In Vivo Real-time Positron Emission Particle Tracking (PEPT) And Single Particle PET - Nature Nanotechnology

প্লেটো দ্বারা প্রকাশিত

অনুসরণকারী: 0

সমস্ত রিএজেন্টগুলি প্রাপ্ত হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল যদি না অন্যথায় বলা হয়। সমস্ত রাসায়নিকগুলি সিগমা অ্যালড্রিচ থেকে কাউন্টিং পুঁতিগুলি (কাউন্টব্রাইট অ্যাবসোলিউট কাউন্টিং বিডস, ইনভিট্রোজেন) ব্যতীত কেনা হয়েছিল। ζ- একটি Zetasizer NanoZS90 (Malvern Instruments) ব্যবহার করে সম্ভাব্য পরিমাপ করা হয়েছিল। মৌলিক বিশ্লেষণ প্রদানের জন্য সমন্বিত EDS সহ একটি JEOL JSM 7800F প্রাইম মাইক্রোস্কোপে SEM দ্বারা কণার আকার এবং রূপবিদ্যা অধ্যয়ন করা হয়েছিল। 50টি স্বাধীন কণা পরিমাপ করে কণার আকার নির্ধারণ করা হয়েছিল। রেডিও ইনস্ট্যান্ট থিন-লেয়ার ক্রোমাটোগ্রাফি (আইটিএলসি) সিলিসিক অ্যাসিড দিয়ে পূর্ণ Agilent টেকনোলজিস গ্লাস মাইক্রোফাইবার ক্রোমাটোগ্রাফি পেপারে তৈরি করা হয়েছিল এবং একটি ল্যাবলজিক ফ্লো-কাউন্ট টিএলসি স্ক্যানার এবং একটি বায়োস্ক্যান B-FC-3200 ফটোমাল্টিপ্লায়ার টিউব (PMT) সফ্টওয়্যার ডিটেক্টর ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। আইটিএলসি মোবাইল ফেজটি পানিতে 0.175 এম সাইট্রিক অ্যাসিড এবং 0.325 এম ট্রাইসোডিয়াম সাইট্রেট দ্বারা গঠিত ছিল যদি না অন্যথা বলা হয়। তেজস্ক্রিয় নমুনাগুলি একটি Capintec CRC-25R (Capintec) বা একটি LKB Wallac 1282 Compugamma CS (PerkinElmer) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল যার জন্য EdenTerm সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ করা হয়েছিল। BD FACSChorus সফটওয়্যার ব্যবহার করে একটি BD FACSMelody সেল সোর্টারে ফ্লো সাইটোমেট্রি পরীক্ষা করা হয়েছিল। PET/CT চিত্রগুলি একটি NanoPET/CT স্ক্যানার (Mediso) ব্যবহার করে অর্জিত হয়েছিল, Nucline v.0.21 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে পুনর্গঠন করা হয়েছিল এবং VivoQuant সফ্টওয়্যার (সংস্করণ 3.5, InviCRO) ব্যবহার করে চিত্রগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। লিস্টমোড ডেটা মেডিসো দ্বারা তৈরি একটি নির্দিষ্ট MATLAB সফ্টওয়্যার টুল দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। একটি জিই আমেরশাম টাইফুন যন্ত্রে অটোরাডিওগ্রাফি করা হয়েছিল।

সাব-মাইক্রোমিটার-আকারের সিলিকা কণার সংশ্লেষণ

কণাগুলি Stöber পদ্ধতি ব্যবহার করে সংশ্লেষিত হয়েছিল। এই পদ্ধতিটি হাইড্রোলাইসিস এবং সিলিকন অ্যালকোক্সাইডের ক্রমাগত ঘনীকরণের উপর ভিত্তি করে মনোডিস্পার্স, গোলাকার সিলিকা কণা তৈরি করে।²⁷. টেট্রাইথাইল অর্থোসিলিকেট (টিইওএস) সিলিকন উত্স হিসাবে, বেস অনুঘটক হিসাবে অ্যামোনিয়া এবং ইলেক্ট্রোলাইট হিসাবে পটাসিয়াম ক্লোরাইড ব্যবহার করা হয়েছিল। ইথানলে TEOS এর একটি দ্রবণ ক্রমাগত অনুঘটক এবং ইলেক্ট্রোলাইট ধারণকারী একটি দ্রবণে যোগ করা হয়েছিল। বিকারক শুরুর পরিমাণ বা সংযোজন হারের পরিবর্তন পূর্বে রিপোর্ট করা কণার আকারে পার্থক্য প্রদান করে²⁸. এখানে, কণাগুলির সংশ্লেষণের আগে দুটি সমাধান প্রস্তুত করা হয়েছিল: সমাধান 1 যেটিতে 19.0 মিলি EtOH এর 33.3 mmol TEOS রয়েছে এবং 2 মিলি অ্যামোনিয়াতে 0.23 mmol KCl, 9 মিলি EtOH এবং 65 মিলি এইচ রয়েছে।₂O. সংশ্লেষণের জন্য, সমাধান 2 একটি 250 মিলি বৃত্তাকার-নিচের ফ্লাস্কে 50 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় 300 মিনিটের জন্য 15 rpm-এ নাড়তে উত্তপ্ত করা হয়েছিল। তারপরে, সমাধান 1 সমাধান 2 এর সাথে ড্রপওয়াইজে যোগ করা হয়েছিল (সরবরাহের হার 0.2 মিলি মিনিট^-1) সমাধান 1 যোগ করার পরে, প্রাপ্ত কণাগুলি 18,300 এ সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিলg 3 মিনিটের জন্য এবং EtOH দিয়ে পাঁচবার ধুয়ে ফেলুন। অবশেষে, এসআইও₂ মাইক্রো পার্টিকেলগুলি ভ্যাকুয়ামের নীচে শুকানো হয়েছিল।

সিলেন-পিইজি দিয়ে সাব-মাইক্রোমিটার-আকারের কণার গ্রাফটিং_5k

একটি 20 মিলিগ্রাম মিলি^-1 সিলেন-পিইজি এর সমাধান_5k (সিগমা অ্যালড্রিচ) EtOH-এ 98% যোগ করা হয়েছিল 5 mg ml-এ smSiP এর দ্রবণে^-1 EtOH-এ 98% এবং অ্যামোনিয়ার 2.8%। মিশ্রণটি ঘরের তাপমাত্রায় রাতারাতি আলোড়িত হয়েছিল এবং 18,300 এ সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কণাগুলি উদ্ধার করা হয়েছিলg 3 মিনিটের জন্য অবশেষে, কণাগুলি পাতিত জল দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং রাতারাতি ভ্যাকুয়ামের নীচে শুকানো হয়েছিল। ওয়াশিং দ্রবণগুলি রাতারাতি ফ্রিজে-শুকানো হয়েছিল এবং অবিচ্ছিন্ন সিলেনের পরিমাণ – পিইজি_5k বিক্রিয়া ফলন গণনার জন্য ওজনযুক্ত। একটি 0.05 মিলিগ্রাম মি.লি^-1 smSiP-PEG এর সমাধান_5k পাতিত জলে আরও রেডিওলেবেলিং প্রতিক্রিয়ার জন্য নিযুক্ত করা হয়েছিল।

[⁶⁸Ga] GaCl₃

গ্যালিয়াম-68 হিসাবে উন্মুক্ত করা হয়েছিল [⁶⁸Ga] GaCl₃ একার্ট এবং জিগলার থেকে ⁶⁸জি /⁶⁸আল্ট্রাপিউর এইচসিএল (4 মিলি, 0.1 এম) এ গা জেনারেটর ভাল উত্পাদন অনুশীলনের প্রয়োজনীয়তা (এবিএক্স) অনুসারে তৈরি।

এর ঘনত্ব [⁶⁸Ga] GaCl₃ ক্যাটান এক্সচেঞ্জ দ্বারা নির্গমন

পরিপূরক চিত্রে বর্ণিত সেটআপ ব্যবহার করে ইলুশনের ঘনত্ব সম্পাদিত হয়েছিল। 1. প্রথমে 4 মিলি [⁶⁸Ga] GaCl₃ ইলিউশন একটি স্ট্র্যাটা-এক্সসি 33u কার্টিজে (ফেনোমেনেক্স) লোড করা হয়েছিল এবং ইলুয়েটটি বাতিল করা হয়েছিল। তারপরে, কার্টিজটিকে 5 মিলি অ্যাসিটোন/0.1 এম এইচসিএল (80:20) দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং ইলুয়েটটি বাতিল করা হয়েছিল। অবশেষে, ঘনীভূত [⁶⁸Ga] GaCl₃ 700 μl একটি অ্যাসিটোন/0.05 M HCl (98:2) দ্রবণ যোগ করে সংগ্রহ করা হয়েছিল, একটি N-এর নীচে শুকানো হয়েছিল₂ 50 M HEPES বাফার, (pH 0.5) এর 4.9 μl এ স্ট্রিম এবং পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছে। মান নিয়ন্ত্রণের জন্য রেডিও-টিএলসি বিভিন্ন পর্যায়ে সঞ্চালিত হয়েছিল। প্রোটোকলটি 20 ± 86.2% পুনরুদ্ধার ফলন প্রদান করে প্রায় 8.5 মিনিট সময় নেয়।

এর সাথে বিভিন্ন ঘনত্বে সিলিকা কণার রেডিওলেবেলিং ⁶⁸Ga

সিলিকা কণাগুলিকে বিভিন্ন ঘনত্বে পুনরায় স্থগিত করা হয়েছিল (1 থেকে 0.002 মিলিগ্রাম পর্যন্ত^-1) 0.5 M HEPES বাফারে (pH 4.9)। তারপর, ঘনীভূত সংযোজনের আগে 50 μl দ্রবণ একটি প্রতিক্রিয়া টিউবে যোগ করা হয়েছিল।⁶⁸Ga] GaCl₃ 50 M HEPES বাফার (pH 0.5) এর 4.9 μl এ ইলিউশন। 90 মিনিটের জন্য 30 ডিগ্রি সেলসিয়াসে প্রতিক্রিয়া পরিচালিত হয়েছিল এবং রেডিও-কেমিক্যাল ফলন গণনা করার জন্য রেডিও-টিএলসি করা হয়েছিল।

প্রবাহ সাইটোমেট্রি দ্বারা কণা ঘনত্ব পরিমাপ

কণার ঘনত্ব নির্মাতার নির্দেশ অনুসরণ করে গণনা পুঁতি (কাউন্টব্রাইট অ্যাবসোলিউট কাউন্টিং বিডস, ইনভিট্রোজেন) ব্যবহার করে প্রবাহ সাইটোমেট্রি দ্বারা গণনা করা হয়েছিল। সিলিকা কণাগুলি 0.05 মিলিগ্রাম মিলিতে পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল^-1, 10 মিনিটের জন্য sonicated এবং একটি 10 µm কাট-অফ আকারের ফিল্টার (KX সিরিঞ্জ ফিল্টার, নাইলন, 25 মিমি, 10 µm) মাধ্যমে পাস করা হয়েছে৷ কাউন্টব্রাইট অ্যাবসলিউট কাউন্টিং বিডগুলি ঘরের তাপমাত্রায় উষ্ণ করা হয়েছিল এবং 30 সেকেন্ডের জন্য ঘূর্ণায়মান হয়েছিল। তারপরে, 50 μl সিলিকা কণার সাথে 300 μl পুঁতি যোগ করা হয়েছিল এবং একটি সমজাতীয় দ্রবণ পাওয়ার জন্য মিশ্রণটি 30 মিনিটের জন্য ঘূর্ণায়মান ছিল। নমুনাটি ফ্লো সাইটোমিটারে চালিত হয়েছিল এবং ফরোয়ার্ড স্ক্যাটার (FSC) থ্রেশহোল্ড সেট করা হয়েছিল যাতে লিনিয়ার-FSC বনাম লিনিয়ার-সাইড স্ক্যাটার প্লটে পুঁতি এবং কণা অন্তর্ভুক্ত থাকে। পরে, ফ্লুরোসেন্স ডিটেক্টর ভোল্টেজ গণনা পুঁতিগুলির জন্য সামঞ্জস্য করা হয়েছিল এবং সিলিকা কণা এবং গণনা পুঁতির জনসংখ্যাকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য একটি গেটিং কৌশল সম্পাদিত হয়েছিল। অবশেষে, কণাগুলির গেটগুলি এবং পরম গণনা পুঁতিগুলি আঁকা হয়েছিল এবং প্রতিটি নমুনার জন্য 1,000 পুঁতি ঘটনা রেকর্ড করা হয়েছিল। এই কৌশলটি ব্যবহার করে, নিম্নলিখিত সমীকরণ ব্যবহার করে সমাধানে কণার সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল:

$$begin{array}{l}displaystyle{mathrm{Absolute}},{mathrm{count}},left(frac{mathrm{Particles}}{{{upmu l}}}right)=displaystylefrac{({mathrm{ কণা}},{mathrm{count}},times,{mathrm{Counting}},{mathrm{beads}},{mathrm{volume}})}{({mathrm{Counting}},{mathrm{beads}} ,{mathrm{count}},times,{mathrm{particles}},{mathrm{volume}})} বার,{mathrm{Counting}},{mathrm{beads}},{mathrm{concentration}}left(frac {{mathrm{Beads}}}{{{upmu l}}}ডান) শেষ{অ্যারে}$$

500 smSiP এর রেডিওলেবেলিং

50 μl ঘনীভূত [⁶⁸Ga] GaCl₃ 0.5 M HEPES বাফার pH 4.9 এ ইলুশন। তারপরে, 5.6 µl পলিসরবেট 80 যোগ করা হয়েছিল এবং একটি তাপীয় মিক্সারে 90 rpm-এ 30 মিনিটের জন্য 900 °C তাপমাত্রায় মিশ্রণটি গরম করা হয়েছিল। পরবর্তীতে, একটি চূড়ান্ত মাল্টি-স্টেপ পরিশোধন প্রোটোকল তৈরি করা হয়েছিল যাতে অপ্রতিক্রিয়াবিহীন/কলয়েডাল অপসারণ করা হয়। ⁶⁸গা। 10 মিমি ইডিটিএ-র পঞ্চাশ মাইক্রোলিটার যোগ করা হয়েছিল, এবং মিশ্রণটি ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের মধ্যে সেদ্ধ করা হয়েছিল। তারপরে, কণাগুলিকে 3 এ 18,300 মিনিটের জন্য কেন্দ্রীভূত করা হয়েছিলg, 500 mM EDTA + 1% পলিসরবেট 0.1 ধারণকারী PBS-এর 80 μl-এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছে এবং 10 সেকেন্ডের জন্য আলতোভাবে ঘূর্ণি করা হয়েছে। কণাগুলিকে আবার সেন্ট্রিফিউজ করা হয়, পিবিএস-এ 0.1 মিমি ইডিটিএ + 0.1% পলিসরবেট 80 এর দ্রবণ দিয়ে ধুয়ে 10 সেকেন্ডের জন্য আলতোভাবে ঘূর্ণি করা হয়। অবশেষে, কণাগুলিকে সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং পিবিএস + 0.1% পলিসরবেট 80 দিয়ে আরও পাঁচবার ধোয়া হয়েছিল এবং 500 μl পিবিএস-এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল। কোলয়েডের উপস্থিতি মূল্যায়ন করার জন্য ক্রমাগত প্রতিক্রিয়া পদক্ষেপের সময় রেডিও-টিএলসি দ্বারা রেডিওলেবেলিং প্রতিক্রিয়া পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল (যা সঠিকভাবে সরানো না হলে কণার সাথে বিভ্রান্ত হতে পারে), কণাগুলির রেডিওলেবেলিং এবং চূড়ান্ত পণ্যের বিশুদ্ধতা। ধোয়ার পদক্ষেপের পরে কণার তেজস্ক্রিয়তার পরিমাণ এবং সুপারনাট্যান্টের মধ্যে তুলনা করে RLY গণনা করা হয়েছিল।

fractionation

ভগ্নাংশের কৌশলের জন্য, ভলিউম 0.5 µl থেকে 20 µl পর্যন্ত ⁶⁸1 কণা μl এর তাত্ত্বিক ঘনত্বে Ga-smSiP^-1 1 μl ধাপে (0.5, 1, 2, 3…) বিভিন্ন নমুনা টিউবে যোগ করা হয়েছিল এবং চূড়ান্ত ভলিউম 50 μl এ আনতে PBS যোগ করা হয়েছিল। তারপরে, প্রথম টিউব থেকে 37.5 μl একটি দ্বিতীয় নমুনা টিউবে পাইপেটেড করা হয়েছিল, দ্বিতীয় টিউবের 25 μl একটি তৃতীয় টিউবে এবং অবশেষে 12.5 μl তৃতীয় টিউব থেকে চতুর্থ টিউবে। এই কৌশলটি প্রতি নমুনা প্রতি 12.5 μl এর চূড়ান্ত ভলিউম সহ চারটি টিউব সরবরাহ করে। প্রতিটি টিউবের তেজস্ক্রিয়তা একটি গামা কাউন্টারে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং আরও তুলনা এবং বিশ্লেষণের জন্য মানগুলি একটি ক্রমাঙ্কন বক্ররেখা ব্যবহার করে kBq তে গণনা করা হয়েছিল। শুধুমাত্র একটি টিউবে বেশিরভাগ তেজস্ক্রিয়তা ধারণকারী নমুনাগুলি ঘরের তাপমাত্রায় 30 সেকেন্ডের জন্য সোনিকেট করা হয়েছিল এবং একটি দ্বিতীয় ভগ্নাংশ পদক্ষেপের অধীন ছিল। তারপরে, যে নমুনাগুলিতে সমস্ত তেজস্ক্রিয়তা একটি একক টিউবে পাওয়া গেছে (অন্য তিনটি টিউবে নগণ্য কার্যকলাপ সহ) ভিভো/প্রাক্তন ভিভো পরীক্ষায় আরও ব্যবহার করা হয়েছিল।

PET/CT ফ্যান্টম ইমেজিং

একজনের সাথে একটি ফ্যান্টম ইমেজিং পরীক্ষা চালানো হয়েছিল ⁶⁸Ga-smSiP. প্রশাসনের সময় ক্যানুলা টিউবিংয়ে একটি একক কণা আটকে থাকতে পারে কিনা তা মূল্যায়ন করতে একটি নমুনা টিউবে কণা সরবরাহ করতে একটি ক্যানুলা ব্যবহার করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, ফ্যান্টম টিউবটি ন্যানোপিইটি/সিটি স্ক্যানারে টিউবের সাথে সংযুক্ত ক্যানুলা টিপের শেষের সাথে স্থাপন করা হয়েছিল। পিইটি অধিগ্রহণ শুরু করার পরে, 100 μl পিবিএস-এ পুনরায় সাসপেন্ড করা কণাটি ক্যানুলার শুরুতে সংযুক্ত একটি ইনসুলিন সিরিঞ্জের সাথে বিতরণ করা হয়েছিল। তারপরে, ফ্যান্টম টিউবে কণার সরবরাহ নিশ্চিত করতে ক্যানুলাটি 50 μl পিবিএস দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। PET অধিগ্রহণটি 2 ঘন্টার জন্য করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি স্ট্যান্ডার্ড সিটি স্ক্যান করা হয়েছিল।

ভিভো পিইটি/সিটি ইমেজিং-এ

প্রাণীর ইমেজিং অধ্যয়নগুলি নৈতিকভাবে পর্যালোচনা করা হয়েছিল এবং প্রাণীদের (বৈজ্ঞানিক পদ্ধতি) আইন 1986 (ASPA) ইউকে হোম অফিসের নিয়ম অনুযায়ী পশু পরীক্ষা নিয়ন্ত্রন করা হয়েছিল। ভিভো ইমেজিং সুস্থ 8-সপ্তাহ বয়সী BALB/c ইঁদুরগুলিতে পরিচালিত হয়েছিল। প্রাণীদের আইসোফ্লুরেন (অক্সিজেনে 2-3%) দিয়ে চেতনানাশক করা হয়েছিল, ক্যানুলেট করা হয়েছিল এবং অ্যানেশেসিয়ার অধীনে স্ক্যানার বিছানায় রাখা হয়েছিল। প্রাণীটিকে স্বাভাবিক শরীরের তাপমাত্রায় রাখতে অভ্যন্তরীণ বায়ু প্রবাহের মাধ্যমে বিছানাটি 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে উত্তপ্ত করা হয়েছিল এবং শ্বাস-প্রশ্বাসের হার 60-80 শ্বাস-প্রশ্বাস মিনিটে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং বজায় রাখা হয়েছিল।^-1 পুরো স্ক্যান জুড়ে। প্রাণীর তাপমাত্রার উপর নিয়ন্ত্রণ বজায় রাখা গুরুত্বপূর্ণ, কারণ তাপমাত্রার একটি অপ্রত্যাশিত হ্রাস রক্তে কণার গতিবেগ হ্রাস করতে পারে। এক ⁶⁸Ga-smSiP (n = 4) বা ⁶⁸Ga-smSiP-PEG_5k কণা (n = 2) ক্যানুলার মাধ্যমে 100 μl পিবিএস-এ পরিচালিত হয়েছিল, তারপরে পিইটি অধিগ্রহণ শুরু করার পরে 50 μl পিবিএস দিয়ে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল (1:5 কাকতালীয় মোড; 5 এনএস কাকতালীয় সময় উইন্ডো)। পিইটি 2 ঘন্টার জন্য রেকর্ড করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি অর্ধবৃত্তাকার সিটি স্ক্যান করা হয়েছিল। পুরো প্রক্রিয়া চলাকালীন প্রাণীর শরীরের তাপমাত্রা এবং শ্বাসযন্ত্রের হার পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। টেরা-টোমো 3D পুনর্গঠন (400–600 keV শক্তি উইন্ডো, 1:5 কাকতালীয় মোড, 20 পুনরাবৃত্তি এবং 1 উপসেট) ব্যবহার করে গতিশীল PET/CT চিত্রগুলি 0.4 × 0.4 × 0.4 মিমি ভক্সেল আকারে পুনর্গঠন করা হয়েছিল³ এবং ক্ষয়, বিক্ষিপ্ত এবং ক্ষয়ের জন্য সংশোধন করা হয়েছে। সমস্ত PET/PEPT অধিগ্রহণের জন্য তালিকা-মোড ডেটা পাওয়া যাবে ⁶⁸রেফ এ Ga-smSiP. ²⁹ এবং জন্য ⁶⁸Ga-smSiP-PEG_5k রেফ এ ³⁰.

রিয়েল-টাইম ট্র্যাকিং

প্রথমত, স্ক্যানার থেকে লিস্টমোড ফর্ম্যাটে ডেটা রপ্তানি করা হয়েছিল (অর্থাৎ, শনাক্ত কাকতালীয় ফোটনগুলির জন্য একটি টাইমস্ট্যাম্প এবং ক্রিস্টাল সূচক সহ একটি বিন্যাস)। মিমি ইউনিটে স্ফটিক সূচক থেকে অবস্থানে রূপান্তর করতে একটি জ্যামিতিক রূপান্তর প্রয়োগ করা হয়েছিল। বার্মিংহাম পদ্ধতি পুনরাবৃত্তিমূলকভাবে সমস্ত LoR-এর একটি উপসেট থেকে MDP গণনা করে। এটি এমডিপি থেকে একটি নির্দিষ্ট দূরত্বের চেয়ে বেশি দূরত্বে থাকা LoRগুলিকে বাতিল করে এটি করে কারণ এগুলি মিথ্যা LoR থেকে উদ্ভূত হওয়ার সম্ভাবনা রয়েছে, উদাহরণস্বরূপ, LoR গুলি যা ছড়িয়ে পড়তে পারে। MDP প্রতিটি পুনরাবৃত্তির সাথে পরিমার্জিত হয়; পুনরাবৃত্তির সংখ্যা কার্যকরভাবে দ্বারা সেট করা হয় f-ফ্যাক্টর এবং মোট LoR এর সাথে সম্পর্কিত যা সেই উপসেটের মধ্যে চূড়ান্ত কণার অবস্থান অনুমান করতে ব্যবহৃত হয় (উদাহরণস্বরূপ, একটি f-0.5-এর ফ্যাক্টর মানে হল যে যখন উপসেটের 50% LoR থাকবে তখন পুনরাবৃত্তি লুপটি বন্ধ হয়ে যাবে)। অবস্থানের অনিশ্চয়তা বাড়ানোর খরচে টেম্পোরাল স্যাম্পলিং (সাবসেটগুলি কোনো ওভারল্যাপ ছাড়াই ধারাবাহিকভাবে) উন্নত করতে একটি উপসেটে ব্যবহৃত LoR-এর সংখ্যা কমানো যেতে পারে (অ্যালগরিদমের আরও বিশদ বিবরণ পার্কার এট আল-এ পাওয়া যাবে।⁵) PET স্ক্যানার থেকে তালিকা-মোড ডেটা বিশ্লেষণ করতে বার্মিংহাম পদ্ধতি ব্যবহার করা হয়েছিল। ইঁদুরের কণা ট্র্যাক করতে একটি অভিযোজিত নমুনার আকার ব্যবহার করা হয়েছিল। নমুনার আকারটি পজিশনিং ত্রুটিগুলি হ্রাস করার সময় পর্যাপ্ত অস্থায়ী নমুনার ভারসাম্য অর্জনের জন্য সেট করা হয়েছিল। স্ক্যানের প্রাথমিক পর্যায়ে 100 থেকে 200 LoR-এর মধ্যে একটি নমুনা আকার ব্যবহার করা হয়েছিল (স্ক্যান শুরু থেকে <60 সেকেন্ড), সাথে f = 0.1, প্রায় 1-5 সেকেন্ডের ব্যবধানে ফলন। স্ক্যান করার সময় > 60 সেকেন্ডে, নমুনার আকার 1,000 থেকে 2,000 এর মধ্যে পরিবর্তিত হয়েছিল, যা ভিভো পরীক্ষার উপর নির্ভর করে 30 সেকেন্ড থেকে 60 সেকেন্ডের মধ্যে সময়ের ব্যবধান তৈরি করেছিল। MDP গণনা করতে ব্যবহৃত গণনার সংখ্যা (চূড়ান্ত পুনরাবৃত্তিতে) নমুনার আকারকে দ্বারা গুণ করে পাওয়া যাবে f- ফ্যাক্টর মান। এই পরামিতিগুলি পূর্বের অভিজ্ঞতার উপর ভিত্তি করে এবং পূর্ববর্তী প্রকাশনা দ্বারা অবহিত করা হয়েছিল¹.

হিসাবে গতি পাওয়া গেছে (sqrt{{v}_{x}^{2}+{v}_{y}^{2}+{v}_{z}^{2}}) কোথায় ({v}_{m}^{2}) মধ্যে বেগ হয় x, y এবং z দিকনির্দেশ।

প্রাক্তন ভিভো অঙ্গ আপটেক

গামা গণনা দ্বারা বিভিন্ন অঙ্গে গ্রহণের মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ইন ভিভো পিইটি/সিটি ইমেজিংয়ের পরে, জরায়ুর স্থানচ্যুতি দ্বারা প্রাণীদের হত্যা করা হয়েছিল এবং একটি গামা কাউন্টারে (এলকেবি ওয়ালাক 1282 কম্পুগামা সিএস) তেজস্ক্রিয়তা গণনা করার জন্য অঙ্গগুলি কেটে ফেলা হয়েছিল এবং ওজন করা হয়েছিল। ডেটা প্রতি গ্রাম টিস্যু (%ID g) শতাংশে ইনজেকশনের ডোজ (অঙ্গে ডোজ/মোট ডোজ ইনজেকশন) হিসাবে প্রকাশ করা হয়েছিল^-1).

Autoradiography

ফুসফুসের তেজস্ক্রিয়তা রেডিয়েশন ডিটেক্টর (EP15 প্রোব, মরগান) দিয়ে সনাক্ত করা হয়েছিল এবং তেজস্ক্রিয় সংকেত সহ টিস্যুর একটি ছোট অংশ পাওয়া পর্যন্ত ফুসফুসকে একটি স্কালপেল দিয়ে ছোট ছোট অংশে কাটা হয়েছিল। টিস্যুটি −80 °C আইসোপ্রোপ্যানলে হিমায়িত ছিল। হিমায়িত করার পরপরই, টিস্যুটি সর্বোত্তম কাটিং তাপমাত্রার মাধ্যমে এম্বেড করা হয়েছিল এবং 20 µm স্লাইসে একটি ক্রায়োস্ট্যাটে কাটা হয়েছিল। তেজস্ক্রিয় স্লাইস পাওয়া না যাওয়া পর্যন্ত প্রতিটি স্লাইস ডিটেক্টর দিয়ে জরিপ করা হয়েছিল। পূর্ববর্তী (ব্যাকগ্রাউন্ডের নীচে), তেজস্ক্রিয় এবং পরবর্তী (ব্যাকগ্রাউন্ডের নীচে) স্লাইস একটি সুপারফ্রস্ট মাইক্রোস্কোপ স্লাইডে (Epredia) স্থাপন করা হয়েছিল। অবশিষ্ট অবশিষ্ট টিস্যু এছাড়াও পটভূমি নীচে ছিল. তিনটি বিভাগ সহ মাইক্রোস্কোপ স্লাইডটি ক্লিং ফিল্ম দিয়ে আবৃত ছিল এবং রাতারাতি একটি জিই অটোরেডিওগ্রাফি প্লেটের বিরোধিতা করেছিল। 25 µm রেজোলিউশন এবং 4,000 এর PMT সেটিং সহ GE Amersham Typhoon ব্যবহার করে প্লেটটি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। অটোরেডিওগ্রাফি ছবিটি টিস্যুর ছবির উপর চাপানো হয়েছিল, তেজস্ক্রিয় স্লাইসে তেজস্ক্রিয়তার একটি স্থান দেখায়। পরিমাপের জন্য, বিভিন্ন পরিচিত ক্রিয়াকলাপে মান প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং প্রতিটিকে কাগজে 1 μl পঞ্চক হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। দাগগুলি একই স্টোরেজ ফসফর স্ক্রিনে, GE থেকে BAS-IP MS (মাল্টিপারপাস স্ট্যান্ডার্ড) একক কণার পরিমাপ হিসাবে উত্পাদিত হয়েছিল। ছবিটি Amersham Typhoon 5 এর সাথে কন্ট্রোল সফটওয়্যার সংস্করণ 2.0 এর সাথে ফসফর মোডে 100 µm এর পিক্সেল আকার এবং 4,000 এর সংবেদনশীলতার সাথে অর্জিত হয়েছিল। জেল কোয়ান্টিফিকেশন টুলবক্স ব্যবহার করে সফ্টওয়্যার ImageQantTL v10.0-261 দিয়ে চিত্রগুলি পরিমাপ করা হয়েছিল। একটি ধ্রুবক পটভূমি হিসাবে দাগের ঠিক আগে বা পরে একটি অঞ্চল বেছে নিয়ে দাগগুলি সংশোধন করা হয়েছিল। ক্রমাঙ্কন বক্ররেখার ভিত্তিতে কণাতে Bq গণনা করতে স্পটটির ফলস্বরূপ আয়তন ব্যবহার করা হয়েছিল।

পরিসংখ্যান এবং প্রজননযোগ্যতা

পরিমাণগত বিশ্লেষণের জন্য, ভিভো ডেটা বাদ দিয়ে ন্যূনতম তিনটি জৈবিক প্রতিলিপি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল ⁶⁸Ga-smSiP-PEG_5k (n = 2)। ডানেটের মাল্টিপল কম্প্যারিসন টেস্ট এবং স্টুডেন্টস এর সাথে ভ্যারিয়েন্সের সাধারণ একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল t-পরীক্ষা। ক P মান <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।