Loomad
Katsed viidi läbi kooskõlas riiklike terviseinstituutide juhendiga laboriloomade hooldamiseks ja kasutamiseks. Protokollid kiitis heaks kohalik loomaeetika komitee (Charles Darwini komitee nr 5, registreerimisnumbrid 9529 ja 26889) ning need viidi läbi kooskõlas Euroopa Parlamendi direktiiviga 2010/63/EL. Long-Evansi isasrotid vanuses 2 kuni 12 kuud ja WT isased hiired (C57BL/6J) vanuses 9 nädalat saadi firmast Janvier Laboratories; P23H (rida 1) isaseid transgeenseid rotte (9–22 kuud) kasvatati lokaalselt.
Plasmiidi kloonimine ja AAV tootmine
Plasmiidid, mis sisaldavad E. coli mscL järjestus WT vormis ja G22S mutatsiooniga saadi Francesco Difatolt (Addgene plasmiidid #107454 ja #107455)28. RGC-de sihtimiseks on SNCG promootor31 sisestati AAV karkassi plasmiidi, mis sisaldas mscL järjestus, mis on liidetud tdTomato geeni ja Kir2.1 ER ekspordisignaaliga, et juhtida ekspressiooni plasmamembraanil. Klaaskehasiseseks manustamiseks kasutati AAV2.7m8 vektorit. Neuronite sihtimiseks V1 kortikaalsetes kihtides asendati SNCG promootor CamKII promootoriga ja valiti AAV9.7m8 vektor. Rekombinantsed AAV-d valmistati plasmiidi kaastransfektsiooni meetodil ja saadud lüsaadid puhastati jodiksanooliga.31.
USA stiimul
Kasutati kolme erineva kesksagedusega fokuseeritud USA andurit: 0.50 MHz (läbimõõt, Ø = 1.00″ = 25.4 mm; fookuskaugus, f = 1.25 tolli = 31.7 mm) (V301-SU, Olympus), 2.25 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V306-SU, Olympus) ja 15.00 MHz (Ø = 0.50″ = 12.7 mm, f = 1.00″ = 25.4 mm) (V319-SU, Olympus), mis vastab numbrilistele avadele F/Ø = 1.25 ja 2.00. Nende kolme fokuseeritud muunduri poolt kiiratavad akustilised väljad on esitatud joonisel fig. 1 (simulatsioonid) ja laiendatud andmed Joon. 3 (eksperimentaalsed mõõtmised). Stiimuli lainekuju tekitamiseks kasutati TiePie Handyscope'i (HS5, TiePie Engineering), mis seejärel juhiti läbi muunduriga ühendatud 80 dB RF võimsusvõimendi (VBA 230-80, Vectawave). Anduri rõhuväljundid (rõhk fookuses, kolmemõõtmelised (3D) rõhukaardid) mõõdeti degaseeritud veepaagis Royer-Dieulesaint heterodüüninterferomeetriga.47. Ex vivo ja in vivo stimuleerimiseks kasutatud USA stiimulitel olid järgmised omadused: 1 kHz impulsi kordussagedus 50% töötsükliga, ultrahelitöötluse kestus vahemikus 10 kuni 200 ms ja stiimulitevaheline intervall 0.01 kuni 2.00 s. Maksimaalne akustiline rõhk jäi 0.11, 0.88 ja 0.30 MHz muundurite puhul vahemikku 1.60–0.20 MPa, 1.27–0.50 MPa ja 2.25–15.00 MPa. Vastavad hinnangulised ruumilise tippimpulsi keskmise intensiivsuse (Isppa) väärtused olid 0.39–25.14, 2.92–83.12 ja 1.30–52.37 W cm-2.
Intraklaaskeha geenide kohaletoimetamine ja võrkkesta pildistamine
Rotid anesteseeriti48 ja AAV suspensioon (2 µl), mis sisaldab 8 kuni 14 × 1010 viiruseosakesed, süstiti klaaskeha õõnsuse keskossa. Kuu aega hiljem tehti süstitud silmadele tdTomato fluorestsentskujutis MICRON IV võrkkesta kujutise mikroskoobi (Phoenix Research Laboratories) ja Micron Discover v.2.2 abil.
MEA salvestused
Võrkkesta tükid lamestati filtermembraanile (Whatman, GE Healthcare Life Sciences) ja asetati polü-kanaliga kaetud MEA-le (elektroodi läbimõõt, 30 µm; vahekaugus 200 µm; MEA256 200/30 iR-ITO, MultiChannel Systems).l-lüsiin (0.1%, Sigma), RGC-d on suunatud elektroodide poole31. AMPA/kainaatglutamaadi retseptori antagonist 6-tsüano-7-nitrokinoksaliin-2,3-dioon (CNQX, 25 μM, Sigma-Aldrich), NMDA glutamaadi retseptori antagonist [3H]3-(2-karboksüpiperasiin-4-üül)propüül -1-fosfoonhape (CPP, 10 μM, Sigma-Aldrich) ja selektiivne III rühma metabotroopse glutamaadi retseptori agonist, l-(+)-2-amino-4-fosfonovõihape (LAP4, 50 µM, Tocris Bioscience) viidi läbi perfusiooniliini vanni. Valgusstiimulid edastati digitaalse mikropeegelkuvariga (Vialux; eraldusvõime, 1,024 × 768), mis oli ühendatud valge valgusdioodiga valgusallikaga (MNWHL4, Thorlabs), mis keskendus fotoretseptori tasapinnale (kiirgustihedus, 1 µW cm-2). USA andurid ühendati spetsiaalselt valmistatud ühenduskoonusega, mis oli täidetud degaseeritud veega ja paigaldati motoriseeritud lavale (PT3 / M-Z8, Thorlabs), mis oli asetatud võrkkesta kohale ortogonaalselt. MEA kiibi ja võrkkesta peegeldunud signaal tuvastati USA võtmeseadmega (Lecoeur Electronique). Võrkkesta ja anduri vaheline kaugus oli võrdne anduri fookuskaugusega; seda kontrolliti peegeldunud signaali lennuajaga. 252-kanalilise eelvõimendi ja MC_Rack v. 4.6.2 (MultiChannel Systems) RGC salvestustest sorteeriti naelu Spyking CIRCUS 0.5 tarkvaraga49. RGC vastuseid analüüsiti kohandatud skriptidega, mis olid kirjutatud MATLABis (MathWorks 2018b), et klassifitseerida ON, ON-OFF või OFF, vastuse domineerimise indeksiga50. Latentsused arvutati ajana stiimuli alguse ja naelutiheduse funktsiooni (SDF) tuletise maksimumi vahel. Latentsuse põhjal tuvastati kaks USA-le reageerivate rakkude klassi – SL ja LL –, määrates läve, mis on võrdne NT-rakkude US-le reageerimise latentsusaja jaotuse miinimumiga (45 ms). Määrasime tippväärtuse A SDF-ist vastuse kestuse arvutamiseks, mis määratleti kui ajavahemik kahe ajapunkti vahel, mille puhul SDF oli võrdne A/e (kus A on depolarisatsiooni tipp ja e on Euleri number). Fano tegur, mis kvantifitseerib piikide arvu varieeruvust, arvutati piikide arvu dispersiooni ja keskmise suhtena. Eukleidiline kaugus kahe aktiveeritud raku vahel kaaluti vastavalt rakkude maksimaalsele tulistamiskiirusele. Aktiveeritud rakkude arvu ja MEA kiibil stimuleeritud ala suuruse suhe arvutati, võttes arvesse USA fookuspunkti suurust sagedustel 2.25 ja 15.00 MHz ning MEA suurust 0.50 MHz puhul, kuna fookuspunkt oli suurem. kui selle sageduse MEA. Vastuse keskpunkti hinnati iga raku maksimaalse tulistamiskiiruse kaalumisel selle kaugusega teistest reageerivatest rakkudest ja vastuse nihkumine arvutati eukleidilise kaugusena kahe reaktsioonikeskme positsiooni vahel.
Intrakraniaalsed süstid
AAV suspensioonid süstiti rottidel paremasse ajupoolkera kahte erinevasse kohta (2.6 mm ML, 6.8 mm AP ja 3.1 mm ML, 7.2 mm AP bregmast) või ühte kohta hiirtele (2.5 mm ML, 3.5 mm AP). bregma)48. Rottide süstimiseks suspensioon (200 nl, mis sisaldab 0.2–8.0 × 1015 viiruseosakesed) süstiti kolmele erinevale sügavusele (1,100, 1,350 ja 1,500 µm kortikaalsest pinnast) mikrosüstlapumba kontrolleriga (Micro4, World Precision Instruments), mis töötas kiirusega 50 nl min.-1 ja 10 µl Hamiltoni süstalt. Hiirtel AAV suspensioon (1 µl, mis sisaldab 0.2–8.0 × 1015 viiruseosakesed) süstiti kortikaalsest pinnast 400 µm kaugusel kiirusega 100 nl min.-1.
In vivo rakuvälised salvestused
Üks kuu pärast AAV süstimist tehakse väike kraniotoomia (5 × 5 mm2) viidi läbi paremas poolkeras V1 kohal48. TdTomato fluorestsentsi kontrolliti võrkkesta kujutise mikroskoobiga MICRON IV ja Micron Discover v. 2.2-ga (Phoenix Research Laboratories). 32-kohaline µEcog elektroodi massiiv (elektroodide läbimõõt, 30 µm; elektroodide vahekaugus, 300 µm; FlexMEA36, MultiChannel Systems) paigutati transfekteeritud piirkonna kohale või kontrollrottide jaoks sarnasesse tsooni. MEA salvestused viidi läbi 16-kohalise räni mikrosondiga, mis oli kallutatud 45° ajupinna suhtes (elektroodi läbimõõt, 30 µm; vahekaugus, 50 µm; A1x16-5mm-50-703, NeuroNexus Technologies) ja MC_Rack v. 4.6.2. MEA viidi kolmeteljelise mikromanipulaatoriga (Sutter Instruments) edasi 1,100 µm ajukooresse. USA andurid ühendati ajuga spetsiaalselt valmistatud ühenduskoonusega, mis oli täidetud degaseeritud vee ja USA geeliga mootoriga staadiumis. Ajukoore ja anduri vaheline kaugus oli võrdne anduri fookuskaugusega. Visuaalsed stiimulid genereeriti valge valgusega kollimeeritud valgusdioodiga (MNWHL4, Thorlabs), mis asetati silmast 15 cm kaugusele (4.5 mW cm-2 sarvkesta juures). Salvestised digiteeriti 32-kanalilise ja 16-kanalilise võimendiga (mudel ME32/16-FAI-μPA, MultiChannel Systems). µEcog salvestusi analüüsiti spetsiaalselt välja töötatud MATLAB skriptidega ja MEA salvestusi analüüsiti tarkvaraga Spyking CIRCUS ja kohandatud väljatöötatud MATLAB skriptidega. Reaktsiooni kestus arvutati intervallina kahe ajapunkti vahel, mil kortikaalse esilekutsutud potentsiaal oli võrdne A/e. Aktiveeritud ala määratleti kui pseudovärvi aktiveerimiskaardi ala, mille depolarisatsiooni tippväärtus ületas taustamüra taseme, mis arvutati signaali 2 × sd. Reaktsioonikeskust hinnati iga elektroodi maksimaalse depolarisatsiooni kaalumisel selle kaugusega teistest elektroodidest. Selle suhteline nihe USA anduri liigutamisel arvutati kahe positsiooni eukleidilise kaugusena. Kortikaalsete salvestuste puhul hinnati raku latentsust kui aega stiimuli alguse ja SDF-i derivaadi maksimumi vahel.
In vivo käitumistestide operatsioon
C57BL6J hiirtele süstiti subkutaanselt buprenorfiini (0.05 mg kg-1) (Buprécare, Axience) ja deksametasooni (0.7 mg kg-1) (Deksasoon, Virbac). Loomad anesteseeriti isofluraaniga (5% induktsioon ja 2% hooldus, õhu/hapniku segus) ning pea raseeriti ja puhastati antiseptilise lahusega. Loomade pea kinnitati stereotaktilisele raamile isofluraani manustamissüsteemi ja silmasalviga ning silmadele kanti must kude. Kehatemperatuuri hoiti 37 °C juures. Pärast lidokaiini lokaalset süstimist (4 mg kg-1) (Laocaïne, Centravet), tehti nahale sisselõige. Pärast väikest kraniotoomiat (umbes 5.0 × 5.0 mm) kinnitati koljusse kaks kruvi2) viidi läbi V1 kohal paremas poolkeras (0.5, 125 mm teraspuur) ja rakendati ajukoore puhvrit. Ajukoor kaeti TPX plastlehega (paksus 2 µm) ja suleti hambaakrüültsemendiga (Tetric Evoflow). Käitumiskatsete jaoks liimiti seejärel hambatsemendiga (FujiCEM XNUMX) vasaku poolkera kolju külge pea fikseerimiseks mõeldud metallist pearaud (PhenoSys). Loomad paigutati taastumiskambrisse, süstides naha alla füsioloogilise seerumi ja salvi silmadesse (Ophtalon, Centravet). Buprenorfiini süstiti operatsioonijärgse jälgimise ajal.
Hiire käitumistestid
Hiired pandi veepiirangu ajakavale, kuni nad saavutasid ligikaudu 80–85% oma kaalust. Pärast katsetingimustega harjumist36, õpetati hiiri reageerima LS-ile, täites vabatahtliku tuvastamisülesande: lakkudes vesitila (nüri 18 G nõel, umbes 5 mm kaugusel suust) vastuseks valge valgusega täisvälja stimulatsioonile (pikkusega 200 ja 50 ms). vasak silm (laiendatud tropikamiidiga, Mydriaticum Dispersa) üle 35 katse stimulatsiooni kestuse kohta ja seega 70 katset päevas. Vett (~ 4 μl) väljastati automaatselt 500 ms pärast valguse sisselülitamist kalibreeritud veesüsteemi kaudu. Käitumisprotokolli ja lakkumise tuvastamist kontrollis kohandatud süsteem36. Järgmisel neljal päeval (kahepäevane paus nädalavahetusel) edastati USA stimulatsioonid V1-le 50 ms kolme erineva rõhu väärtusega (0.2, 0.7 ja 1.2 MPa). Need rõhu väärtused esitati iga päev erinevas järjekorras (igaüks 35 katset). Katsetevahelised intervallid varieerusid juhuslikult ja jäid vahemikku 10 kuni 30 sekundit. 15 MHz USA andur ühendati ajuga spetsiaalselt valmistatud ühenduskoonusega, mis oli täidetud vee ja US geeliga. Edukuse määr arvutati, loendades katsete arvu, milles hiired tegid ennetavaid lakkumisi (stiimuli alguse ja veeklapi avamise vahel). Eeldatav lakkumise määr (joonis fig. 6e) seansi jaoks arvutati katse eeldatavast lakkumissagedusest lahutamise teel spontaanse lakkumise sagedus (arvutatud kõigi 1-sekundiliste ajaakende kohta enne iga üksiku stiimuli algust (joonis XNUMX). 6a) kõigi katsete puhul) ja korrutamine edukuse määraga. Lakkumise latentsus arvutati, määrates aja esimese ennetava lakkumiseni pärast stimulatsiooni algust. Analüüsiks jäetud hiirte edukuse määr oli neljandal päeval pärast LS-i parem või võrdne 60%. Seejärel välistati kerged või USA seansid, mis näitasid kompulsiivset lakkumiskäitumist, tuginedes ROUT-meetodil tehtud kõrvalekallete tuvastamisele (Q = 1%) seansi spontaanse lakkumissageduse kohta, keskmistades kõigi seansi katsete mõõtmiste tulemused 1-sekundilises ajaaknas enne katse stimuleerimise algust.
Immunohistokeemia ja konfokaalne pildistamine
Proove inkubeeriti üleöö 4 °C juures võrkkesta jaoks monoklonaalse RBPMS-vastase antikehaga (1:500, küülik; ABN1362, Merck Millipore).31, monoklonaalse NeuN-vastase antikehaga (1:500, hiir, kloon A60; MAB377, Merck Millipore) ajulõikude jaoks48. Seejärel inkubeeriti sektsioone sekundaarsete antikehadega, mis olid konjugeeritud Alexa Fluor 488-ga (1:500, eesli anti-hiire ja eesli küülikuvastane IgG 488, polüklonaalne; vastavalt A-21202 ja A-21206, Invitrogen) ja DAPI-ga (1:1,000). D9542, Merck Millipore) 1 tund toatemperatuuril. Tasapinnaliselt kinnitatud võrkkesta ja ajuosade kujutiste saamiseks kasutati Olympus FV1000 konfokaalset mikroskoopi × 20 objektiiviga (UPLSAPO 20XO numbrilise avaga 0.85) (tarkvara FV10-ASW v. 4.2).
Fidžiga töödeldud konfokaalsetel piltidel (ImageJ v. 1.53q) loendati RBPMS- ja NeuN-positiivsed rakud automaatselt pistikprogrammiga 'analyse particles'. Rakke loendasid käsitsi kaks erinevat kasutajat, kasutades pistikprogrammi "rakkude loendur". Kvantifitseerimine viidi läbi konfokaalsete virnade hankimisega vähemalt neljas juhuslikult valitud 0.4, XNUMX mm transfekteeritud piirkonnas2 (Laiendatud andmed joon. 1). V1 neuronite jaoks valiti iga looma jaoks suurima tdTomato fluorestsentsi tsooniga sagitaalne ajulõik. Huvipakkuv piirkond määrati V1-s käsitsi ja kvantifitseerimine viidi läbi vähemalt kuues juhuslikult valitud 0.4, XNUMX mm piirkonnas2.
USA indutseeritud kudede kuumutamise simulatsioonid
Soojusmõjude hindamiseks kasutati kolmekordset protsessi: (1) kolme muunduri tekitatud akustiliste väljade simuleerimine realistlike akustiliste parameetritega; (2) kontrollimine, et mittelineaarne akustika ei mänginud soojusülekandes olulist rolli; ja (3) realistlikud simulatsioonid soojusülekande ja temperatuuri tõusu kohta, mille USA fookuses indutseerib lineaarses režiimis selles uuringus kasutatud parameetrite jaoks.
Mittelineaarsete simulatsioonide jaoks kasutasime MATLABi k-Wave tööriistakasti, määrates anduri geomeetria kolmes mõõtmes ja kasutades levikeskkonna (vee) jaoks järgmisi parameetreid: helikiirus, c = 1,500 m s-1; mahuline mass, ρ = 1,000 kg m-3; mittelineaarsuse koefitsient, B/A = 5; sumbumise koefitsient, α = 2.2 × 10-3 dB cm-1 MHz-y; sumbumisteguri sagedusvõimsuse seadus, y = 2 (viide 51). Simuleerisime kvaasi-monokromaatilisi 3D-lainevälju, kasutades pikki 50-tsüklilisi purse; see andis meile maksimaalse rõhuvälja kolmes mõõtmes ja lainekuju fookuses. Simulatsioonid kalibreeriti sisendrõhu reguleerimisega (simuleeritud muunduri ergastus), et jõuda reaalsete anduritega veepaagis mõõdetud rõhuni. Fookuspunkti täislaius poole maksimaalse (FWHM) läbimõõduga x-y tasapind oli 4.360, 1.610 ja 0.276 mm ning peatelje pikkus x-z Tasapind oli 32.3, 20.6 ja 3.75 MHz muundurite puhul vastavalt 0.50, 2.25 ja 15.00 mm (joonis fig. 1b–d). Mittelineaarseid efekte hinnati fookuses oleva lainekuju suhtelise harmoonilise sisalduse hindamisega. 15 MHz fookusanduri näites joonisel fig. 1d, võrreldi eksperimentaalseid ja simuleeritud signaale fookuspunktis ja leiti, et need on väga kooskõlas (laiendatud andmed, joonis XNUMX). 4a). Lisaks on teise harmoonilise amplituud 19.8 dB põhiväärtusest madalam (simuleeritud juhul 20.9 dB), mis tähendab, et kui põhienergia on E, teisel harmoonilisel on energiat E/95 (laiendatud andmed joon. 4b). Seetõttu võime termiliste mõjude arvutamisel mittelineaarsed mõjud mõistlikult tähelepanuta jätta, kuna need moodustavad ~ 1% kaasatud energiast. Samad järeldused tehti ka sagedustel 0.5 MHz ja 15.0 MHz. Lineaarse laine levimise lähendused vähendasid märkimisväärselt simulatsioonide arvutuskulusid. Lineaarse levimise simulatsioonid viidi läbi MATLABi Field II tööriistakastiga52,53, monokromaatilises režiimis samade keskmiste omadustega nagu k-Wave (vesi), et saada 3D maksimaalsed rõhuväljad. Neid maksimaalseid rõhuvälju kasutati kütteallika termini koostamiseks (Q_{mathrm{US}} = frac{{alpha _{mathrm{np}}p_{mathrm{max}}^2}}{{rho _mathrm{b}c_mathrm{b}}}), Kus αnp on aju neeldumistegur vaadeldaval sagedusel (59.04 Np m-1 sagedusel 15 MHz, arvutatuna alates αaju = 0.21 dB cm-1 MHz-y ja y = 1.18), aju mahuline mass ρaju = 1,046 kg m-3, aju heli kiirus caju = 154 s-1 ja pmax on 3D maksimaalne rõhuväli. Seda lähteterminit kasutati seejärel Penne'i biosoojusvõrrandi lahendamisel (rho _{mathrm{brain}}C_{mathrm{brain}}timesfrac{{partial T}}{{partial t}} = mathrm{div}left( {K_mathrm{t}timesnabla T} right) – rho _{ mathrm{blood}}C_{mathrm{blood}}P_{mathrm{blood}}vasak( {T – T_mathrm{a}} paremal) + Q) k-Wave'is, kus Caju on vere erisoojusmaht (3,630 J kg-1 ° C-1), Kt on aju soojusjuhtivus (0.51 W m-1 ° C-1), ρveri on vere tihedus (1,050 kg m-3), Cveri on vere erisoojusmaht (3,617 J kg-1 ° C-1), Pveri on vere perfusioonikoefitsient (9.7 × 10-3 s-1), Ta on arteriaalne temperatuur (37 °C), Q = QUS + ρajuγaju ja γaju on ajukoe soojuse teke (11.37 W kg-1) (viited. 54,55). Aju temperatuuri algtingimus määrati T0 = 37 °C.
See simulatsioon vastab antud temperatuuritõusu halvimale stsenaariumile. (1) Akustilist levikut simuleeritakse ainult vees (vähendatud väärtus) madalama sumbumisteguriga (2.2 × 10).-3 dB cm MHz-2.00) kui aju (0.59 dB cm MHz-1.27), isegi kui osa levimisest toimub ajus. The pmax kaardid on seetõttu ülehinnatud. (2) Soojusneeldumist simuleeritakse ainult ajukoes kõrgema neeldumisteguriga (0.21 dB cm MHz-1.18) kui vesi, isegi kui osa maksimaalsest rõhuväljast asub tegelikult akustilise ühenduskoonuse vees. Seetõttu QUS on veidi ülehinnatud. Kaardistasime temperatuuri kolmes ruumilises mõõtmes ja ajas ning otsisime temperatuuri maksimaalse tõusu punkti (laiendatud andmete joonis XNUMX). 4c–f).
Statistiline analüüs
Statistilised analüüsid viidi läbi Prism tarkvaraga (Prism 9, GraphPad). Väärtused on väljendatud ja esitatud keskmiste väärtustena ± keskmise (sem) standardviga joonistel ja tekstis, kui ei ole märgitud teisiti. Andmeid analüüsiti paarita Welchis t-testid (kahe sabaga) või paarita mitu t-test Sidak-Bonferroni korrektsiooniga mitme võrdluse jaoks. Statistilised testid on toodud jooniste legendides.
Aruande kokkuvõte
Lisateave uurimistöö kavandamise kohta on kättesaadav Loodusportfelli aruandluse kokkuvõte lingitud selle artikliga.
- SEO-põhise sisu ja PR-levi. Võimenduge juba täna.
- Platoblockchain. Web3 metaversiooni intelligentsus. Täiustatud teadmised. Juurdepääs siia.
- Allikas: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01359-6
- :on
- ][lk
- $ UP
- 000
- 1
- 10
- 100
- 11
- 1996
- 2%
- 2017
- 2018
- 2020
- 2021
- 28
- 39
- 3d
- 7
- 70
- 8
- 9
- a
- üle
- akadeemiline
- pääses
- Vastavalt
- konto
- omandama
- omandamine
- Aktiveerimine
- tegevus
- tegelikult
- edasijõudnud
- pärast
- vananenud
- Kokkulepe
- AL
- Alexa
- Materjal: BPA ja flataatide vaba plastik
- võimaldab
- analüüs
- Ankur
- ja
- loom
- loomad
- Antikehad
- rakendatud
- heaks
- umbes
- OLEME
- PIIRKOND
- Array
- artikkel
- AS
- hindamine
- At
- AUGUST
- automaatselt
- saadaval
- keskmine
- keskmiselt
- Telg
- Selgroog
- põhineb
- alus
- BE
- sest
- enne
- alla
- vahel
- Must
- veri
- keha
- Aju
- Murdma
- puhver
- ehitama
- by
- arvutatud
- CAN
- Võimsus
- mis
- juhul
- Rakke
- kesk-
- keskus
- kamber
- Kanal
- omadused
- Charles
- kiip
- valitud
- klassid
- klassifikatsioon
- klõps
- komitee
- võrreldes
- terviklik
- arvutustehnika
- seisund
- läbi
- juhtivus
- seotud
- kaaluda
- arvestades
- sisu
- kontrollida
- kontrollitud
- kontroller
- Vastav
- vastab
- Maksma
- seotud
- kaetud
- tava
- tsükkel
- tsüklit
- andmed
- andmebaas
- päev
- Päeva
- määratletud
- määratlemisel
- esitatud
- tarne
- Tihedus
- Sügavused
- Disain
- tuvastatud
- Detection
- kindlaksmääratud
- määrates kindlaks
- & Tarkvaraarendus
- seade
- DID
- erinev
- digitaalne
- digiteeritud
- mõõdud
- avastama
- Ekraan
- kaugus
- jaotus
- Ülekaal
- koostatud
- ajam
- ajal
- e
- iga
- mõju
- energia
- Inseneriteadus
- tõhustatud
- viga
- Hinnanguliselt
- Eeter (ETH)
- eetika
- Euroopa
- Euroopa Parlament
- hinnatud
- Isegi
- näide
- erutatud
- välja jäetud
- kogemus
- eksport
- väljendatud
- silm
- silmad
- ees
- väli
- Valdkonnad
- Viigipuu
- Joonis
- arvandmed
- täidetud
- filtreerida
- süütamise
- esimene
- fikseeritud
- lend
- Keskenduma
- keskendunud
- Järel
- eest
- vorm
- avastatud
- Neljas
- FRAME
- Sagedus
- Alates
- funktsioon
- funktsionaalne
- põhiline
- Pealegi
- ge
- GE Healthcare
- loodud
- põlvkond
- geomeetria
- antud
- Maa
- Grupp
- suunata
- Hamilton
- juhataja
- Tervis
- tervishoid
- rohkem
- kõrgelt
- HTTPS
- inim-
- i
- Identifitseerimine
- tuvastatud
- IEEE
- pildid
- Imaging
- oluline
- in
- inkubeeritud
- eraldi
- info
- esialgne
- sisend
- instrumendid
- huvi
- seotud
- ITS
- Võti
- labor
- suurem
- suurim
- Hilinemine
- Seadus
- kihid
- Legends
- Pikkus
- Tase
- lakkumisest
- elu
- Maaülikooli
- valgus
- joon
- LINK
- seotud
- kohalik
- kohapeal
- asub
- liising
- kohad
- Pikk
- Vaatasin
- tehtud
- hooldus
- peamine
- käsitsi
- kaart
- kaardid
- Mass
- materjal
- maksimaalne
- MEA
- tähendus
- mõõdud
- mehaaniline
- keskmine
- Merck
- meetod
- hiired
- mikron
- Mikroskoobi
- miinimum
- segu
- ML
- viis
- mudel
- MOL
- järelevalve
- kuu
- kuu
- suu
- liikuv
- MS
- mitmekordne
- Mutatsioon
- riiklik
- National Institutes of Health
- loodus
- võrk
- võrgustikud
- Neuronid
- Uus
- järgmine
- number
- eesmärk
- saama
- saadud
- of
- olympus
- on
- ONE
- avamine
- tegutsevad
- et
- Muu
- muidu
- üleöö
- parameetrid
- parlament
- osa
- Vastu võetud
- tipp
- esitades
- fööniks
- füüsiline
- tükki
- Plasma
- plast
- Platon
- Platoni andmete intelligentsus
- PlatoData
- mängima
- plugin
- Punkt
- võrra
- portfell
- paigutatud
- positsioone
- potentsiaal
- võim
- Täpsus
- esitatud
- vajutage
- surve
- protsess
- tootma
- Toodetud
- Programm
- omadused
- protokoll
- protokollid
- tingimusel
- pulss
- pump
- Küülik
- tõstatatud
- ROT
- määr
- suhe
- jõudma
- jõudis
- reaalne
- realistlik
- taastumine
- kajastatud
- kohta
- kord
- piirkond
- piirkondades
- Registreerimine
- asendatakse
- Aruandlus
- esindatud
- teadustöö
- uurimislaborid
- resolutsioon
- vastavalt
- Reageerida
- vastates
- vastus
- REST
- taastamine
- taastamine
- piirang
- tulemuseks
- Võrkkest
- Tõusma
- Roll
- ruum
- Marsruut
- s
- sama
- stsenaarium
- ajakava
- SCI
- teadus
- TEADUSED
- skripte
- Teine
- kesk-
- lõigud
- väljavalitud
- selektiivne
- Tundlikkus
- andur
- Jada
- Seerum
- istung
- istungid
- komplekt
- kujundatud
- Sigma
- Signaali
- signaale
- Räni
- sarnane
- simuleerimine
- site
- SIX
- SUURUS
- nahk
- Viil
- väike
- tarkvara
- lahendus
- heli
- allikas
- ruumiline
- konkreetse
- määratletud
- kiirus
- ora
- naelu
- Kaubandus-
- Spreading
- Hoidla
- Stage
- standard
- statistiline
- teras
- stiimul
- Uuring
- edu
- parem
- Pind
- peatamine
- Peatused
- vahetatud
- süsteem
- süsteemid
- tank
- sihtmärk
- sihtimine
- Ülesanne
- Tehnoloogiad
- test
- testid
- et
- .
- Piirkond
- oma
- seetõttu
- soojus
- Need
- Thompson
- tuhandeid
- kolm
- kolmemõõtmeline
- künnis
- Läbi
- aeg
- kudede
- et
- Tööriistakast
- koolitatud
- üle
- kohtuprotsess
- uuringutes
- Tõde
- ultraheli
- us
- kasutama
- Kasutajad
- v1
- kinnitatud
- väärtus
- Väärtused
- ventiil
- VBA
- Kontrollimine
- kinnitatud
- nägemus
- vivo
- volumetriline
- W
- Vesi
- Wave
- nädalavahetus
- nädalat
- kaal
- Hästi
- mis
- valge
- aknad
- koos
- jooksul
- maailm
- kirjalik
- sephyrnet