Введение
Бактерии не устраивают званые обеды и не рассказывают анекдоты, но они по-своему социальны. Когда наличие пищи дает им возможность расти, размножаться и развиваться, они быстро и даже охотно образуют сообщества. Подобно портовому городу, возникающему вдоль водного пути, разнообразное сообщество бактерий и других микробов распознает благоприятную ситуацию для роста и развития.
У каждого бактериального города есть история происхождения. Чан с вином, бродившим в течение нескольких месяцев, биопленка в легких пациента с муковисцидозом и богатый серой горячий источник – все началось с набора клеток-основателей, которые начали формировать надежную сеть взаимодействующих видов. Эти сообщества могут выполнять биохимические функции, которые ни один вид не может выполнять самостоятельно. Требуется кворум Лактококк и Стрептококк штаммы работают вместе, чтобы дать сыр чеддар его текстура и запах. Различные комбинации кишечной микробиоты могут усилить или притупить эффективность таблетки.
Однако не существует очевидных правил, объясняющих, как собирается бактериальное сообщество или почему процветают определенные виды. Большинство биологов, столкнувшись с описанием сообщества организмов, каталогизируют список существующих видов. Но число видов бактерий настолько велико, продолжительность их жизни настолько коротка, а различия между любыми двумя видами настолько малы, что названия видов не обязательно несут полезную информацию.
Вот почему группа физиков, ставших микробиологами, пытается использовать методы секвенирования генома в огромных масштабах, чтобы выявить какие-либо универсальные правила, которые могли бы управлять бактериальными сообществами — подход к микробам, основанный на больших данных. Вместо того, чтобы называть виды по именам, они сосредотачиваются на том, что делают организмы, с целью понять, какие роли играют важную роль в данном сообществе.
«Существует избыточность — например, два вида могут выполнять одну и ту же функцию — и один и тот же вид может выполнять разные функции в зависимости от того, измените ли вы окружающую среду», — сказал он. Отто Кордеро, микробиолог Массачусетского технологического института. «Таксономия не так информативна, как функция».
В прошлом году в лаборатории Кордеро исследования под руководством микробиолога Матти Гралка идентифицировали набор микробных функций, которые можно было предсказать без информации о видах. Охарактеризовав метаболизм 186 различных штаммов бактерий, собранных в Атлантическом океане, он обнаружил, что может предсказать основные пищевые предпочтения конкретного микроба, основываясь только на его геноме.
Введение
Эта закономерность позволяет исследователям обходить последовательности генов, участвующие в расщеплении того или иного источника пищи. Команда Гралки обнаружила, что они могут предсказать предпочтительную пищу, просто измеряя молекулярный состав генома. Результаты были опубликованы в Природа Микробиология.
Пока эта область находится в зачаточном состоянии, микробные экологи ищут способы быстрой оценки и описания естественных микробных сообществ, будь то в дикой природе или в больнице. Разработав теорию микробной сборки, они надеются, что смогут научиться видеть практически невидимую и быстро меняющуюся микроскопическую экологию, разворачивающуюся вокруг нас.
Поле без теории
На протяжении веков микробиология была ограничена способностью ученых видеть то, что находится перед ними. Даже в начале 2000-х годов, если микробиолог высыпал бактериальное сообщество на чашку Петри, идентифицировать разнообразные виды, подвиды и штаммы внутри него было колоссальной задачей. Было слишком много организмов, смешавшихся вместе, которые со временем прибывали и отливали, поскольку доступные источники пищи менялись, а виды жили и умирали. Ученые могли сделать немного больше, чем идентифицировать отдельные колонии по форме, цвету, морфологии и потребностям в питательных веществах.
До недавних лет в этой области оставалось мало определяющей теории, объясняющей, как собираются микробиомы, и не было четких аксиом для интерпретации экспериментальных результатов. В 2007 году группа микробиологов написала в Природа Обзоры Микробиология что это отсутствие теории вызвано как недостатком данных, так и неспособностью применить экологическую теорию к микроскопическому миру. Без теории научная область не имеет структуры, формы и предсказательной силы, утверждали они. Эколог-микробиолог мог бы сделать любое наблюдение о сообществе; без теории, объясняющей ее важность, все может быть правдой.
«Иногда мы жалуемся, что в микробной экологии нет ничего удивительного», — сказал Изображение местозаполнителя для Alvaro Sanchez, микробный эколог из Института функциональной биологии и геномики, совместного института Национального исследовательского совета Испании и Университета Саламанки. «У нас нет сильных приоритетов. У нас нет предсказательной теории, поэтому нет ничего удивительного».
Однако новые генетические инструменты привели к новым способам описания микробных сообществ. Секвенирование по Сэнгеру, которое на протяжении десятилетий было самым быстрым методом секвенирования генов, позволяло идентифицировать микробы только один за другим. Затем, в середине 2000-х годов, стала доступна технология высокопроизводительного секвенирования, а в 2010-х годах она стала достаточно доступной. Микробиологи могли идентифицировать виды по любой ДНК, имевшейся в образце.
Микробные экологи пришли в восторг от этого. «Люди чертовски упорядочивали все подряд», — сказал Глен Д'Суза, микробный эколог из Швейцарского федерального технологического института в Цюрихе. «В поле доминировало описание того, кто там был — эта ошибка была в этой среде; эта ошибка была в этой среде».
Введение
Внезапно огромное количество данных выявило ранее неизвестное микробное разнообразие. В 2009 году было полностью секвенировано менее 1,000 бактериальных геномов. К 2014 году было больше, чем 30,000. С тех пор эта цифра значительно выросла: в конце 2023 года насчитывалось 567,228 XNUMX полных бактериальных геномов. легко просматриваемый и доступны для перекрестных ссылок. Сегодня на бактерии приходится почти 80% всех доступных геномных данных.
«Люди просто понятия не имели, сколько видов будет», — сказал Гралка, который сейчас руководит собственной лабораторией в Университете VU в Амстердаме. «Под микроскопом их не очень хорошо различишь».
Однако идентификация отдельных видов бактерий в сообществе может сказать ученым лишь очень многое. Их имена не обязательно много говорят о том, какой вклад вносит каждая ошибка или как сообщество объединяется.
«Эти сообщества многомерны», — сказал Якопо Грилли, микробный эколог-теоретик и бывший физик Международного центра теоретической физики Абдуса Салама в Триесте, Италия. «Если мы попытаемся понять [их], нам придется иметь дело с тем фактом, что в этих сообществах существует много-много популяций, много разных видов — что бы ни означало слово «виды». У всех этих видов есть свои особенности, и каким-то образом они сосуществуют».
В 2018, A Наука бумаги Санчес и его команда дали микробиологам разрешение упростить свое мышление. Их революционное исследование показало, что если вы сделаете шаг назад и позволите столь специфическим деталям, как точные названия видов, растаять, вы сможете лучше понять логику бактериального сообщества, как если бы вы рассматривали абстрактную картину на расстоянии.
Как и Грилли, Санчес был физиком, прежде чем заняться микробной экологией. «Я решил начать работать над экологией и микробными сообществами, потому что заметил, что на количественном уровне эта область не так хорошо изучена, как эволюция», — сказал Санчес.
Для исследования его лаборатория вырастила дикие бактерии, выращенные из мертвых листьев и почвы в окрестностях Нью-Хейвена, штат Коннектикут. Они обнаружили, что при одинаковых условиях окружающей среды — одних и тех же источниках углерода, температуре, кислотности и т. д. — любое микробное сообщество придет примерно к одному и тому же функциональному составу, независимо от того, как оно возникло. В его экспериментах в каждой популяции появлялись одни и те же ниши, которые заполнялись снова и снова, хотя и не обязательно одними и теми же видами бактерий.
Исследование изменило взгляд микробиологов на сообщество. По словам Д'Сузы, когда Санчес сравнивал сообщества, отобранные из одной и той же среды, названия бактерий всегда были разными. «Но если вы посмотрите на функциональное содержание генов, например, кто что делает? Это удивительно похоже», — сказал он. «Так что не имеет значения, кто вы; то, что ты делаешь, имеет значение».
Предсказательная сила генома
В 2018 году Гралка только что приехал в Бостон, чтобы работать постдоком в лаборатории Кордеро в Массачусетском технологическом институте. Он начинал как биофизик, изучая физические свойства клеток по отдельности и в совокупности. Он решил присоединиться к исследовательской программе Кордеро, потому что у двух исследователей были схожие взгляды: разработать количественное, общее понимание микробных сообществ.
У Кордеро была морозильная камера, заполненная микробами из Атлантического океана, которые его лаборатория использовала, чтобы сделать интересное открытие о том, как микробные сообщества формируются вокруг источников пищи, опубликованное в журнале Current Biology в 2019 году. Они бросили шарики хитина — полимера повторяющихся молекул сахара, из которого состоят панцири насекомых — в культуры бактерий, выращенные из морских образцов. Когда ученые выловили шары обратно, они посмотрели, какие сообщества сформировались. Микробы, поедающие хитин, как и ожидалось, цеплялись за хитин, но были и бактерии, которые не питались хитином. Эти бактерии, казалось, поедали побочные продукты, выделяемые пожирателями хитина. Пожиратели хитина и пожиратели побочных продуктов образовали сообщество.
Введение
Это заинтриговало Гральку. Казалось возможным, что тип сообщества можно предсказать только по его источникам питания: по первоначальному источнику пищи, а затем по новым источникам, созданным в результате его расщепления первичными бактериями. Он задавался вопросом, сможет ли он предсказать направление изменений микробного сообщества, если будет контролировать его начальные условия.
Затем, как раз в тот момент, когда он присоединился к лаборатории Кордеро, «из лаборатории Альваро [Санчеса] вышла статья, которая произвела довольно большой фурор», — сказал Гралька — работа 2018 года, показывающая, что появляются предсказуемые микробные ниши, которые могут быть заполнены множеством различных видов. . Идея о том, что функция важнее вида, имела для него смысл. «В почве иногда можно обнаружить тысячи различных бактерий. Тогда это очень быстро открывает вопросы», — сказал он. «Как существуют тысячи видов? Конечно, не существует тысяч различных ниш».
Объединив эти два открытия Кордеро и Санчеса, Гралка задался вопросом, сможет ли он не только предсказать микробное сообщество по его исходному источнику пищи, но и сделать вывод о нишах на основе геномов бактерий.
Гралка попробовала морозильник Кордеро. Во-первых, ему нужно было охарактеризовать бактерии на основе того, какую пищу они предпочитают. Используя высокопроизводительные инструменты, он вырастил 186 различных видов бактерий в культурах, дополненных 135 различными источниками пищи. В общей сложности Гралка измерила скорость роста более чем 25,000 XNUMX образцов бактерий.
В 186 видах бактерий столько же разнообразия, сколько и в 186 различных людях, и, как и люди, каждая бактерия имеет свои собственные модели поведения и привычки. Некоторые бактерии Гралки быстро росли на сахаре, а другие быстро росли на кислотах, включая органические кислоты, такие как лимонная кислота, а также аминокислоты, строительные блоки белков. Используя эти данные, Гралка поместил виды на то, что он назвал осью сахар-кислота, исходя из их предпочтений.
Затем он секвенировал ДНК всех 186 видов, чтобы увидеть, как они были связаны эволюционно. Гралка был удивлен, увидев, что близкородственные виды внутри одних и тех же филогенетических семейств часто имеют разные метаболические предпочтения. Например, отряд палочковидных бактерий Alteromonadales содержал внутри себя кислотоедов. Колвеллия, сахароеды Парагляциекола и менее придирчивый Псевдоальтеромонас, который съел обоих. Это поддержало более широкую идею о том, что названия видов не передают много информации о функциях бактерий в данном микробном сообществе.
Затем анализ Гралки углубился в ДНК жуков. Чтобы связать геном с метаболической функцией, он нашел гены, которые, как известно, участвуют в переваривании и метаболизме сахаров, и сделал то же самое с кислотами. Он обнаружил, что количество генов, поедающих сахар или кислоту, предсказывает, где каждый микроб окажется в сахарно-кислотном спектре: чем больше генов у вида было для того или иного процесса, тем больше вероятность того, что он приземлится на этом конце оси. . Результаты показали, что микробиологи могут примерно установить метаболизм сообщества, ища последовательности определенных генов.
Введение
Затем он обнаружил нечто более удивительное. Игнорируя реальные последовательности генов, он смотрел непосредственно на молекулярный распад ДНК штамма. В двойной спирали ДНК четыре типа оснований в противоположных цепях спарены: гуанин (G) связан с цитозином (C), а тимин (T) связан с аденином (A). Неожиданно оказалось, что в геномах кислотоедов содержание GC в среднем составляло 55%, тогда как содержание GC в геномах сахароедов составляло в среднем около 40%. Чтобы подтвердить, что эта корреляция не является причудой его конкретного микробного сообщества, Гралка проанализировал больший набор данных, состоящий из тысяч эталонных геномов со всего бактериального древа жизни. Закономерность сохранилась: специалисты по кислоте обычно имели более высокое содержание GC, чем специалисты по сахару.
Это правило казалось невообразимо простым. Химия ДНК бактерии предсказала ее нишу в обществе. Гралка могла определить, питается ли вид в первую очередь сахаром или кислотой, основываясь только на содержании его генома, вообще не исследуя его гены. Статистика и геномика обнаружили простой порядок там, где таксономия его не видела.
Предсказание микробного будущего
Эта работа закладывает основу для новой науки о практических предсказаниях микробных сообществ. Скажем, в лесу протекает трубопровод и разливается сырая нефть; микробиолог или ученый-эколог может захотеть узнать, какие бактерии появятся, чтобы съесть это масло. Врач может захотеть узнать, как микробиом кишечника пациента может меняться в ходе болезни, и потенциально использовать этот прогноз для назначения конкретных антибиотиков или других лекарств.
На многие вопросы можно будет ответить, а проблемы решить, если исследователи смогут быстро оценить функции микробного сообщества. «В моей лаборатории мы называем это дилеммой тренера», — сказал Санчес. «У вас есть группа игроков, и вы хотите выяснить, кого вам следует вывести на площадку, если вы хотите максимизировать свой результат. У меня есть список из 100 штаммов; Я хочу поместить их в биореактор и произвести как можно больше этанола. Так какие штаммы мне следует поставить?»
Законы, которые открывают микробные экологи, пока не могут ответить на этот вопрос. Однако быстрая оценка микробного метаболизма — или рабочая теория бактериальных сообществ и их генов — когда-нибудь может быть использована для изучения и управления миром экологических процессов, говорит Гралка.
Микробные сообщества являются ключевыми игроками в каждом экологическом цикле на Земле. Когда дерево падает в лесу, множество грибов и бактерий собираются, чтобы съесть и разложить его, возвращая компоненты дерева в глобальный круговорот питательных веществ. Благодаря концепциям, представленным Гралкой, Санчесом, Кордеро и другими микробными экологами, ниши этого нового сообщества предсказуемы. Древесина в основном состоит из целлюлозы и гемицеллюлозы, которые являются полимерами глюкозы; следовательно, функционирующее сообщество, созревшее для участия в разложении лесных массивов, будет содержать сахароядные бактерии, будет богато генами, переваривающими сахар, и будет иметь геномы, состоящие из меньшей доли молекул GC. Внезапный и загадочный всплеск числа любителей кислоты может быть признаком чего-то неладного, предположила Гралка.
Ось сахар-кислота — это лишь одна из ниш сообщества, которую микробные экологи хотят определить. Кордеро предложил лесную экосистему в качестве примера своей конечной цели. Экологи определили множество общих черт и функций, которые являются общими для лесов и различаются между ними, что позволяет сравнивать и прогнозировать.
«Сколько биомассы находится на листьях и на стволе? [Оказывается] что растения с огромными листьями больше дышат в тропических условиях», — сказал Кордеро. «Насколько глубоки корни? Это говорит о том, сколько питательных веществ они могут получить из окружающей среды. Как быстро они будут расти? Насколько они высоки? Насколько хорошо они конкурируют за свет?» Знание даже некоторых из этих переменных может многое рассказать нам о динамике леса.
Кордеро не знает, какими могут быть аналогичные черты у микроорганизмов и их сообществ. Многие бактериальные ниши, несомненно, связаны с их метаболизмом и побочными продуктами, но есть и другие аспекты, которые следует учитывать. «Если бы у нас были способы узнать, что представляют собой эти переменные… и способы их систематической идентификации, это было бы потрясающе», — сказал он.
В каком-то смысле эти ученые впервые составляют экологическую карту микробных сообществ. Их работа предлагает новый взгляд на то, что на самом деле представляет собой микробное сообщество, показывая, что микробы лучше всего определять по тому, что они делают.
Примечание редактора: Кордеро возглавляет «Сотрудничество Саймонса по принципам микробных экосистем», исследовательскую программу, поддерживаемую Фондом Саймонса, который также финансирует это исследование. Редакционно независимый журнал. Решения Фонда Саймонса о финансировании не влияют на наше покрытие.
- SEO-контент и PR-распределение. Получите усиление сегодня.
- PlatoData.Network Вертикальный генеративный ИИ. Расширьте возможности себя. Доступ здесь.
- ПлатонАйСтрим. Интеллект Web3. Расширение знаний. Доступ здесь.
- ПлатонЭСГ. Углерод, чистые технологии, Энергия, Окружающая среда, Солнечная, Управление отходами. Доступ здесь.
- ПлатонЗдоровье. Биотехнологии и клинические исследования. Доступ здесь.
- Источник: https://www.quantamagazine.org/the-quest-for-simple-rules-to-build-a-microbial-community-20240117/
- :имеет
- :является
- :нет
- :куда
- ][п
- $UP
- 000
- 08
- 1
- 100
- 2014
- 2016
- 2018
- 2019
- 2023
- 25
- 30
- a
- способность
- в состоянии
- О нас
- АБСТРАКТ НАЯ
- обильный
- Учетная запись
- через
- фактического соединения
- на самом деле
- доступной
- После
- сводные показатели
- цель
- Все
- позволяет
- в одиночестве
- вдоль
- причислены
- всегда
- удивительный
- среди
- Амстердам
- an
- анализ
- проанализированы
- и
- Другой
- ответ
- Антибиотики
- любой
- все
- кроме
- появиться
- появившийся
- Применить
- подхода
- Arc
- МЫ
- ПЛОЩАДЬ
- продемонстрировав тем самым
- около
- прибывший
- AS
- сборка
- оценить
- оценки;
- At
- доступен
- в среднем
- прочь
- Ось
- назад
- Бактерии
- основанный
- основной
- BE
- стали
- , так как:
- было
- до
- ЛУЧШЕЕ
- Лучшая
- между
- большой
- биология
- биомасса
- Блоки
- Бостон
- изоферменты печени
- связанный
- Breakdown
- Разрыв
- прорыв
- шире
- Сломался
- Ошибка
- строить
- Строительство
- Группа
- но
- by
- байпас
- призывают
- под названием
- вызова
- пришел
- CAN
- углерод
- каталог
- Клетки
- Центр
- века
- определенный
- изменение
- менялась
- изменения
- охарактеризовать
- химия
- Город
- тесно
- сотрудничество
- цвет
- комбинации
- Сообщества
- сообщество
- сравненный
- сравнение
- конкурирующий
- полный
- полностью
- компоненты
- состоящие
- композиция
- понятия
- Условия
- подтвердить
- Коннектикут
- Рассматривать
- содержащегося
- содержание
- содействие
- контроль
- Корреляция
- может
- Совет
- курс
- корт
- охват
- создали
- сырой
- Сырая нефть
- цикл
- циклы
- данным
- набор данных
- мертвый
- сделка
- десятилетия
- решенный
- решения
- глубоко
- более глубокий
- определенный
- определяющий
- в зависимости
- описывать
- описывающих
- подробнее
- развивать
- развивающийся
- DID
- умер
- отличаться
- Различия
- различный
- Ужин
- непосредственно
- открытый
- открытие
- Болезнь
- блюдо
- расстояние
- Разное
- Разнообразие
- Г-жа
- do
- врач
- приносит
- не
- доминируют
- Dont
- двойной
- вниз
- упал
- динамика
- каждый
- с нетерпением
- Рано
- земля
- есть
- Экологический
- экосистема
- Экосистемы
- эффективность
- позволяет
- конец
- Окружающая среда
- окружающий
- средах
- существенный
- установить
- оценка
- Даже
- Каждая
- многое
- эволюция
- развивается
- Изучение
- пример
- экспериментальный
- Эксперименты
- Объяснять
- степень
- сталкиваются
- факт
- Водопад
- семей
- БЫСТРО
- быстрый
- Федеральный
- несколько
- меньше
- поле
- фигура
- заполненный
- Найдите
- результаты
- Во-первых,
- Впервые
- текущий
- фокусировка
- питание
- продукты
- Что касается
- лес
- форма
- сформированный
- найденный
- Год основания
- основатель
- 4
- от
- передний
- функция
- функциональная
- функционирование
- Функции
- финансирование
- средства
- дал
- Общие
- в общем
- генетический
- геном
- геномика
- GitHub
- Дайте
- данный
- дает
- Глобальный
- цель
- хорошо
- регламентировать
- выросли
- группы
- Расти
- взрослый
- Рост
- было
- Есть
- убежище
- he
- Герой
- высший
- очень
- его
- его
- надежды
- Больница
- кашель
- ГОРЯЧИЙ
- Как
- Однако
- HTTPS
- огромный
- Людей
- i
- идея
- идентифицированный
- определения
- идентифицирующий
- if
- значение
- in
- неспособность
- В том числе
- независимые
- individual
- в отдельности
- повлиять
- информация
- информативный
- начальный
- размышления
- вместо
- Институт
- взаимодействующий
- интересный
- Мультиязычность
- в
- выпустили
- невидимый
- вовлеченный
- IT
- Италии
- ЕГО
- саму трезвость
- присоединиться
- присоединился
- совместная
- всего
- Основные
- Вид
- Знать
- знание
- известный
- лаборатория
- Отсутствие
- Земля
- в значительной степени
- больше
- Lays
- Лиды
- Утечки
- УЧИТЬСЯ
- привело
- оставил
- Меньше
- позволять
- уровень
- ЖИЗНЬЮ
- легкий
- такое как
- Вероятно
- Ограниченный
- Список
- мало
- логика
- посмотреть
- смотрел
- искать
- серия
- ниже
- Легкие
- сделанный
- журнал
- сделать
- ДЕЛАЕТ
- Создание
- управлять
- многих
- отображение
- морской
- Массачусетс
- Массачусетский Технологический Институт
- массивный
- Вопрос
- Вопросы
- Максимизировать
- означает
- измеренный
- измерение
- просто
- метаболический
- метод
- микробиомом
- Микроскоп
- может быть
- минут
- MIT
- смешанный
- молекулярный
- месяцев
- монументальный
- БОЛЕЕ
- самых
- в основном
- много
- my
- таинственный
- имя
- имена
- национальный
- почти
- обязательно
- необходимый
- сеть
- Новые
- ниша
- NIH
- нет
- в своих размышлениях
- ничего
- сейчас
- номер
- наблюдение
- Очевидный
- происходящий
- океан
- of
- от
- предложенный
- .
- Масло
- on
- ONE
- только
- Откроется
- Возможность
- противоположные
- or
- заказ
- органический
- Origin
- оригинал
- Другое
- Другое
- наши
- внешний
- за
- собственный
- Картина
- в паре
- бумага & картон
- участвующий
- особый
- Стороны
- пациент
- шаблон
- паттеранами
- выполнять
- разрешение
- Петри
- физический
- Физика
- трубопровод
- размещенный
- растений
- Платон
- Платон Интеллектуальные данные
- ПлатонДанные
- игроки
- полимер
- Полимеры
- поп
- население
- популяции
- возможное
- потенциально
- мощностью
- практическое
- предсказывать
- предсказуемый
- предсказанный
- прогноз
- Predictions
- интеллектуального
- предпочтения
- привилегированный
- предписывать
- присутствие
- представить
- довольно
- в первую очередь
- Принципы
- проблемам
- процесс
- Процессы
- FitPartner™
- свойства
- доля
- предлагает
- Белки
- обеспечивать
- опубликованный
- положил
- Квантовый журнал
- количественный
- поиск
- вопрос
- Вопросы
- САЙТ
- быстро
- быстро
- Стоимость
- последний
- признавать
- признавая
- ссылка
- Связанный
- Требования
- исследованиям
- исследователи
- Итоги
- возвращение
- Показали
- Отзывы
- правую
- надежный
- роли
- корнеплоды
- список
- грубо
- Правило
- условиями,
- работает
- Сказал
- то же
- сообщили
- Шкала
- Наука
- научный
- Ученый
- Ученые
- Гол
- поиск
- посмотреть
- казалось
- смысл
- последовательность действий
- набор
- Форма
- общие
- сдвинутых
- СДВИГАЯ
- Короткое
- должен
- показал
- показ
- подпись
- аналогичный
- просто
- упростить
- с
- одинарной
- ситуация
- So
- Соцсети
- почва
- решить
- некоторые
- когда-нибудь
- как-то
- удалось
- иногда
- искать
- Источник
- Источники
- Испанский
- пролеты
- специалисты
- конкретный
- Спектр
- шип
- весна
- Начало
- и политические лидеры
- Начало
- статистика
- стебли
- Шаг
- История
- деформации
- Пряди
- сильный
- Структура
- учился
- Кабинет
- изучение
- крепкий
- внезапный
- сахар
- Поддержанный
- безусловно,
- удивлен
- удивительный
- швейцарский
- T
- взять
- принимает
- морские водоросли
- Сложность задачи
- систематики
- команда
- снижения вреда
- Технологии
- сказать
- говорит
- чем
- который
- Ассоциация
- их
- Их
- тогда
- теоретический
- теория
- Там.
- следовательно
- Эти
- они
- вещи
- мышление
- этой
- те
- хоть?
- тысячи
- Thrive
- время
- в
- сегодня
- вместе
- заявил
- слишком
- приняли
- инструменты
- дерево
- правда
- стараться
- пытается
- Оказалось
- Поворот
- Получается
- два
- напишите
- Типы
- окончательный
- открывай
- под
- понимать
- понимание
- разворачивание
- Universal
- Университет
- неизвестный
- us
- использование
- используемый
- Полезная информация
- через
- разнообразие
- Огромная
- НДС
- Против
- очень
- Вид
- просмотр
- видения
- хотеть
- законопроект
- Путь..
- способы
- we
- WebP
- ЧТО Ж
- пошел
- были
- Что
- любой
- когда
- будь то
- который
- в то время как
- КТО
- зачем
- Дикий
- будете
- ВИНО
- в
- без
- дерево
- Работа
- работает
- Мир
- бы
- писал
- год
- лет
- еще
- являетесь
- ВАШЕ
- зефирнет
- Цюрих