djur
Experiment utfördes i enlighet med National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Protokollen godkändes av den lokala djuretiska kommittén (utskottet Charles Darwin nr 5, registreringsnummer 9529 och 26889) och genomfördes i enlighet med Europaparlamentets direktiv 2010/63/EU. Long-Evans hanråttor i åldern mellan 2 och 12 månader och WT-hanmöss (C57BL/6J) i åldern 9 veckor erhölls från Janvier Laboratories; P23H (rad 1) transgena råttor av hankön (9–22 månader) föddes upp lokalt.
Plasmidkloning och AAV-produktion
Plasmider som innehåller E. coli mscL sekvensen i WT-form och med G22S-mutationen erhölls från Francesco Difato (Addgene-plasmiderna #107454 och #107455)28. För att rikta in sig på RGC, SNCG-promotorn31 sattes in i en AAV-ryggradsplasmid innehållande mscL sekvens fusionerad till tdTomato-genen och Kir2.1 ER-exportsignalen, för att driva uttryck vid plasmamembranet. En AAV2.7m8-vektor användes för intravitrös leverans. För att rikta neuroner i V1-kortikala skikten ersattes SNCG-promotorn med CamKII-promotorn och en AAV9.7m8-vektor valdes. Rekombinanta AAV producerades med plasmidsamtransfektionsmetoden och de resulterande lysaten renades genom jodixanolrening31.
USA: s stimulans
Tre fokuserade amerikanska givare med olika centrala frekvenser användes: 0.50 MHz (diameter, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; brännvidd, f = 1.25 tum = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50 tum = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) och 15.00 MHz (Ø = 0.50 tum = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), motsvarande numeriska öppningar på F/Ø = 1.25 och 2.00. Akustiska fält som utstrålas av dessa tre fokuserade omvandlare presenteras i fig. 1 (simuleringar) och utökade data Fig. 3 (experimentella mätningar). Ett TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) användes för att producera stimulusvågformen, som sedan fördes genom en 80 dB RF-effektförstärkare (VBA 230-80, Vectawave) ansluten till givaren. Givartryckutgångar (tryck vid fokus, tredimensionella (3D) tryckkartor) mättes i en avgasad vattentank med en Royer-Dieulesaint heterodyne interferometer47. US-stimuli som användes för ex vivo och in vivo-stimulering hade följande egenskaper: 1 kHz pulsrepetitionsfrekvens med en 50% arbetscykel, sonikeringsvaraktighet mellan 10 och 200 ms och interstimulusintervall mellan 0.01 och 2.00 s. Toppakustiska tryck varierade från 0.11 till 0.88 MPa, 0.30 till 1.60 MPa och 0.20 till 1.27 MPa för 0.50, 2.25 respektive 15.00 MHz-omvandlarna. Motsvarande uppskattade rumsliga topppulsmedelintensitetsvärden (Isppa) var 0.39–25.14, 2.92–83.12 och 1.30–52.37 W cm-2.
Intravitrös genleverans och retinal avbildning
Råttor sövdes48 och AAV-suspension (2 µl), innehållande mellan 8 och 14 × 1010 viruspartiklar, injicerades i mitten av glaskroppen. En månad senare utfördes tdTomato fluorescensavbildning på de injicerade ögonen med ett MICRON IV retinalmikroskop (Phoenix Research Laboratories) och Micron Discover v.2.2.
MEA-inspelningar
Näthinnebitar plattades ut på ett filtermembran (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) och placerades på en MEA (elektroddiameter, 30 µm; avstånd, 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems) belagd med poly-l-lysin (0.1 %, Sigma), med RGC:er vända mot elektroderna31. AMPA/kainat-glutamatreceptorantagonist 6-cyano-7-nitrokinoxalin-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), NMDA-glutamatreceptorantagonisten [3H]3-(2-karboxipiperazin-4-yl) propyl -1-fosfonsyra (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) och en selektiv grupp III metabotropisk glutamatreceptoragonist, l-(+)-2-amino-4-fosfonosmörsyra (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), badapplicerades genom perfusionslinjen. Ljusstimuli levererades med en digital mikrospegeldisplay (Vialux; upplösning, 1,024 768 × 4) kopplad till en vit lysdiodljuskälla (MNWHL1, Thorlabs) fokuserad på fotoreceptorplanet (instrålning, XNUMX µW cm-2). US-transduktorer kopplades med en skräddarsydd kopplingskon fylld med avgasat vatten och monterade på ett motoriserat bord (PT3/M-Z8, Thorlabs) placerat ortogonalt ovanför näthinnan. Den reflekterade signalen från MEA-chippet och näthinnan detekterades med en amerikansk nyckelanordning (Lecoeur Electronique). Avståndet mellan näthinnan och givaren var lika med givarens brännvidd; detta verifierades med flygtiden för den reflekterade signalen. Från RGC-inspelningar med en 252-kanals förförstärkare och MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems), sorterades spikar med programvaran Spyking CIRCUS 0.549. RGC-svar analyserades med anpassade skript skrivna i MATLAB (MathWorks 2018b) för klassificering som PÅ, PÅ–AV eller AV, med svarsdominansindex50. Latenser beräknades som tiden mellan stimulansstart och maximum av derivatan av spike density function (SDF). Två klasser av USA-reagerande celler identifierades på basis av latens - SL och LL - genom att fastställa ett tröskelvärde lika med minimum för latensfördelningen av svaren från NT-celler på US (45 ms). Vi bestämde toppvärdet A i SDF för beräkning av svarslängd, vilket definierades som tidsintervallet mellan de två tidpunkter för vilka SDF var lika med A/e (var A är toppdepolarisering och e är Eulers nummer). Fano-faktorn, som kvantifierar variabiliteten av spikantal, beräknades som förhållandet mellan variansen av spikräkningen och medelvärdet. Det euklidiska avståndet mellan två aktiverade celler vägdes enligt den maximala avfyrningshastigheten för cellerna. Förhållandet mellan antalet aktiverade celler och storleken på det stimulerade området på MEA-chippet beräknades med hänsyn till storleken på den amerikanska brännpunkten för 2.25 och 15.00 MHz och storleken på MEA för 0.50 MHz, eftersom brännpunkten var större än MEA för denna frekvens. Centrum för svaret uppskattades genom att vikta den maximala avfyrningshastigheten för varje cell med dess avstånd från andra svarande celler, och förskjutningen av svaret beräknades som det euklidiska avståndet mellan två mittpunktspositioner.
Intrakraniella injektioner
AAV-suspensioner injicerades i den högra hemisfären på två olika ställen hos råttor (2.6 mm ML, 6.8 mm AP och 3.1 mm ML, 7.2 mm AP från bregma) eller på en plats i möss (2.5 mm ML, 3.5 mm AP från bregma)48. För råttinjektioner, suspensionen (200 nl innehållande 0.2–8.0 × 1015 viruspartiklar) injicerades på tre olika djup (1,100 1,350, 1,500 4 och 50 XNUMX µm från den kortikala ytan) med en mikrosprutpumpstyrenhet (MicroXNUMX, World Precision Instruments) som arbetar med en hastighet av XNUMX nl min.-1 och 10 ul Hamilton-spruta. Hos möss, AAV-suspensionen (1 µl innehållande 0.2–8.0 × 1015 viruspartiklar) injicerades vid 400 µm från den kortikala ytan med en hastighet av 100 nl min.-1.
Extracellulära inspelningar in vivo
En månad efter AAV-injektioner, en liten kraniotomi (5 × 5 mm2) utfördes ovanför V1 i höger hjärnhalva48. tdTomatfluorescensen kontrollerades med ett MICRON IV näthinneavbildningsmikroskop och Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories). En 32-ställen µEcog-elektroduppsättning (elektroddiameter, 30 µm; elektrodavstånd, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) placerades över det transfekterade området eller i en liknande zon för kontrollråttor. MEA-inspelningar utfördes med en kiselmikrosond med 16 ställen lutad i 45° mot hjärnans yta (elektroddiameter, 30 µm; avstånd, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) och MC_Rack v. 4.6.2. MEA fördes fram 1,100 4 µm in i cortex med en tre-axlig mikromanipulator (Sutter Instruments). US-transduktorer kopplades till hjärnan med en skräddarsydd kopplingskon fylld med avgasat vatten och US-gel på en motoriserad scen. Avståndet mellan cortex och givare var lika med givarens brännvidd. Visuella stimuli genererades av en vit-ljus-kollimerad lysdiod (MNWHL15, Thorlabs) placerad 4.5 cm från ögat (XNUMX mW cm)-2 vid hornhinnan). Inspelningar digitaliserades med 32-kanals och 16-kanals förstärkare (modell ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). µEcog-inspelningarna analyserades med specialutvecklade MATLAB-skript och MEA-inspelningarna analyserades med Spyking CIRCUS-programvara och specialutvecklade MATLAB-skript. Svarslängden beräknades som intervallet mellan de två tidpunkterna då den kortikalt framkallade potentialen var lika med A/e. Det aktiverade området definierades som området för pseudofärgaktiveringskartan över vilken toppdepolarisering översteg bakgrundsbrusnivån beräknad som 2 × sd av signalen. Svarscentrumet uppskattades genom att vikta toppdepolariseringen för varje elektrod med dess avstånd från de andra elektroderna. Dess relativa förskjutning när den amerikanska givaren flyttades beräknades som det euklidiska avståndet för de två positionerna. För intrakortikala inspelningar uppskattades celllatens som tiden mellan stimulansstart och maximum av derivatet av SDF.
Kirurgi för in vivo beteendetestning
C57BL6J möss injicerades subkutant med buprenorfin (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) och dexametason (0.7 mg kg-1) (Dexazon, Virbac). Djuren bedövades med isofluran (5 % induktion och 2 % underhåll, i en luft/syreblandning) och huvudet rakades och rengjordes med en antiseptisk lösning. Djur fixerades med huvudet på en stereotaktisk ram med ett isoflurantillförselsystem och ögonsalva, och en svart vävnad applicerades över ögonen. Kroppstemperaturen hölls vid 37°C. Efter en lokal injektion av lidokain (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), ett snitt gjordes på huden. Två skruvar fixerades i skallen, efter en liten kraniotomi (ungefär 5.0 × 5.0 mm2) utfördes ovanför V1 i höger halvklot (0.5 mm stålborr) och en cortexbuffert applicerades. Cortex täcktes med ett TPX-plastark (125 µm tjockt) och förseglades med dental akrylcement (Tetric Evoflow). För beteendeexperiment limmades sedan en metallisk huvudstång (PhenoSys) för huvudfixering på skallen på vänster hjärnhalva med dental cement (FujiCEM 2). Djuren placerades i en återvinningskammare med en subkutan injektion av fysiologiskt serum och salva på ögonen (Ophtalon, Centravet). Buprenorfin injicerades under övervakning efter operation.
Musbeteendetester
Möss placerades på ett vattenbegränsningsschema tills de nådde cirka 80–85 % av sin vikt. Efter tillvänjning vid testförhållandena36, möss tränades att svara på en LS genom att utföra en frivillig detekteringsuppgift: slicka en vattenpip (trubb 18 gauge nål, cirka 5 mm från munnen) som svar på vitt ljus helfältsstimulering (200 och 50 ms lång) av vänster öga (dilaterat med tropicamid, Mydriaticum Dispersa) över 35 försök per stimuleringstid och därför 70 försök per dag. Vatten (~4 μl) dispenserades automatiskt 500 ms efter att lampan tänds, genom ett kalibrerat vattensystem. Beteendeprotokollet och slickdetektering kontrollerades av ett skräddarsytt system36. De kommande fyra dagarna (två dagars uppehåll under helgen) gavs US-stimuleringar på V1 i 50 ms vid tre olika tryckvärden (0.2, 0.7 och 1.2 MPa). Dessa tryckvärden levererades i en annan ordning varje dag (35 försök vardera). Intervallerna varierade slumpmässigt och varierade mellan 10 och 30 sekunder. 15 MHz US-givaren kopplades till hjärnan med en skräddarsydd kopplingskon fylld med vatten och US-gel. Framgångsfrekvensen beräknades genom att räkna antalet försök där mössen utförde förväntansfulla slickningar (mellan stimulans debut och öppnandet av vattenventilen). Den förväntade slickhastigheten (fig. 6e) för sessionen beräknades genom subtraktion från den förväntade slickhastigheten i ett försök, den spontana slickhastigheten (beräknad på alla 1 s tidsfönster före varje individuell stimulansstart (Fig. 6a) för alla försök) och multiplicera med framgångsfrekvensen. Slicklatens beräknades genom att bestämma tiden till den första förutseende slickningen efter stimulansstart. Mössen som behölls för analys uppvisade en framgångsfrekvens överlägsen eller lika med 60 % den fjärde dagen efter LS. Sedan exkluderades lätta eller amerikanska sessioner som visade ett tvångsmässigt slickbeteende baserat på outlier-identifieringen som gjordes med ROUT-metoden (Q = 1 %) på sessionens spontana slickfrekvens med ett genomsnitt av mätningarna på alla försök under sessionen under 1 s tidsfönstret innan stimulansstarten av försöket.
Immunhistokemi och konfokal avbildning
Prover inkuberades över natten vid 4 °C med en monoklonal anti-RBPMS-antikropp (1:500, kanin; ABN1362, Merck Millipore) för näthinnan31, med en monoklonal anti-NeuN-antikropp (1:500, mus, klon A60; MAB377, Merck Millipore) för hjärnsektioner48. Sektionerna inkuberades sedan med sekundära antikroppar konjugerade med Alexa Fluor 488 (1:500, åsna anti-mus och åsna anti-kanin IgG 488, polyklonalt; A-21202 respektive A-21206, Invitrogen) och DAPI (1:1,000 9542) D1, Merck Millipore) i 1000 timme vid rumstemperatur. Ett Olympus FV20 konfokalmikroskop med ×20 objektiv (UPLSAPO 0.85XO med en numerisk bländare på 10) användes för att ta bilder av platta näthinnor och hjärnsektioner (FV4.2-ASW v. XNUMX programvara).
På de konfokala bilderna som bearbetades med Fiji (ImageJ v. 1.53q), räknades RBPMS- och NeuN-positiva celler automatiskt med insticksprogrammet "analysera partiklar". Cellerna räknades manuellt av två olika användare, med insticksprogrammet "cellräknare". Kvantifiering utfördes genom att förvärva konfokala stackar i minst fyra slumpmässigt valda transfekterade regioner på 0.4 mm2 (Utökad data Fig. 1). För V1-neuroner valdes den sagittala hjärnskivan med den största tdTomat-fluorescenszonen för varje djur. En region av intresse definierades manuellt i V1 och kvantifieringarna utfördes i minst sex slumpmässigt valda regioner på 0.4 mm2.
USA-inducerade simuleringar av vävnadsuppvärmning
En trefaldig process användes för uppskattning av termiska effekter: (1) simulering av de akustiska fälten som genereras av de tre omvandlarna, med realistiska akustiska parametrar; (2) verifiering av att icke-linjär akustik inte spelade en viktig roll vid värmeöverföring; och (3) realistiska simuleringar av värmeöverföring och temperaturhöjning inducerad i fokus av USA i en linjär regim för parametrarna som används i denna studie.
För icke-linjära simuleringar använde vi MATLABs k-Wave verktygslåda genom att definiera givarens geometri i tre dimensioner och använda följande parametrar för fortplantningsmediet (vatten): ljudhastighet, c = 1,500 XNUMX m s-1; volymetrisk massa, ρ = 1,000 XNUMX kg m-3; olinjäritetskoefficient, B/A = 5; dämpningskoefficient, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; frekvenseffektlag för dämpningskoefficienten, y = 2 (ref. 51). Vi simulerade kvasi-monokromatiska 3D-vågfält med långa skurar på 50 cykler; detta gav oss det maximala tryckfältet i tre dimensioner samt vågformen i fokus. Simuleringarna kalibrerades genom att justera ingångstrycket (excitering av den simulerade givaren) för att nå trycket vid fokus uppmätt i vattentanken med riktiga givare. Helbredden vid halva maximala (FWHM) brännpunktsdiametern i x-y planet var 4.360, 1.610 och 0.276 mm, och längden på huvudaxeln i x-z planet var 32.3, 20.6 och 3.75 mm för 0.50, 2.25 respektive 15.00 MHz-omvandlarna (fig. 1b–d). Icke-linjära effekter utvärderades genom att uppskatta det relativa övertonsinnehållet i vågformen vid fokus. I exemplet på 15 MHz fokusomvandlare i fig. 1djämfördes de experimentella och simulerade signalerna vid brännpunkten och visade sig vara mycket överensstämmande (Utökad data Fig. 4a). Dessutom är amplituden för den andra övertonen 19.8 dB under grundtonen (20.9 dB i det simulerade fallet), vilket betyder att om grundenergin är E, den andra övertonen har energi E/95 (Utökad data Fig. 4b). Därför kan vi rimligen försumma de icke-linjära effekterna i beräkningarna av de termiska effekterna, eftersom de står för ~1% av den inblandade energin. Samma slutsatser drogs vid 0.5 MHz och 15.0 MHz. Approximationer för linjär vågutbredning minskade avsevärt beräkningskostnaden för simuleringarna. Linjär utbredningssimuleringar genomfördes med Field II-verktygslådan i MATLAB52,53, i monokromatiskt läge, med samma mediumegenskaper som k-Wave (vatten), för att erhålla 3D-maxtryckfälten. Dessa maximala tryckfält användes för att bygga en term för värmekälla (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}})Där αnp är hjärnans absorptionskoefficient vid den avsedda frekvensen (59.04 Np m-1 vid 15 MHz, beräknat från αhjärna = 0.21 dB cm-1 MHz-y och y = 1.18), hjärnans volymetriska massa ρhjärna = 1,046 XNUMX kg m-3, hjärnans ljudhastighet chjärna = 154 s-1 och pmax är det maximala 3D-tryckfältet. Denna källterm användes sedan i upplösningen av en Pennes biovärmeekvation (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}vänster( {K_mathrm{t}timesnabla T} höger) – rho _{ mathrm{blod}}C_{mathrm{blod}}P_{mathrm{blod}}vänster( {T – T_mathrm{a}} höger) + Q) i k-Wave, där Chjärna är blodets specifika värmekapacitet (3,630 XNUMX J kg-1 ° C-1), Kt är hjärnans värmeledningsförmåga (0.51 W m-1 ° C-1), ρblod är bloddensiteten (1,050 XNUMX kg m-3), Cblod är blodets specifika värmekapacitet (3,617 XNUMX J kg-1 ° C-1), Pblod är blodperfusionskoefficienten (9.7 × 10-3 s-1), Ta är artärtemperaturen (37 °C), Q = QUS + ρhjärnaγhjärna och γhjärna är värmegenereringen av hjärnvävnaden (11.37 W kg-1) (ref. 54,55). Det initiala villkoret för hjärntemperatur var inställt på T0 = 37°C.
Denna simulering motsvarar det värsta scenariot för den givna temperaturhöjningen. (1) Den akustiska utbredningen simuleras endast i vatten (icke-reducerat värde), med en lägre dämpningskoefficient (2.2 × 10)-3 dB cm MHz-2.00) än hjärnan (0.59 dB cm MHz-1.27), även om en del av förökningen sker i hjärnan. De pmax kartor är därför överskattade. (2) Termisk absorption simuleras endast i hjärnvävnaden, med en högre absorptionskoefficient (0.21 dB cm MHz)-1.18) än vatten, även om en del av det maximala tryckfältet faktiskt är beläget i vattnet i den akustiska kopplingskonen. Därför, QUS är något överskattat. Vi kartlade temperaturen i tre rumsliga dimensioner och tid och letade efter punkten för maximal temperaturökning (Utökad data Fig. 4c–f).
Statistisk analys
Statistiska analyser utfördes med Prism programvara (Prism 9, GraphPad). Värden uttrycks och representeras som medelvärden ± standardfel för medelvärdet (sem) på figurer och i texten, om inte annat anges. Data analyserades i oparade Welchs t-test (två svansade) eller en oparad multipel t-testa med Sidak–Bonferroni-korrigering för flera jämförelser. Statistiska tester finns i figurförklaringarna.
Rapporteringsöversikt
Ytterligare information om forskningsdesign finns i Sammanfattning av naturportföljrapportering länkad till den här artikeln.
- SEO-drivet innehåll och PR-distribution. Bli förstärkt idag.
- Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. Kunskap förstärkt. Tillgång här.
- Källa: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :är
- ][s
- $UPP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- ovan
- akademiska
- Accessed
- Enligt
- Konto
- förvärva
- förvärvande
- aktivering
- aktivitet
- faktiskt
- avancerat
- Efter
- åldrades
- Avtal
- AL
- alexa
- Alla
- tillåter
- analys
- Ankare
- och
- djur
- djur
- antikroppar
- tillämpas
- godkänd
- cirka
- ÄR
- OMRÅDE
- array
- Artikeln
- AS
- bedömning
- At
- AUGUSTI
- automatiskt
- tillgänglig
- genomsnitt
- medelvärdes
- Axis
- Backbone
- baserat
- grund
- BE
- därför att
- innan
- nedan
- mellan
- Svart
- blod
- kropp
- Hjärna
- Ha sönder
- buffert
- SLUTRESULTAT
- by
- beräknat
- KAN
- Kapacitet
- vilken
- Vid
- Celler
- centrala
- centrum
- Klimatkammare
- Kanal
- egenskaper
- Charles
- chip
- valda
- klasser
- klassificering
- klick
- kommitté
- jämfört
- omfattande
- databehandling
- tillstånd
- genomfördes
- konduktivitet
- anslutna
- anses
- med tanke på
- innehåll
- kontroll
- kontrolleras
- styrenhet
- Motsvarande
- motsvarar
- Pris
- kopplad
- omfattas
- beställnings
- cykel
- cykler
- datum
- Databas
- dag
- Dagar
- definierade
- definierande
- levereras
- leverans
- densitet
- Djup
- Designa
- detekterad
- Detektering
- bestämd
- bestämmande
- Utveckling
- anordning
- DID
- olika
- digital
- digitaliseras
- dimensioner
- Upptäck
- Visa
- avstånd
- fördelning
- Dominans
- dras
- driv
- under
- e
- varje
- effekter
- energi
- Teknik
- förbättrad
- fel
- beräknad
- Eter (ETH)
- etik
- Giltigt körkort
- Europaparlamentet
- utvärderade
- Även
- exempel
- exciterade
- uteslutna
- erfarenhet
- export
- uttryckt
- ögat
- Ögon
- vänd
- fält
- Fält
- Fig.
- Figur
- siffror
- fyllda
- filtrera
- bränning
- Förnamn
- fixerad
- flyg
- Fokus
- fokuserade
- efter
- För
- formen
- hittade
- Fjärde
- RAM
- Frekvens
- från
- fungera
- funktionella
- grundläggande
- Vidare
- ge
- GE Healthcare
- genereras
- generering
- geometri
- ges
- Marken
- Grupp
- styra
- Hamilton
- huvud
- Hälsa
- hälso-och sjukvård
- högre
- höggradigt
- HTTPS
- humant
- i
- Identifiering
- identifierade
- IEEE
- bilder
- Imaging
- med Esport
- in
- inkuberades
- individuellt
- informationen
- inledande
- ingång
- instrument
- intresse
- involverade
- DESS
- Nyckel
- laboratorium
- större
- största
- Latens
- Lag
- skikt
- Legends
- Längd
- Nivå
- slick
- livet
- Life Sciences
- ljus
- linje
- LINK
- kopplade
- lokal
- lokalt
- belägen
- läge
- platser
- Lång
- såg
- gjord
- underhåll
- större
- manuellt
- karta
- kartor
- Massa
- Materialet
- maximal
- MEA
- betyder
- mätningar
- mekanisk
- Medium
- Merck
- metod
- möss
- mikron
- Mikroskop
- minsta
- blandning
- ML
- Mode
- modell
- MOL
- övervakning
- Månad
- månader
- mun
- rörliga
- MS
- multipel
- Mutation
- nationell
- National Institutes of Health
- Natur
- nät
- nätverk
- nervceller
- Nya
- Nästa
- antal
- mål
- få
- erhållna
- of
- olympus
- on
- ONE
- öppning
- drift
- beställa
- Övriga
- annat
- natten
- parametrar
- parlament
- del
- Godkänd
- Topp
- utför
- Phoenix
- fysisk
- bitar
- Plasma
- plast
- plato
- Platon Data Intelligence
- PlatonData
- Spela
- plugin
- Punkt
- poäng
- portfölj
- placerad
- positioner
- potentiell
- kraft
- Precision
- presenteras
- tryck
- tryck
- process
- producera
- producerad
- Program
- egenskaper
- protokoll
- protokoll
- förutsatt
- puls
- pump
- kanin
- insamlat
- RÅTTA
- Betygsätta
- ratio
- nå
- kommit fram till
- verklig
- realistisk
- återvinning
- reflekterad
- om
- regim
- region
- regioner
- Registrering
- ersättas
- Rapportering
- representerade
- forskning
- forskningslaboratorier
- Upplösning
- respektive
- Svara
- reagera
- respons
- REST
- återställande
- återställa
- begränsning
- resulterande
- Retina
- Rise
- Roll
- Rum
- rout
- s
- Samma
- scenario
- tidtabellen
- SCI
- Vetenskap
- VETENSKAPER
- skript
- Andra
- sekundär
- sektioner
- vald
- selektiv
- Känslighet
- sensor
- Sekvens
- Serum
- session
- sessioner
- in
- formad
- Sigma
- Signal
- signaler
- Kisel
- liknande
- simulering
- webbplats
- SEX
- Storlek
- Hud
- Skiva
- Small
- Mjukvara
- lösning
- ljud
- Källa
- rumsliga
- specifik
- specificerade
- fart
- spik
- spikar
- Spot
- Spridning
- Stacks
- Etapp
- standard
- statistisk
- stål
- stimulans
- Läsa på
- framgång
- överlägsen
- yta
- suspension
- suspensioner
- bytte
- system
- System
- tank
- Målet
- targeting
- uppgift
- Tekniken
- testa
- tester
- den där
- Smakämnen
- Området
- deras
- därför
- termisk
- Dessa
- thompson
- tusentals
- tre
- tredimensionella
- tröskelvärde
- Genom
- tid
- vävnader
- till
- Verktygslåda
- tränad
- överföring
- rättegång
- försök
- sanningen
- ultraljud
- us
- användning
- användare
- v1
- validerade
- värde
- Värden
- ventil
- VBA
- Verifiering
- verifierade
- syn
- lever
- volymetrisk
- W
- Vatten
- Våg
- helgen
- veckor
- vikt
- VÄL
- som
- vit
- fönster
- med
- inom
- världen
- skriven
- zephyrnet