dispersa ile dilate edilmiş) stimülasyon süresi başına 35'ten fazla deneme ve dolayısıyla günde 70 deneme. Işık açıldıktan 4 ms sonra kalibre edilmiş bir su sistemi aracılığıyla su (~500 ul) otomatik olarak dağıtıldı. Davranış protokolü ve yalama tespiti, özel yapım bir sistem tarafından kontrol edildi36. Sonraki dört gün (hafta sonu iki günlük ara), US stimülasyonları V1'de 50 ms boyunca üç farklı basınç değerinde (0.2, 0.7 ve 1.2 MPa) verildi. Bu basınç değerleri, her gün farklı bir sırayla verildi (her biri 35 deneme). Denemeler arası aralıklar rastgele değişti ve 10 ila 30 saniye arasında değişti. 15 MHz US dönüştürücü, su ve US jeli ile doldurulmuş ısmarlama bir bağlantı konisi ile beyne bağlandı. Başarı oranı, farelerin beklenti yalamaları gerçekleştirdiği denemelerin sayısı sayılarak hesaplandı (uyaran başlangıcı ile su valfinin açılması arasında). Beklenen yalama oranı (Şek. 6eoturum için, bir denemenin beklenen yalama hızından, spontan yalama hızından (her bir uyaran başlangıcından önceki tüm 1 s zaman pencerelerinde hesaplanmıştır) çıkarılarak hesaplanmıştır (Şekil XNUMXa). 6a) tüm denemeler için) ve başarı oranı ile çarpma. Yalama gecikmesi, uyaran başlangıcından sonraki ilk beklenen yalamaya kadar geçen süre belirlenerek hesaplandı. Analiz için tutulan fareler, LS'yi takip eden dördüncü günde %60'a eşit veya daha yüksek bir başarı oranı sundu. Ardından, zorlayıcı bir yalama davranışı gösteren hafif veya ABD seansları, ROUT yöntemi kullanılarak yapılan aykırı değer tanımlamasına göre hariç tutuldu (Q Denemenin uyaran başlangıcından önceki 1 s zaman penceresindeki oturumun tüm denemelerindeki ölçümlerin ortalamasını alarak oturumun spontan yalama oranında %1 =.
İmmünohistokimya ve konfokal görüntüleme
Numuneler, retina için bir monoklonal anti-RBPMS antikoru (4:1, tavşan; ABN500, Merck Millipore) ile gece boyunca 1362 °C'de inkübe edildi31, beyin kesitleri için bir monoklonal anti-NeuN antikoru (1:500, fare, klon A60; MAB377, Merck Millipore) ile48. Kesitler daha sonra Alexa Fluor 488 (sırasıyla 1:500, eşek anti-fare ve eşek anti-tavşan IgG 488, poliklonal; sırasıyla A-21202 ve A-21206, Invitrogen) ve DAPI (1:1,000) ile konjuge sekonder antikorlarla inkübe edildi. ; D9542, Merck Millipore) oda sıcaklığında 1 saat. Düz monteli retinaların ve beyin bölümlerinin (FV1000-ASW v. 20 yazılımı) görüntülerini elde etmek için ×20 objektifli (0.85 sayısal açıklığa sahip UPLSAPO 10XO) bir Olympus FV4.2 konfokal mikroskop kullanıldı.
Fiji (ImageJ v. 1.53q) ile işlenen konfokal görüntülerde, RBPMS- ve NeuN-pozitif hücreler, "partikülleri analiz et" eklentisi ile otomatik olarak sayıldı. Hücreler, 'hücre sayacı' eklentisi ile iki farklı kullanıcı tarafından manuel olarak sayıldı. 0.4 mm'lik rasgele seçilmiş en az dört transfekte bölgede konfokal yığınlar elde edilerek niceleme yapıldı.2 (Genişletilmiş Veri Fig. 1). V1 nöronları için, her hayvan için en büyük tdTomato floresans bölgesine sahip sagittal beyin dilimi seçildi. V1'de bir ilgi bölgesi manuel olarak tanımlandı ve kantifikasyonlar, rasgele seçilen en az altı 0.4 mm'lik bölgede gerçekleştirildi.2.
ABD kaynaklı doku ısıtma simülasyonları
Termal etkilerin tahmini için üç aşamalı bir süreç kullanıldı: (1) gerçekçi akustik parametrelerle üç dönüştürücü tarafından oluşturulan akustik alanların simülasyonu; (2) doğrusal olmayan akustiğin ısı transferinde önemli bir rol oynamadığının doğrulanması; ve (3) bu çalışmada kullanılan parametreler için doğrusal bir rejimde ABD tarafından odakta indüklenen ısı transferi ve sıcaklık artışının gerçekçi simülasyonları.
Doğrusal olmayan simülasyonlar için, dönüştürücünün geometrisini üç boyutlu olarak tanımlayarak ve yayılma ortamı (su) için aşağıdaki parametreleri kullanarak MATLAB'ın k-Wave araç kutusunu kullandık: ses hızı, c = 1,500 ms-1; hacimsel kütle, ρ = 1,000 kg m-3; doğrusal olmama katsayısı, B/A = 5; zayıflama katsayısı, α = 2.2 × 10-3 dBcm-1 MHz-y; zayıflama katsayısının frekans güç yasası, y = 2 (ref. 51). 3 döngülük uzun patlamalar kullanarak yarı monokromatik 50B dalga alanlarını simüle ettik; bu bize odaktaki dalga formunun yanı sıra üç boyutta maksimum basınç alanını verdi. Simülasyonlar, gerçek dönüştürücülerle su tankında ölçülen odaktaki basınca ulaşmak için giriş basıncını ayarlayarak (simüle edilmiş dönüştürücünün uyarımı) kalibre edildi. Yarı maksimumda tam genişlik (FWHM) odak noktası çapı x-y düzlem 4.360, 1.610 ve 0.276 mm idi ve ana eksenin uzunluğu x-z düzlem, 32.3, 20.6 ve 3.75 MHz transdüserler için sırasıyla 0.50, 2.25 ve 15.00 mm idi (Şekil. 1b-d). Doğrusal olmayan etkiler, dalga formunun odaktaki göreli harmonik içeriği tahmin edilerek değerlendirildi. Şekil 15'deki XNUMX MHz odak dönüştürücü örneğinde. 1d, odak noktasındaki deneysel ve simüle edilmiş sinyaller karşılaştırıldı ve oldukça uyumlu olduğu bulundu (Genişletilmiş Veri Şek. 4a). Ayrıca, ikinci harmoniğin genliği temelin 19.8 dB altındadır (simüle edilmiş durumda 20.9 dB), yani temel enerji E, ikinci harmoniğin enerjisi vardır E/95 (Genişletilmiş Veri Şek. 4b). Bu nedenle, ilgili enerjinin ~%1'ini oluşturduklarından, termal etkilerin hesaplanmasında doğrusal olmayan etkileri makul bir şekilde ihmal edebiliriz. Aynı sonuçlar 0.5 MHz ve 15.0 MHz'de çıkarıldı. Doğrusal dalga yayılım yaklaşımları, simülasyonların hesaplama maliyetini önemli ölçüde azaltmıştır. MATLAB'de Field II araç kutusu ile doğrusal yayılım simülasyonları yapılmıştır.52,533D maksimum basınç alanlarını elde etmek için k-Dalgası (su) ile aynı ortam özelliklerine sahip monokromatik modda. Bu maksimum basınç alanları, bir ısıtma kaynağı terimi oluşturmak için kullanıldı. (Q_{mathrm{ABD}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Burada αnp dikkate alınan frekansta beynin soğurma katsayısıdır (59.04 Np m-1 15 MHz'de, hesaplanan αbeyin = 0.21 dBcm-1 MHz-y ve y = 1.18), beyin hacimsel kütlesi ρbeyin = 1,046 kg m-3, beyin ses hızı cbeyin = 154 sn-1 ve pmaksimum 3D maksimum basınç alanıdır. Bu kaynak terim daha sonra bir Penne'nin biyoısı denkleminin çözümünde kullanıldı. (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{kısmi T}}{{kısmi t}} = mathrm{div}sol( {K_mathrm{t}timesnabla T} sağ) – rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}sol( {T – T_mathrm{a}} sağ) + Q) k-Wave'de, nerede Cbeyin kanın özgül ısı kapasitesidir (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt beyin termal iletkenliğidir (0.51 W m-1 ° C-1), ρkan kan yoğunluğu (1,050 kg m-3), Ckan kanın özgül ısı kapasitesidir (3,617 J kg-1 ° C-1), Pkan kan perfüzyon katsayısıdır (9.7 × 10-3 s-1), Ta arteriyel sıcaklıktır (37 °C), Q = QUS + ρbeyinγbeyin ve γbeyin beyin dokusunun ısı üretimidir (11.37 W kg-1) (ref. 54,55). Beyin sıcaklığı için başlangıç koşulu olarak ayarlandı T0 = 37 °C.
Bu simülasyon, verilen sıcaklık artışına ilişkin en kötü durum senaryosuna karşılık gelir. (1) Akustik yayılım, daha düşük bir zayıflama katsayısıyla (2.2 × 10-3 dB cm MHz-2.00) beyinden (0.59 dB cm MHz)-1.27), yayılmanın bir kısmı beyinde gerçekleşse bile. bu pmaksimum haritalar bu nedenle fazla tahmin edilmektedir. (2) Termal absorpsiyon, daha yüksek bir absorpsiyon katsayısıyla (0.21 dB cm MHz) yalnızca beyin dokusunda simüle edilir.-1.18) sudan daha fazla, maksimum basınç alanının bir kısmı aslında akustik bağlantı konisinin suyu içinde yer alsa bile. Öyleyse, QUS biraz abartılıyor. Sıcaklığı üç uzamsal boyutta ve zamanda haritaladık ve maksimum sıcaklık artış noktasını aradık (Genişletilmiş Veri Şek. 4c-f).
istatistiksel analiz
İstatistiksel analizler Prism yazılımı (Prism 9, GraphPad) ile yapılmıştır. Değerler, aksi belirtilmedikçe, şekillerde ve metinde ortalama değerler ± ortalamanın (sem) standart hatası olarak ifade edilmiş ve temsil edilmiştir. Veriler eşleştirilmemiş Welch'lerde analiz edildi t-testler (iki kuyruklu) veya eşleştirilmemiş çoklu t-çoklu karşılaştırmalar için Sidak–Bonferroni düzeltmesi ile test edin. İstatistiksel testler şekil açıklamalarında verilmiştir.
Raporlama özeti
Araştırma tasarımı hakkında daha fazla bilgi Doğa Portföyü Raporlama Özeti bu makaleye bağlantılı.
- SEO Destekli İçerik ve Halkla İlişkiler Dağıtımı. Bugün Gücünüzü Artırın.
- Plato blok zinciri. Web3 Metaverse Zekası. Bilgi Güçlendirildi. Buradan Erişin.
- Kaynak: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :dır-dir
- ][P
- $UP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- yukarıdaki
- akademik
- erişilen
- Göre
- Hesap
- kazanmak
- edinme
- Etkinleştirme
- etkinlik
- aslında
- ileri
- Sonra
- yaşlı
- Bireysel Üyelik Sözleşmesi
- AL
- Alexa
- Türkiye
- veriyor
- analiz
- Çapa
- ve
- hayvan
- hayvanlar
- Antikorlar
- uygulamalı
- onaylı
- yaklaşık olarak
- ARE
- ALAN
- Dizi
- göre
- AS
- değerlendirme
- At
- Ağustos
- otomatik olarak
- mevcut
- ortalama
- ortalama
- eksen
- Omurga
- merkezli
- temel
- BE
- Çünkü
- önce
- altında
- arasında
- Siyah
- kan
- vücut
- Beyin
- mola
- tampon
- inşa etmek
- by
- hesaplanmış
- CAN
- Kapasite
- hangi
- dava
- Hücreler
- merkezi
- merkez
- Bölme
- Telegram Kanal
- özellikleri
- Charles
- yonga
- seçilmiş
- sınıflar
- sınıflandırma
- tıklayın
- komite
- karşılaştırıldığında
- kapsamlı
- bilgisayar
- koşul
- yürütülen
- iletkenlik
- bağlı
- kabul
- düşünen
- içerik
- kontrol
- kontrollü
- kontrolör
- uyan
- tekabül
- Ücret
- çiftleşmiş
- kaplı
- görenek
- devir
- döngüleri
- veri
- veritabanı
- gün
- Günler
- tanımlı
- tanımlarken
- teslim edilen
- teslim
- yoğunluk
- Derinlikleri
- Dizayn
- algılandı
- Bulma
- kararlı
- belirlenmesi
- gelişme
- cihaz
- DID
- farklı
- dijital
- sayısallaştırılmış
- boyutlar
- keşfetmek
- ekran
- mesafe
- dağıtım
- Hakimiyet
- çekilmiş
- sürücü
- sırasında
- e
- her
- etkileri
- enerji
- Mühendislik
- gelişmiş
- hata
- tahmini
- Eter (ETH)
- etik
- Avrupa
- Avrupa Parlementosu
- değerlendirilir
- Hatta
- örnek
- uyarılmış
- hariç
- deneyim
- ihracat
- ifade
- göz
- Gözler
- karşı
- alan
- Alanlar
- Incir
- şekil
- rakamlar
- dolu
- filtre
- ateşleme
- Ad
- sabit
- uçuş
- odak
- odaklanmış
- takip etme
- İçin
- Airdrop Formu
- bulundu
- Dördüncü
- ÇERÇEVE
- Sıklık
- itibaren
- işlev
- fonksiyonel
- temel
- Ayrıca
- ge
- GE Healthcare
- oluşturulan
- nesil
- geometri
- verilmiş
- Zemin
- grup
- rehberlik
- Hamilton
- baş
- Sağlık
- sağlık
- daha yüksek
- büyük ölçüde
- HTTPS
- insan
- i
- Kimlik
- tespit
- IEEE
- görüntüleri
- Görüntüleme
- önemli
- in
- inkübe
- bireysel
- bilgi
- ilk
- giriş
- enstrümanlar
- faiz
- ilgili
- ONUN
- anahtar
- laboratuvar
- büyük
- büyük
- Gecikme
- Kanun
- katmanları
- Efsaneler
- uzunluk
- seviye
- yalama
- hayat
- Yaşam Bilimleri
- ışık
- çizgi
- LINK
- bağlantılı
- yerel
- lokal olarak
- bulunan
- yer
- yerleri
- Uzun
- baktı
- yapılmış
- bakım
- büyük
- el ile
- harita
- Haritalar
- Kitle
- malzeme
- maksimum
- MEA
- anlam
- ölçümler
- mekanik
- orta
- Merck
- yöntem
- fareler
- mikron
- Mikroskop
- asgari
- karışım
- ML
- Moda
- model
- MOL
- izleme
- Ay
- ay
- ağız
- hareketli
- MS
- çoklu
- Mutasyon
- ulusal
- Ulusal Sağlık Enstitüleri
- Tabiat
- ağ
- ağlar
- Nöronlar
- yeni
- sonraki
- numara
- nesnel
- elde etmek
- elde
- of
- olympus
- on
- ONE
- açma
- işletme
- sipariş
- Diğer
- aksi takdirde
- bir gecede
- parametreler
- parlamento
- Bölüm
- geçti
- zirve
- icra
- anka kuşu
- fiziksel
- parçalar
- Plazma
- plastik
- Platon
- Plato Veri Zekası
- PlatoVeri
- OYNA
- fişe takmak
- Nokta
- noktaları
- portföy
- yerleştirilmiş
- pozisyonları
- potansiyel
- güç kelimesini seçerim
- Hassas
- sundu
- basın
- basınç
- süreç
- üretmek
- Üretilmiş
- Programı
- özellikleri
- protokol
- protokolleri
- sağlanan
- nabız
- pompa
- tavşan
- yükseltilmiş
- SIÇAN
- oran
- oran
- ulaşmak
- ulaştı
- gerçek
- реалистичный,en
- kurtarma
- yansıtılan
- ilişkin
- rejim
- bölge
- bölgeler
- kayıtlar
- yerine
- Raporlama
- temsil
- araştırma
- araştırma laboratuvarları
- çözüm
- sırasıyla
- Yanıtlamak
- yanıt
- yanıt
- DİNLENME
- restorasyon
- geri
- kısıtlama
- Ortaya çıkan
- Retina
- Yükselmek
- Rol
- oda
- hezimet
- s
- aynı
- senaryo
- program
- SCI
- Bilim
- BİLİMLERİ
- scriptler
- İkinci
- ikincil
- bölümler
- seçilmiş
- seçici
- Duyarlılık
- sensörler
- Dizi
- Serum
- Oturum
- oturumları
- set
- şeklinde
- Sigma
- işaret
- sinyalleri
- Silikon
- benzer
- simülasyon
- yer
- ALTINCI
- beden
- cilt
- Dilim
- küçük
- Yazılım
- çözüm
- Ses
- Kaynak
- uzaysal
- özel
- Belirtilen
- hız
- başak
- çiviler
- Spot
- Yayma
- Yığınları
- Aşama
- standart
- istatistiksel
- çelik
- uyarıcı
- Ders çalışma
- başarı
- üstün
- yüzey
- süspansiyon
- süspansiyonlar
- anahtarlamalı
- sistem
- Sistemler
- tank
- Hedef
- hedefleme
- Görev
- Teknolojileri
- test
- testleri
- o
- The
- Alan
- ve bazı Asya
- bu nedenle
- termal
- Bunlar
- thompson
- Binlerce
- üç
- Üç-boyutlu
- eşik
- İçinden
- zaman
- dokular
- için
- Araç Kutusu
- eğitilmiş
- transfer
- deneme
- denemeler
- Hakikat
- ultrason
- us
- kullanım
- kullanıcılar
- v1
- valide
- değer
- Değerler
- valf
- VBA
- Doğrulama
- Doğrulanmış
- vizyonumuz
- in vivo
- volumetrik
- W
- Su
- dalga
- hafta sonu
- Haftalar
- ağırlık
- İYİ
- hangi
- beyaz
- pencereler
- ile
- içinde
- Dünya
- yazılı
- zefirnet