živali
Poskusi so bili izvedeni v skladu z navodili Nacionalnega inštituta za zdravje za nego in uporabo laboratorijskih živali. Protokole je odobril lokalni odbor za etiko živali (odbor Charles Darwin št. 5, registrski št. 9529 in 26889) in izveden v skladu z Direktivo 2010/63/EU Evropskega parlamenta. Podganji samci Long-Evans, stari med 2 in 12 meseci, in mišji samci WT (C57BL/6J), stari 9 tednov, so bili pridobljeni iz Janvier Laboratories; P23H (linija 1) samci transgenih podgan (9–22 mesecev) so bili vzgojeni lokalno.
Kloniranje plazmidov in proizvodnja AAV
Plazmidi, ki vsebujejo E. coli mscL zaporedja v obliki WT in z mutacijo G22S so bili pridobljeni od Francesca Difata (Addgene plazmida #107454 in #107455)28. Za ciljanje na RGC, promotor SNCG31 je bil vstavljen v plazmid hrbtenice AAV, ki vsebuje mscL zaporedje, spojeno z genom tdTomato in izvoznim signalom Kir2.1 ER, da bi spodbudilo izražanje na plazemski membrani. Vektor AAV2.7m8 je bil uporabljen za porod v steklovini. Za ciljanje nevronov v kortikalnih plasteh V1 je bil promotor SNCG nadomeščen s promotorjem CamKII in izbran je bil vektor AAV9.7m8. Rekombinantne AAV so bile proizvedene s plazmidno kotransfekcijsko metodo, dobljeni lizati pa so bili prečiščeni s čiščenjem z jodiksanolom31.
ZDA spodbuda
Uporabljeni so bili trije fokusirani ultrazvočni pretvorniki z različnimi centralnimi frekvencami: 0.50 MHz (premer, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; goriščna razdalja, f = 1.25″ = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) in 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), kar ustreza številčnim odprtinam F/Ø = 1.25 in 2.00. Akustična polja, ki jih sevajo ti trije fokusirani pretvorniki, so predstavljena na sl. 1 (simulacije) in razširjeni podatki, sl. 3 (eksperimentalne meritve). TiePie Handyscope (HS5, TiePie Engineering) je bil uporabljen za izdelavo valovne oblike dražljaja, ki je bil nato prenesen skozi RF ojačevalnik moči 80 dB (VBA 230-80, Vectawave), povezan s pretvornikom. Izhodi tlaka pretvornika (tlak v fokusu, tridimenzionalni (3D) zemljevidi tlaka) so bili izmerjeni v rezervoarju za razplinjeno vodo s heterodinskim interferometrom Royer–Dieulesaint47. Dražljaji ZDA, uporabljeni za stimulacijo ex vivo in in vivo, so imeli naslednje značilnosti: frekvenca ponavljanja impulza 1 kHz s 50-odstotnim delovnim ciklom, trajanje sonikacije med 10 in 200 ms in interstimulusni interval med 0.01 in 2.00 s. Najvišji akustični tlaki so bili od 0.11 do 0.88 MPa, od 0.30 do 1.60 MPa in od 0.20 do 1.27 MPa za pretvornike 0.50, 2.25 in 15.00 MHz. Ustrezne ocenjene vrednosti povprečne intenzivnosti prostorskega najvišjega impulza (Isppa) so bile 0.39–25.14, 2.92–83.12 in 1.30–52.37 W cm-2.
Intravitrealna dostava genov in slikanje mrežnice
Podgane so bile anestezirane48 in suspenzijo AAV (2 µl), ki vsebuje med 8 in 14 × 1010 virusnih delcev, je bil vbrizgan v sredino steklovine. En mesec pozneje je bilo na vbrizganih očeh opravljeno fluorescenčno slikanje tdTomato z mikroskopom za slikanje mrežnice MICRON IV (Phoenix Research Laboratories) in Micron Discover v.2.2.
MEA posnetki
Kosi mrežnice so bili sploščeni na filtrirni membrani (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) in postavljeni na MEA (premer elektrode 30 µm; razmik 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems), prevlečen s poli-l-lizin (0.1%, Sigma), z RGC obrnjenimi proti elektrodam31. AMPA/kainat antagonist glutamatnega receptorja 6-ciano-7-nitrokinoksalin-2,3-dion (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), antagonist NMDA glutamatnega receptorja [3H]3-(2-karboksipiperazin-4-il) propil -1-fosfonska kislina (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) in selektivni agonist metabotropnega glutamatnega receptorja skupine III, l-(+)-2-amino-4-fosfonomasleno kislino (LAP4, 50 μM, Tocris Bioscience), smo nanesli v kopeli skozi perfuzijsko linijo. Svetlobni dražljaji so bili dostavljeni z digitalnim mikrozrcalnim zaslonom (Vialux; ločljivost, 1,024 × 768), povezanim z belim svetlobnim virom svetleče diode (MNWHL4, Thorlabs), osredotočenim na ravnino fotoreceptorja (obsevanje, 1 µW cm-2). US pretvorniki so bili povezani s po meri izdelanim spojnim stožcem, napolnjenim z razplinjeno vodo in nameščenim na motorizirano mizo (PT3/M-Z8, Thorlabs), nameščeno pravokotno nad mrežnico. Odbiti signal čipa MEA in mrežnice je bil zaznan z US key napravo (Lecoeur Electronique). Razdalja med mrežnico in pretvornikom je bila enaka goriščni razdalji pretvornika; to je bilo potrjeno s časom letenja odbitega signala. Iz posnetkov RGC z 252-kanalnim predojačevalnikom in MC_Rack v. 4.6.2 (večkanalni sistemi) so bili konici razvrščeni s programsko opremo Spyking CIRCUS 0.549. Odzivi RGC so bili analizirani s skripti po meri, napisanimi v MATLAB (MathWorks 2018b) za razvrstitev kot ON, ON–OFF ali OFF, z indeksom prevlade odziva50. Latence so bile izračunane kot čas med začetkom dražljaja in maksimumom derivata funkcije gostote konic (SDF). Dva razreda celic, ki se odzivajo na US, sta bila identificirana na podlagi zakasnitve - SL in LL - z določitvijo praga, ki je enak najmanjši porazdelitvi zakasnitve odzivov celic NT na US (45 ms). Določili smo končno vrednost A SDF za izračun trajanja odziva, ki je bil opredeljen kot časovni interval med dvema časovnima točkama, za kateri je bil SDF enak A/e (kje A je vrhunska depolarizacija in e je Eulerjevo število). Fano faktor, ki kvantificira variabilnost števila konic, je bil izračunan kot razmerje med varianco števila konic in povprečjem. Evklidska razdalja med dvema aktiviranima celicama je bila utežena glede na največjo hitrost proženja celic. Razmerje med številom aktiviranih celic in velikostjo stimulirane površine na čipu MEA je bilo izračunano ob upoštevanju velikosti žariščne točke US za 2.25 in 15.00 MHz ter velikosti MEA za 0.50 MHz, ker je bila žariščna točka večja kot MEA za to frekvenco. Središče odziva je bilo ocenjeno s tehtanjem največje hitrosti sprožitve vsake celice z njeno oddaljenostjo od drugih odzivnih celic, premik odziva pa je bil izračunan kot evklidska razdalja med dvema položajema središča odziva.
Intrakranialne injekcije
Suspenzije AAV so bile injicirane v desno hemisfero na dve različni lokaciji pri podganah (2.6 mm ML, 6.8 mm AP in 3.1 mm ML, 7.2 mm AP od bregme) ali na eno mesto pri miših (2.5 mm ML, 3.5 mm AP od bregma)48. Za injekcije podganam je suspenzija (200 nl, ki vsebuje 0.2–8.0 × 1015 virusni delci) smo vbrizgali na tri različne globine (1,100, 1,350 in 1,500 µm od kortikalne površine) s krmilnikom črpalke z mikrobrizgalko (Micro4, World Precision Instruments), ki deluje s hitrostjo 50 nl min-1 in 10 µl brizgo Hamilton. Pri miših je suspenzija AAV (1 µl, ki vsebuje 0.2–8.0 × 1015 virusnih delcev) je bil injiciran na 400 µm od kortikalne površine s hitrostjo 100 nl min-1.
Zunajcelični posnetki in vivo
En mesec po injekcijah AAV majhna kraniotomija (5 × 5 mm2) je bila izvedena nad V1 na desni polobli48. Fluorescenca tdTomato je bila preverjena z mikroskopom za slikanje mrežnice MICRON IV in Micron Discover v. 2.2 (Phoenix Research Laboratories). Niz elektrod µEcog z 32 mesti (premer elektrod, 30 µm; razmik med elektrodami, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) je bil nameščen nad transfektirano regijo ali v podobno cono za kontrolne podgane. Posnetki MEA so bili izvedeni s silikonsko mikrosondo na 16 mestih, nagnjeno pod kotom 45° glede na površino možganov (premer elektrode 30 µm; razmik 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) in MC_Rack v. 4.6.2. MEA je bil pomaknjen 1,100 µm v skorjo s triosnim mikromanipulatorjem (Sutter Instruments). UZ pretvorniki so bili povezani z možgani s po meri izdelanim spojnim stožcem, napolnjenim z razplinjeno vodo in UZ gelom na motoriziranem odru. Razdalja med skorjo in pretvornikom je bila enaka goriščni razdalji pretvornika. Vizualne dražljaje je ustvarila svetlobna dioda, ki oddaja belo svetlobo (MNWHL4, Thorlabs), nameščena 15 cm stran od očesa (4.5 mW cm-2 na roženici). Posnetke smo digitalizirali z 32-kanalnimi in 16-kanalnimi ojačevalniki (model ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). Posnetki µEcog so bili analizirani s po meri razvitimi skripti MATLAB, posnetki MEA pa so bili analizirani s programsko opremo Spyking CIRCUS in po meri razvitimi skripti MATLAB. Trajanje odziva je bilo izračunano kot interval med dvema časovnima točkama, pri katerih je bil kortikalno izzvani potencial enak A/e. Aktivirano območje je bilo definirano kot območje psevdobarvne aktivacijske karte, na kateri je vrh depolarizacije presegel raven hrupa v ozadju, izračunano kot 2 × sd signala. Odzivni center je bil ocenjen s ponderiranjem vrha depolarizacije vsake elektrode z njeno oddaljenostjo od drugih elektrod. Njegov relativni premik pri premikanju US pretvornika je bil izračunan kot evklidska razdalja obeh položajev. Za intrakortikalne posnetke je bila celična latenca ocenjena kot čas med začetkom dražljaja in maksimumom derivata SDF.
Kirurgija za vedenjsko testiranje in vivo
Miši C57BL6J smo subkutano injicirali buprenorfin (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) in deksametazon (0.7 mg kg-1) (Dexazone, Virbac). Živali smo anestezirali z izofluranom (5 % indukcija in 2 % vzdrževanje, v mešanici zrak/kisik) in glavo obrili ter očistili z antiseptično raztopino. Živali so bile glave pritrjene na stereotaktični okvir s sistemom za dovajanje izoflurana in mazilom za oči, čez oči pa je bil nanešen črni robček. Telesna temperatura je bila vzdrževana pri 37 °C. Po lokalnem injiciranju lidokaina (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), je bil narejen rez na koži. Po majhni kraniotomiji (približno 5.0 × 5.0 mm) sta bila v lobanjo pritrjena dva vijaka2) je bil izveden nad V1 v desni hemisferi (0.5 mm jekleni sveder) in uporabljen je bil korteksni pufer. Korteks je bil prekrit s plastično folijo TPX (debeline 125 µm) in zatesnjen z zobnim akrilnim cementom (Tetric Evoflow). Za vedenjske poskuse je bil nato na lobanjo na levi hemisferi z zobnim cementom (FujiCEM 2) prilepljen kovinski vzglavnik (PhenoSys) za pritrditev glave. Živali smo dali v zbiralno komoro, s subkutano injekcijo fiziološkega seruma in mazila v oči (Ophtalon, Centravet). Buprenorfin je bil injiciran med spremljanjem po operaciji.
Vedenjski testi miši
Miši so bile postavljene na urnik omejevanja vode, dokler niso dosegle približno 80–85 % svoje teže. Po navajanju na preskusne pogoje36, so miši izurili, da se odzovejo na LS tako, da so opravili nalogo prostovoljnega zaznavanja: lizanje vodne trombe (topa igla kalibra 18, približno 5 mm od ust) kot odgovor na stimulacijo polnega polja z belo svetlobo (dolgo 200 in 50 ms) levo oko (razširjeno s tropikamidom, Mydriaticum Dispersa) več kot 35 poskusov na trajanje stimulacije in torej 70 poskusov na dan. Voda (~4 μl) je bila samodejno razdeljena 500 ms po vklopu luči skozi kalibriran vodni sistem. Vedenjski protokol in zaznavanje lizanja sta bila nadzorovana s posebnim sistemom36. Naslednje štiri dni (dvodnevni premor med vikendom) so bile ultrazvočne stimulacije dostavljene na V1 za 50 ms pri treh različnih vrednostih tlaka (0.2, 0.7 in 1.2 MPa). Te vrednosti tlaka so bile vsak dan dostavljene v drugačnem vrstnem redu (po 35 poskusov). Medposkusni intervali so se naključno spreminjali in se gibali med 10 in 30 s. 15 MHz US pretvornik je bil povezan z možgani s po meri izdelanim spojnim stožcem, napolnjenim z vodo in US gelom. Stopnja uspešnosti je bila izračunana s štetjem števila poskusov, v katerih so miši izvedle predvideno lizanje (med začetkom dražljaja in odprtjem vodnega ventila). Predvidena stopnja lizanja (sl. 6e) za sejo je bila izračunana z odštevanjem od predvidene stopnje lizanja poskusa, spontane hitrosti lizanja (izračunane na vseh časovnih oknih 1 s pred vsakim posameznim nastopom dražljaja (sl. 6a) za vse poskuse) in množenje s stopnjo uspešnosti. Zakasnitev lizanja je bila izračunana z določitvijo časa do prvega predvidenega lizanja po začetku dražljaja. Miši, obdržane za analizo, so četrti dan po LS pokazale stopnjo uspešnosti večjo ali enako 60 %. Nato so bile lahke ali ultrazvočne seje, ki so pokazale kompulzivno lizanje, izključene na podlagi identifikacije izstopa z uporabo metode ROUT (Q = 1%) na stopnjo spontanega lizanja med sejo, povprečje meritev vseh poskusov seje v časovnem oknu 1 s pred začetkom dražljaja v poskusu.
Imunohistokemija in konfokalno slikanje
Vzorce smo čez noč inkubirali pri 4 °C z monoklonskim protitelesom proti RBPMS (1:500, zajec; ABN1362, Merck Millipore) za mrežnico31, z monoklonskim protitelesom proti NeuN (1:500, miš, klon A60; MAB377, Merck Millipore) za možganske dele48. Odseke smo nato inkubirali s sekundarnimi protitelesi, konjugiranimi z Alexa Fluor 488 (1:500, oslovski protimišji IgG 488 proti kuncem, poliklonski; A-21202 oziroma A-21206, Invitrogen) in DAPI (1:1,000). ; D9542, Merck Millipore) 1 uro pri sobni temperaturi. Konfokalni mikroskop Olympus FV1000 z objektivom ×20 (UPLSAPO 20XO z numerično aperturo 0.85) je bil uporabljen za pridobivanje slik ravno nameščenih mrežnic in možganskih odsekov (programska oprema FV10-ASW v. 4.2).
Na konfokalnih slikah, obdelanih s Fijijem (ImageJ v. 1.53q), so bile RBPMS- in NeuN-pozitivne celice samodejno preštete z vtičnikom 'analiziraj delce'. Celice sta ročno preštela dva različna uporabnika z vtičnikom 'cell counter'. Kvantifikacija je bila izvedena s pridobivanjem konfokalnih nizov v vsaj štirih naključno izbranih transfektiranih regijah velikosti 0.4 mm2 (Razširjeni podatki Sl. 1). Za nevrone V1 je bila za vsako žival izbrana sagitalna možganska rezina z največjo cono fluorescence tdTomato. Območje zanimanja je bilo ročno definirano v V1 in kvantifikacije so bile izvedene v vsaj šestih naključno izbranih regijah 0.4 mm2.
Simulacije segrevanja tkiva, ki jih povzročajo ZDA
Za oceno toplotnih učinkov je bil uporabljen tridelni postopek: (1) simulacija zvočnih polj, ki jih ustvarijo trije pretvorniki, z realističnimi akustičnimi parametri; (2) preverjanje, ali nelinearna akustika ni imela pomembne vloge pri prenosu toplote; in (3) realistične simulacije prenosa toplote in dviga temperature, ki ga v žarišču povzroča ultrazvok v linearnem režimu za parametre, uporabljene v tej študiji.
Za nelinearne simulacije smo uporabili orodje MATLAB k-Wave z definiranjem geometrije pretvornika v treh dimenzijah in uporabo naslednjih parametrov za medij širjenja (voda): hitrost zvoka, c = 1,500 m s-1; volumetrična masa, ρ = 1,000 kg m-3; koeficient nelinearnosti, B/A = 5; koeficient slabljenja, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; frekvenčni potenčni zakon koeficienta slabljenja, y = 2 (ref. 51). Simulirali smo kvazimonokromatska 3D valovna polja z uporabo dolgih izbruhov 50 ciklov; to nam je dalo največje tlačno polje v treh dimenzijah kot tudi valovno obliko v žarišču. Simulacije so bile kalibrirane s prilagajanjem vhodnega tlaka (vzbujanje simuliranega pretvornika), da se doseže tlak v žarišču, izmerjen v rezervoarju za vodo z resničnimi pretvorniki. Premer žariščne točke polne širine na pol največje (FWHM) v x-y ravnina je bila 4.360, 1.610 in 0.276 mm, dolžina velike osi v x-z ravnina je bila 32.3, 20.6 in 3.75 mm za pretvornike 0.50, 2.25 in 15.00 MHz (sl. 1b–d). Nelinearni učinki so bili ovrednoteni z oceno relativne harmonične vsebnosti valovne oblike v žarišču. V primeru pretvornika fokusa 15 MHz na sl. 1d, so eksperimentalne in simulirane signale na žarišču primerjali in ugotovili, da so zelo skladni (razširjeni podatki, sl. 4a). Poleg tega je amplituda drugega harmonika 19.8 dB pod osnovno (20.9 dB v simuliranem primeru), kar pomeni, da če je osnovna energija E, drugi harmonik ima energijo E/95 (razširjeni podatki sl. 4b). Zato lahko razumno zanemarimo nelinearne učinke pri izračunih toplotnih učinkov, saj predstavljajo ~1 % vključene energije. Enaki zaključki so bili narejeni pri 0.5 MHz in 15.0 MHz. Približki linearnega širjenja valov so znatno znižali računalniške stroške simulacij. Simulacije linearne propagacije so bile izvedene z orodjem Field II v MATLAB52,53, v monokromatskem načinu, z enakimi lastnostmi medija kot k-Wave (voda), da dobimo 3D maksimalna tlačna polja. Ta polja največjega tlaka so bila uporabljena za izgradnjo izraza vira ogrevanja (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Kjer αnp je absorpcijski koeficient možganov pri obravnavani frekvenci (59.04 Np m-1 pri 15 MHz, izračunano iz αmožganov = 0.21 dB cm-1 MHz-y in y = 1.18), volumetrična masa možganov ρmožganov = 1,046 kg m-3, hitrost zvoka možganov cmožganov = 154 s-1 in pmax je 3D polje največjega tlaka. Ta izvorni izraz je bil nato uporabljen pri razrešitvi Pennejeve enačbe biotoplote (rho _{mathrm{možgani}}C_{mathrm{možgani}}timesfrac{{delni T}}{{delni t}} = mathrm{div}levo( {K_mathrm{t}timesnabla T} desno) – rho _{ mathrm{kri}}C_{mathrm{kri}}P_{mathrm{kri}}levo( {T – T_mathrm{a}} desno) + Q) v k-Wave, kjer Cmožganov je specifična toplotna kapaciteta krvi (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt je toplotna prevodnost možganov (0.51 W m-1 ° C-1), ρkri je gostota krvi (1,050 kg m-3), Ckri je specifična toplotna kapaciteta krvi (3,617 J kg-1 ° C-1), Pkri je koeficient perfuzije krvi (9.7 × 10-3 s-1), Ta je arterijska temperatura (37 °C), Q = QUS + ρmožganovγmožganov in γmožganov je proizvodnja toplote možganskega tkiva (11.37 W kg-1) (ref. 54,55). Začetni pogoj za temperaturo možganov je bil nastavljen na T0 = 37 °C.
Ta simulacija ustreza najslabšemu možnemu scenariju glede danega dviga temperature. (1) Akustično širjenje je simulirano samo v vodi (nezmanjšana vrednost) z nižjim koeficientom dušenja (2.2 × 10-3 dB cm MHz-2.00) kot možgani (0.59 dB cm MHz-1.27), tudi če del širjenja poteka v možganih. The pmax zemljevidi so torej precenjeni. (2) Toplotna absorpcija je simulirana le v možganskem tkivu z višjim absorpcijskim koeficientom (0.21 dB cm MHz-1.18) kot voda, tudi če se del največjega tlačnega polja dejansko nahaja v vodi akustičnega spojnega stožca. zato QUS je nekoliko precenjen. Preslikali smo temperaturo v treh prostorskih dimenzijah in času ter poiskali točko največjega dviga temperature (razširjeni podatki, sl. 4c–f).
Statistična analiza
Statistične analize so bile izvedene s programsko opremo Prism (Prism 9, GraphPad). Vrednosti so izražene in predstavljene kot srednje vrednosti ± standardna napaka srednje vrednosti (sem) na slikah in v besedilu, razen če ni navedeno drugače. Podatki so bili analizirani v neparnih Welchovih t-testi (dvostranski) ali neparni večkratnik t-test s Sidak–Bonferronijevim popravkom za več primerjav. Statistični testi so navedeni v legendah slik.
Povzetek poročanja
Dodatne informacije o oblikovanju raziskav so na voljo v Povzetek poročanja o portfelju narave povezan s tem člankom.
- Distribucija vsebine in PR s pomočjo SEO. Okrepite se še danes.
- Platoblockchain. Web3 Metaverse Intelligence. Razširjeno znanje. Dostopite tukaj.
- vir: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- : je
- ][str
- $GOR
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- nad
- akademsko
- dostopna
- Po
- Račun
- pridobiti
- pridobitev
- Aktiviranje
- dejavnost
- dejansko
- napredno
- po
- stari
- Sporazum
- AL
- Alexa
- vsi
- omogoča
- Analiza
- Sidro
- in
- živali
- Živali
- Protitelesa
- uporabna
- odobren
- približno
- SE
- OBMOČJE
- Array
- članek
- AS
- ocenjevanje
- At
- Avgust
- samodejno
- Na voljo
- povprečno
- povprečenje
- Os
- Hrbtenica
- temeljijo
- Osnova
- BE
- ker
- pred
- spodaj
- med
- črna
- kri
- telo
- Brain
- Break
- varovalni
- izgradnjo
- by
- izračuna
- CAN
- kapaciteta
- ki
- primeru
- Celice
- Osrednji
- center
- komora
- Channel
- lastnosti
- Charles
- čip
- izbran
- razredi
- Razvrstitev
- klik
- Odbor
- v primerjavi z letom
- celovito
- računalništvo
- stanje
- poteka
- prevodnost
- povezane
- šteje
- upoštevamo
- vsebina
- nadzor
- nadzorom
- krmilnik
- Ustrezno
- ustreza
- strošek
- skupaj
- zajeti
- po meri
- cikel
- ciklov
- datum
- Baze podatkov
- dan
- Dnevi
- opredeljen
- definiranje
- dostavi
- dostava
- Gostota
- Globine
- Oblikovanje
- Zaznali
- Odkrivanje
- določi
- določanje
- Razvoj
- naprava
- DID
- drugačen
- digitalni
- digitalizirano
- dimenzije
- odkriti
- zaslon
- razdalja
- distribucija
- Prevlada
- sestavljene
- pogon
- med
- e
- vsak
- Učinki
- energija
- Inženiring
- okrepljeno
- Napaka
- ocenjeni
- Eter (ETH)
- etika
- Evropski
- Evropski parlament
- ocenili
- Tudi
- Primer
- razburjen
- izključena
- izkušnje
- izvoz
- izražena
- oči
- oči
- s katerimi se sooča
- Polje
- Področja
- Slika
- Slika
- Številke
- napolnjena
- filter
- streljanje
- prva
- Všita
- let
- Osredotočite
- osredotočena
- po
- za
- obrazec
- je pokazala,
- Četrti
- FRAME
- frekvenca
- iz
- funkcija
- funkcionalno
- temeljna
- Poleg tega
- ge
- GE Healthcare
- ustvarila
- generacija
- geometrija
- dana
- Igrišče
- skupina
- vodi
- Hamilton
- Glava
- Zdravje
- zdravstveno varstvo
- več
- zelo
- HTTPS
- človeškega
- i
- Identifikacija
- identificirati
- IEEE
- slike
- slikanje
- Pomembno
- in
- inkubirano
- individualna
- Podatki
- začetna
- vhod
- instrumenti
- obresti
- vključeni
- ITS
- Ključne
- Laboratorij
- večja
- Največji
- Latenca
- zakon
- plasti
- Legende
- dolžina
- Stopnja
- lizanje
- življenje
- Life Sciences
- light
- vrstica
- LINK
- povezane
- lokalna
- lokalno
- nahaja
- kraj aktivnosti
- Lokacije
- Long
- Pogledal
- je
- vzdrževanje
- velika
- ročno
- map
- Zemljevidi
- Masa
- Material
- največja
- MEA
- kar pomeni,
- meritve
- mehanska
- srednje
- Merck
- Metoda
- miši
- Mikron
- Mikroskop
- minimalna
- mešanico
- ML
- način
- Model
- MOL
- spremljanje
- mesec
- mesecev
- usta
- premikanje
- MS
- več
- Mutacija
- nacionalni
- National Institutes of Health
- Narava
- mreža
- omrežij
- Neuroni
- Novo
- Naslednja
- Številka
- Cilj
- pridobi
- pridobljeni
- of
- olympus
- on
- ONE
- o odprtju
- deluje
- Da
- Ostalo
- drugače
- čez noč
- parametri
- parlament
- del
- opravil
- Peak
- izvajati
- phoenix
- fizično
- kosov
- Plazma
- plastike
- platon
- Platonova podatkovna inteligenca
- PlatoData
- Predvajaj
- vključiti
- Točka
- točke
- Portfelj
- pozicioniran
- pozicije
- potencial
- moč
- Precision
- predstavljeni
- pritisnite
- tlak
- Postopek
- proizvodnjo
- Proizvedeno
- Program
- Lastnosti
- protokol
- protokoli
- če
- impulz
- Črpalka
- Zajec
- postavljeno
- PODGANA
- Oceniti
- razmerje
- dosežejo
- dosegel
- pravo
- realistična
- okrevanje
- odsevalo
- o
- Režim
- okolica
- regije
- registracija
- nadomesti
- Poročanje
- zastopan
- Raziskave
- raziskovalni laboratoriji
- Resolucija
- oziroma
- Odzove
- odziva
- Odgovor
- REST
- Obnova
- obnavljanje
- omejitev
- rezultat
- Mrežnica
- Rise
- vloga
- soba
- Rout
- s
- Enako
- Scenarij
- urnik
- SCI
- Znanost
- ZNANOSTI
- skripte
- drugi
- sekundarno
- oddelki
- izbran
- selektivno
- občutljivost
- senzorji
- Zaporedje
- Serum
- Zasedanje
- sej
- nastavite
- shaped
- Sigma
- Signal
- signali
- Silicij
- Podoben
- Simulacija
- spletna stran
- SIX
- Velikosti
- Skin
- Slice
- majhna
- Software
- Rešitev
- zvok
- vir
- prostorsko
- specifična
- določeno
- hitrost
- spike
- konice
- Komercialni
- širjenje
- Skladovnice
- Stage
- standardna
- Statistično
- jeklo
- dražljaj
- študija
- uspeh
- superior
- Površina
- vzmetenje
- Opustitve
- preklopi
- sistem
- sistemi
- tank
- ciljna
- ciljanje
- Naloga
- Tehnologije
- Test
- testi
- da
- O
- Območje
- njihove
- zato
- toplotna
- te
- Thompson
- tisoče
- 3
- Tridimenzionalni
- Prag
- skozi
- čas
- tkiva
- do
- Toolbox
- usposobljeni
- prenos
- sojenje
- poskusi
- Resnica
- ultrazvok
- us
- uporaba
- Uporabniki
- v1
- potrjeno
- vrednost
- Vrednote
- ventil
- VBA
- Preverjanje
- preverjeno
- Vizija
- vivo
- volumetrična
- W
- Voda
- Wave
- vikend
- Weeks
- teža
- Dobro
- ki
- bele
- okna
- z
- v
- svet
- pisni
- zefirnet