विवो उच्च-रिज़ॉल्यूशन तंत्रिका रिकॉर्डिंग और उत्तेजना के लिए नैनोपोरस ग्राफीन-आधारित पतली-फिल्म माइक्रोइलेक्ट्रोड - नेचर नैनोटेक्नोलॉजी

सामग्री की तैयारी और लक्षण वर्णन

0.15 mg ml प्राप्त करने के लिए जलीय GO घोल को विआयनीकृत पानी में पतला किया गया था^-1 घोल और वैक्यूम को 0.025 µm के छिद्रों वाली नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, जिससे GO की एक पतली फिल्म बनती है। फिर पतली फिल्म को विआयनीकृत पानी में गीले स्थानांतरण और 100 मिनट के लिए 2 डिग्री सेल्सियस पर थर्मल एनीलिंग का उपयोग करके लक्ष्य सब्सट्रेट में स्थानांतरित किया गया था। ईजीएनआईटीई बनाने के लिए जीओ फिल्म-सब्सट्रेट स्टैक को मानक आटोक्लेव में 134 °C पर 3 h के लिए हाइड्रोथर्मल रूप से कम किया गया था। EGNITE के सभी लक्षण वर्णन अध्ययनों के लिए आधार सब्सट्रेट एक वर्ग (1 × 1 cm) था²) Si/SiO का₂ (400 μm/1 μm).

एक्सपीएस

एक्सपीएस माप अल्ट्रा-हाई-वैक्यूम स्थितियों (बेस दबाव, 150 × 5) में फोइबोस 10 विश्लेषक (एसपीईसीएस) के साथ किया गया था^-10 mbar) एक मोनोक्रोमैटिक अल Kα एक्स-रे स्रोत (1,486.74 eV) के साथ। अवलोकन स्पेक्ट्रा 50 eV की पास ऊर्जा और 1 eV के चरण आकार के साथ प्राप्त किए गए थे और उच्च-रिज़ॉल्यूशन स्पेक्ट्रा 20 eV की पास ऊर्जा और 0.05 eV के चरण आकार के साथ प्राप्त किए गए थे। उन अंतिम स्थितियों में समग्र रिज़ॉल्यूशन 0.58 eV है, जैसा कि एजी 3 के आधे अधिकतम पर पूरी चौड़ाई को मापकर निर्धारित किया जाता है।d5/2 चटकी हुई चाँदी की चोटी। एक्सपीएस विश्लेषण सी-ओ शिखर (एपॉक्साइड समूहों से जुड़े) के हाइड्रोथर्मल उपचार के बाद एक मजबूत कमी दिखाता है, लेकिन हाइड्रॉक्सिल, कार्बोनिल्स और कार्बोक्सिल के कारण सी-ओएच, सी = ओ और सी (ओ) ओएच का एक छोटा सा योगदान होता है। कमी के बाद भी बने रहें. O1 का विघटनs पीक ऐसे व्यवहार की पुष्टि करता है। C1 में मुख्य योगदानs हालाँकि, हाइड्रोथर्मल कमी के बाद संकेत आता है sp² संकरित सी-सी ऑर्बिटल्स^34,57.

एक्स - रे विवर्तन

एक्स-रे विवर्तन माप (θ- 2θ स्कैन) एक सामग्री अनुसंधान डिफ्रेक्टोमीटर (माल्वर्न पैनालिटिकल) में किया गया था। इस डिफ्रेक्टोमीटर में एक क्षैतिज रेखा होती है ω- 2θ गोनियोमीटर (320 मिमी त्रिज्या) एक चार-सर्कल ज्यामिति में और Cu Kα एनोड के साथ एक सिरेमिक एक्स-रे ट्यूब के साथ काम करता है (λ = 1.540598 Å). इस्तेमाल किया गया डिटेक्टर एक पिक्सल है जो मेडिपिक्स2 तकनीक पर आधारित एक तेज़ एक्स-रे डिटेक्टर है।

रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी

रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी माप 488 एनएम लेजर उत्तेजना लाइन से सुसज्जित विटेक स्पेक्ट्रोग्राफ का उपयोग करके किया गया था। माप के लिए, रमन स्पेक्ट्रा को 50× उद्देश्य और 600 खांचे प्रति एनएम झंझरी का उपयोग करके प्राप्त किया गया था; नमूना हीटिंग से बचने के लिए लेजर पावर को 1.5 mW से नीचे रखा गया था।

मंदिर

EGNITE नमूने के क्रॉस-सेक्शन अध्ययन के लिए हेलिओस नैनोलैब डुअलबीम (LMA-INA) के साथ एक केंद्रित आयन बीम लैमेला तैयार किया गया था। संरचनात्मक विश्लेषण TEM के माध्यम से 20 kV पर संचालित Tecnai F200 माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया गया, जिसमें HRTEM और उच्च-कोण कुंडलाकार डार्क-फील्ड STEM तकनीक शामिल हैं। STEM-EELS प्रयोग 20 KeV पर काम करने वाले Tecnai F200 माइक्रोस्कोप में किया गया था, जिसमें 5 mm एपर्चर, 30 mm कैमरा लंबाई, 12.7 mrad का अभिसरण कोण और 87.6 mrad का संग्रह कोण था। चूंकि हमने कोर-लॉस अधिग्रहण में शुरुआती ऊर्जा के रूप में 0.5 eV प्रति पिक्सेल और 250 eV का उपयोग किया था, इसलिए हमें 1,839 eV पर अपेक्षित Si K-एज, 2,122 eV पर Pt M-एज और 2,206 eV पर Au M-एज प्राप्त नहीं हुआ। 100 eV. सापेक्ष सी-ओ परमाणु संरचना को कम जीओ परत पर अपना ध्यान केंद्रित करके और यह मानते हुए प्राप्त किया गया है कि विश्लेषण किए गए किनारों (हमारे मामले में सी और ओ) का योग XNUMX% है। यह धारणा हमारे मामले में मान्य है जैसा कि इसमें प्रमाणित है अनुपूरक जानकारी मानचित्र. ऊर्जा अंतर क्रॉस सेक्शन की गणना हार्ट्री-स्लेटर मॉडल और पृष्ठभूमि का उपयोग करके पावर-लो मॉडल का उपयोग करके की गई थी।

विद्युत चालकता

विद्युत चालकता माप दो-बिंदु विन्यास में कीथली 2400 सोर्समीटर का उपयोग करके किया गया था। मापे गए नमूनों में 1 × 1 सेमी की EGNITE फिल्में शामिल थीं² एक SiO के शीर्ष पर₂ सब्सट्रेट।

डेटा विश्लेषण

एक्स-रे विवर्तन, रमन और एक्सपीएस डेटा का विश्लेषण पायथन 3.7 पैकेज (नम्पी, पांडास, स्किपी, एक्सर्डटूल्स, एलएमएफआईटी, रैम्पी, पीकुटिल्स, मैटप्लोटलिब) का उपयोग करके किया गया था। स्नेल के नियम के अनुसार विमानों के बीच की दूरी की गणना एक्स-रे विवर्तन माप से की गई थी। एक बार जब डेटा को स्थानिक डोमेन में ले जाया गया, तो अधिकतम चोटियाँ फिट हो गईं। संगत दूरी ने विमानों के बीच की दूरी का औसत मान दिया। उन माध्य मानों से विचलन की गणना स्थानिक डोमेन पर चोटियों की लोरेंत्ज़ियन फिटिंग के आधे अधिकतम पर पूरी चौड़ाई से की गई थी। एक्सपीएस और रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी मापों का विश्लेषण संबंधित विशेषताओं के लिए अपेक्षित स्थानों पर चोटियों के कनवल्शन को फिट करके किया गया था। GO और EGNITE के चालकता मान को फिट करके प्राप्त किया गया था I-V ओम के नियम के अनुसार विद्युत चालकता माप में मापे गए वक्र। डेटा हैं n = प्रत्येक माप के लिए 1.

लचीली सरणी निर्माण

उपकरणों का निर्माण अनुपूरक चित्र में दिखाया गया है। 4. उपकरणों का निर्माण 4 इंच Si/SiO पर किया गया था₂ (400 μm/1 μm) वेफर्स। सबसे पहले, पीआई (पीआई-10, एचडी माइक्रोसिस्टम्स) की 2611-माइक्रोन-मोटी परत को वेफर पर घुमाया गया और नाइट्रोजन से समृद्ध वातावरण में 350 °C पर 30 मिनट के लिए पकाया गया। इमेज रिवर्सल फोटोरेसिस्ट (AZ5214, माइक्रोकेमिकल्स) की ऑप्टिकल लिथोग्राफी का उपयोग करके धातु के निशानों को पैटर्न दिया गया था। 20 nm टाइटेनियम और 200 सोना जमा करने के लिए इलेक्ट्रॉन-बीम वाष्पीकरण का उपयोग किया गया और लिफ्ट-ऑफ किया गया। हमने इलेक्ट्रोकेमिकल प्रदर्शन और सरणी लचीलेपन के बीच व्यापार-बंद के रूप में लगभग 1 μm मोटाई की EGNITE फिल्म का उपयोग किया। जीओ फिल्म को स्थानांतरित करने के बाद, एल्यूमीनियम को ई-बीम वाष्पित किया गया और भविष्य के माइक्रोइलेक्ट्रोड के शीर्ष पर क्षेत्रों को एक नकारात्मक फोटोरेसिस्ट (एनएलओएफ 2070, माइक्रोकेमिकल्स) और लिफ्ट ऑफ का उपयोग करके परिभाषित किया गया। इसके बाद, 5 W पर 500 मिनट के लिए ऑक्सीजन प्रतिक्रियाशील आयन नक़्क़ाशी (आरआईई) का उपयोग करके भविष्य के माइक्रोइलेक्ट्रोड के अलावा हर जगह जीओ फिल्म को उकेरा गया और सुरक्षात्मक एल्यूमीनियम स्तंभों को फॉस्फोरिक और नाइट्रिक एसिड के पतला समाधान के साथ उकेरा गया। फिर, पीआई-3 की 2611-माइक्रोन-मोटी परत वेफर पर जमा की गई और पहले बताए अनुसार बेक किया गया। माइक्रोइलेक्ट्रोड पर पीआई-2611 के उद्घाटन को एक सकारात्मक मोटी फोटोरेसिस्ट (एजेड9260, माइक्रोकेमिकल्स) का उपयोग करके परिभाषित किया गया था जो बाद के ऑक्सीजन आरआईई के लिए मास्क के रूप में कार्य करता था। बाद में, उपकरणों को फिर से AZ9260 फोटोरेसिस्ट और RIE का उपयोग करके PI परत पर पैटर्न दिया गया। फिर फोटोरेसिस्ट परत को एसीटोन में हटा दिया गया और वेफर को आइसोप्रोपिल अल्कोहल में साफ किया गया और सुखाया गया। अंत में, उपकरणों को वेफर से हटा दिया गया और उन्हें 134 h के लिए एक मानक आटोक्लेव में 3 °C पर हाइड्रोथर्मल रूप से उपचारित करने के लिए स्टरलाइज़ेशन पाउच में रखने के लिए तैयार किया गया।

माइक्रोइलेक्ट्रोड इलेक्ट्रोकेमिकल लक्षण वर्णन

माइक्रोइलेक्ट्रोड का इलेक्ट्रोकेमिकल लक्षण वर्णन 128× पीबीएस (सिग्मा-एल्ड्रिच, पी1) में मेट्रोहम ऑटोलैब पीजीएसटीएटी4417एन पोटेंशियोस्टेट के साथ किया गया था, जिसमें पीएच 10 पर 137 एमएम फॉस्फेट बफर, 2.7 एमएम NaCl और 7.4 एमएम केसीएल और तीन-इलेक्ट्रोड कॉन्फ़िगरेशन का उपयोग किया गया था। एक Ag/AgCl इलेक्ट्रोड (FlexRef, WPI) का उपयोग संदर्भ के रूप में किया गया था और एक प्लैटिनम तार (अल्फ़ा एज़र, 45093) का उपयोग काउंटर-इलेक्ट्रोड के रूप में किया गया था।

प्रदर्शन मूल्यांकन से पहले, इलेक्ट्रोड को 10,000 चार्ज-संतुलित दालों (1 ms, 15 µA) के साथ स्पंदित किया गया था। 100 mV s पर 0.9 चक्रीय वोल्टामेट्री चक्र (−0.8 से +50 V) द्वारा निरंतर स्पंदन प्रोटोकॉल के लिए इलेक्ट्रोड का एक्सपोजर^-1, 20 पल्स (5,000 ms) की 1 पुनरावृत्ति और ओपन सर्किट क्षमता का पुनर्निर्धारण।

डेटा विश्लेषण

इलेक्ट्रोकेमिकल लक्षण वर्णन डेटा का विश्लेषण पायथन 3.7 पैकेज (नम्पी, पांडास, स्किपी, पाइइस, एलएमएफआईटी, मैटप्लोटलिब) का उपयोग करके किया गया था। प्रतिबाधा स्पेक्ट्रोस्कोपी डेटा को एक समकक्ष विद्युत मॉडल में फिट किया गया था जिसमें एक प्रतिरोध शामिल था (R) एक स्थिर चरण तत्व (सीपीई) के साथ श्रृंखला में। वहां से, सीपीई मान को एक कैपेसिटेंस के बराबर अनुमानित किया गया था और ईजीएनआईटीई के इंटरफेशियल कैपेसिटेंस के बराबर मूल्य प्राप्त करने के लिए माइक्रोइलेक्ट्रोड ज्यामितीय क्षेत्र द्वारा विभाजित किया गया था। माइक्रोइलेक्ट्रोड चार्ज स्टोरेज कैपेसिटेंस (सीएससी) की गणना मापा वर्तमान के कैथोडिक और एनोडिक शासनों को एकीकृत करके और स्कैन दर द्वारा सामान्य करके चक्रीय वोल्टामेट्री माप से की गई थी। EGNITE की 100 mV स्कैन दर पर कैथोडिक और एनोडिक चार्ज स्टोरेज कैपेसिटेंस (cCSC और aCSC) 45.9 ± 2.4 और 34.6 ± 2.8 mC cm हैं^-2, क्रमश (n = 3). जैसा कि अन्य सामग्रियों के लिए रिपोर्ट किया गया है⁵⁸, प्राप्त सीएससी स्कैन दर (पूरक चित्र) पर निर्भर करते हैं। 5). ऑक्सीजन कटौती प्रतिक्रियाओं की उपस्थिति का आकलन करने के लिए, हमने नाइट्रोजन-पर्ज्ड इलेक्ट्रोलाइट के तहत सीवी तरंग को मापा⁵⁹ और तरंगरूप में पर्याप्त अंतर नहीं देखा गया (पूरक चित्र)। 6). हालाँकि, हमारे परिणाम EGNITE की चार्ज इंजेक्शन क्षमता में ऑक्सीजन कमी प्रतिक्रियाओं के प्रभाव को पूरी तरह से संबोधित नहीं करते हैं और इसकी उचित जांच के लिए अतिरिक्त काम करने की आवश्यकता है। माइक्रोइलेक्ट्रोड चार्ज इंजेक्शन क्षमता (सीआईसी) की स्थापना वर्तमान पल्स आयाम का निर्धारण करके की गई थी, जिससे वोल्टेज अंतर (ओमिक ड्रॉप को हटाने के बाद) उत्पन्न हुआ, जो इलेक्ट्रोड इलेक्ट्रोकेमिकल वॉटर विंडो (कैथोडिक के लिए -0.9 V और एनोडिक बनाम Ag/AgCl के लिए +0.8 V) से मेल खाता था। ) (पूरक चित्र। 17)⁶⁰.

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा माध्य ± s.d. है, n = ईआईएस के लिए 18 और n = क्रोनोपोटेंशियोमेट्री के लिए 3। कैथोडिक कैपेसिटिव वोल्टेज भ्रमण के मानचित्र का डेटा प्रत्येक पल्स आकार के लिए एक घटना के लिए कैथोडिक कैपेसिटिव वोल्टेज भ्रमण का माध्य है n = 3 इलेक्ट्रोड.

यांत्रिक स्थिरता मूल्यांकन

अल्ट्रासाउंड सोनिकेशन

EGNITE इलेक्ट्रोड सरणियों को एक अल्ट्रासाउंड वॉटर बाथ (एल्मासोनिक पी 180एच) में पानी से भरे बीकर के अंदर रखा गया था। सोनिकेशन को 37 W पर 15 मिनट के लिए 200 kHz पर लागू किया गया था, और उसके बाद 15 kHz पर अतिरिक्त 37 min की सोनिकेशन लागू की गई थी, जिसकी शक्ति 300 W तक बढ़ गई थी। सोनिकेशन चरणों से पहले और बाद में इलेक्ट्रोड की छवियां प्राप्त की गईं।

झुकने का परीक्षण

झुकने की व्यवस्था (चित्र। 2k) तीन बेलनाकार छड़ों से युक्त; बीच वाले हिस्से (व्यास, 700 µm) को नीचे उतारा गया, जिससे 131° का झुकने वाला कोण बना। झुकने के परीक्षण के लिए तीन लचीले माइक्रोइलेक्ट्रोड सरणियों का उपयोग किया गया था। प्रत्येक सरणी में 18 µm व्यास के 50 माइक्रोइलेक्ट्रोड होते हैं। दो सरणियों को 10 और 20 चक्रों के बाद मापा गया था जबकि एक उपकरण को केवल 10 चक्रों के लिए मापा गया था क्योंकि यह मापने के बाद संभालने के दौरान क्षतिग्रस्त हो गया था। झुकने वाले परीक्षण चक्र में 10-एस-लंबा लोड अनुप्रयोग और बिना किसी लोड के 10 s शामिल था। 10 और 20 झुकने वाले चक्रों से पहले और बाद में उपकरणों को इलेक्ट्रोकेमिकल रूप से चित्रित (ईआईएस और सीवी) किया गया था।

एपिकोर्टिकल न्यूरल रिकॉर्डिंग

एपिकोर्टिकल इम्प्लांटेशन

सभी प्रायोगिक प्रक्रियाएं प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए यूरोपीय समुदाय परिषद और फ्रांसीसी कानून की सिफारिशों के अनुसार की गईं। प्रोटोकॉल को ग्रेनोबल एथिकल कमेटी (कॉमएथ) द्वारा अनुमोदित किया गया था और फ्रांसीसी मंत्रालय (संख्या 04815.02) द्वारा अधिकृत किया गया था। स्प्रैग-डावले चूहे (नर, 4 महीने का, वजनदार -600 ग्राम) को केटामाइन (50 मिलीग्राम प्रति किग्रा (शरीर का वजन)) और ज़ाइलाज़ीन (10 मिलीग्राम प्रति किग्रा (शरीर का वजन)) के साथ इंट्रामस्क्युलर रूप से एनेस्थेटाइज किया गया, और फिर एक स्टीरियोटैक्सिक धारक पर तय किया गया। अस्थायी खोपड़ी को हटाने से श्रवण प्रांतस्था उजागर हो गई। कॉर्टिकल ऊतक को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए ड्यूरा मेटर को संरक्षित किया गया था। संदर्भ इलेक्ट्रोड को सम्मिलित करने के लिए शीर्ष पर एक छेद ड्रिल किया गया था, और ग्राउंड इलेक्ट्रोड को सम्मिलित करने के लिए एक दूसरा छेद, पहले वाले से सामने की ओर 7 मिमी, ड्रिल किया गया था। इलेक्ट्रोड 0.5-मिमी-मोटी पिन थे जिनका उपयोग एकीकृत सर्किट सॉकेट के लिए किया जाता था। उन्हें ड्यूरा मेटर के साथ विद्युत संपर्क बनाने के लिए रखा गया था और डेंटल सीमेंट के साथ खोपड़ी से जोड़ा गया था। फिर हमने श्रवण प्रांतस्था पर सतह माइक्रोइलेक्ट्रोड रिबन लगाया जैसा कि चित्र में दिखाया गया है। 3b. क्रेग के चूहे के मस्तिष्क मानचित्र के क्षेत्र 41 में शिरा पैटर्न श्रवण प्रांतस्था की पहचान करते हैं। कॉर्टिकल संकेतों को एक साथ 1,000 के लाभ के साथ प्रवर्धित किया गया और 33 kHz की नमूना दर पर डिजिटलीकृत किया गया। चूहे के कान के सामने 20 सेमी की दूरी पर एक स्पीकर, खुले कॉर्टेक्स के विपरीत, ध्वनिक उत्तेजना प्रदान करता है। वितरित उत्तेजनाओं की निगरानी कान के पास रखे गए 0.25 इंच के माइक्रोफोन (ब्रुएल एंड केजेर, 4939) द्वारा की गई और ध्वनि दबाव स्तर (dB SPL re 20 μPa) में प्रस्तुत की गई। हम 80 dB एसपीएल पर बारी-बारी से क्लिक करके उत्पन्न शीर्ष-सकारात्मक (नकारात्मक-ऊपर) मध्य-विलंबता प्रतिक्रियाओं की जांच करते हैं, और 70 से 5 kHz तक की आवृत्तियों के साथ 40 dB एसपीएल पर टोन विस्फोट उत्तेजनाओं, 5 ms की वृद्धि और गिरावट का समय और 200 ms की अवधि.

डेटा विश्लेषण

इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल डेटा का विश्लेषण पायथन 3.7 पैकेज (नम्पी, पांडा, स्किपी, नियो, एलिफेंट, स्केलेरन मैटप्लोटलिब) और कस्टम लाइब्रेरी PhyREC (https://github.com/aguimera/PhyREC). आर.एम.एस. मानों की गणना 20 हर्ट्ज से ऊपर आवृत्तियों पर 200 ms की स्लाइडिंग विंडो के साथ की गई थी। स्पेक्ट्रोग्राम की गणना 70 Hz और 1.1 kHz के बीच की सीमा के लिए की गई थी। PSD की गणना 60 से अधिक निरंतर रिकॉर्डिंग से की गई थी। किसी दिए गए इलेक्ट्रोड सरणी के लिए, दो PSDs की गणना की गई: इन विवो (IV) और पोस्ट-मॉर्टम (PM)। एसएनआर को डीबी (20 × ln(r.m.s.(IV)/r.m.s.(PM))) में व्यक्त किया जाता है और 20 Hz और 10 kHz के बीच लघुगणकीय रूप से 1 बिंदुओं के लिए प्रक्षेपित किया जाता है।

सांख्यिकीय विश्लेषण

एपिकोर्टिकल न्यूरल डेटा चित्र में प्रस्तुत किया गया है। 3 एक ही जानवर पर व्यक्तिगत माप से लिया जाता है। चित्र में. 3c64 इलेक्ट्रोड से डेटा प्रस्तुत किया गया है। चित्र में. 3d, दो चयनित इलेक्ट्रोडों से डेटा प्रस्तुत किया गया है। चित्र में. 3f, PSD और SNR की गणना 64 EGNITE इलेक्ट्रोड से की जाती है और इन्हें माध्य ± sd के रूप में दिखाया जाता है। अनुपूरक चित्र में. 12 सी, डी 192 EGNITE इलेक्ट्रोड के लिए माध्य डेटा प्रस्तुत किया गया है n = 3 प्रयोग और 60 प्लैटिनम इलेक्ट्रोड n = 1 प्रयोग.

इंट्राकॉर्टिकल न्यूरल रिकॉर्डिंग

इंट्राकॉर्टिकल इम्प्लांटेशन

जानवरों को केटामाइन/ज़ाइलाज़िन (75:1, 0.35 मिली/28 जी आईपी) के मिश्रण से बेहोश किया गया था और इस अवस्था को 1.5% आइसोफ्लुरेन प्रदान करने वाले इनहेलेशन मास्क के साथ बनाए रखा गया था। इम्प्लांट को स्थिर करने के लिए खोपड़ी में कई माइक्रोस्क्रू लगाए गए थे, और सेरिबैलम के शीर्ष पर एक को सामान्य जमीन के रूप में इस्तेमाल किया गया था। जांच को प्रीफ्रंटल कॉर्टेक्स (निर्देशांक: एपी, 1.5 मिमी; एमएल, ±0.5 मिमी; डीवी, ब्रैग्मा से −1.7 मिमी) में प्रत्यारोपित किया गया था। अस्थायी जांच कठोरता प्रदान करने और जांच सम्मिलन की सुविधा के लिए जांच को माल्टोज़ (नीचे प्रोटोकॉल देखें) के साथ कोटिंग करके प्रत्यारोपण किया गया था। जांच को डेंटल सीमेंट से सील कर दिया गया था। जांच को एक लघु केबल के माध्यम से इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल सिस्टम से जोड़ने के लिए टीडीटी-ज़िफ़क्लिप कनेक्टर का उपयोग किया गया था। सर्जरी के बाद, चूहे को एनाल्जेसिया (ब्यूप्रेनोर्फिन) और एंटी-इंफ्लेमेटरी (मेलॉक्सिकैम) उपचार प्राप्त करके 1 सप्ताह की रिकवरी अवधि से गुजरना पड़ा। तंत्रिका गतिविधि को मल्टीचैनल ओपन इफिस सिस्टम के साथ इंटन आरएचडी30 एम्पलीफायर के साथ 2132 kHz की नमूना दर पर दर्ज किया गया था। श्रवण कार्य प्रयोग एक ध्वनिरोधी बॉक्स में आयोजित किए गए थे, जिसमें पहले वर्णित कार्य के आधार पर प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए अंदर दो स्पीकर थे⁶¹. ध्वनि उत्तेजना में 15-एमएस-लंबा सफेद शोर क्लिक शामिल था, जिसे 100 बार (चक्र) दोहराया गया, प्रत्येक को 5 s (इंटरस्टिमुलस अंतराल) द्वारा अलग किया गया। कार्य के दौरान, जानवर स्वतंत्र रूप से घूमने में सक्षम था।

माल्टोज़ स्टिफ़नर प्रोटोकॉल

माल्टोज़ के जलीय घोल को कांच के संक्रमण बिंदु तक गर्म किया जाता है (T_g), 130 और 160 °C के बीच, गर्म प्लेट या माइक्रोवेव का उपयोग करके। एक बार जब माल्टोज़ चिपचिपा हो जाता है, तो जांच का पिछला भाग केवल माल्टोज़ के संपर्क में लाया जाता है। जैसे ही माल्टोज़ ठंडा हो जाता है, यह जांच को कठोर और कठोर बना देता है।

डेटा विश्लेषण

एसयूए और एलएफपी निकालने के लिए प्रत्येक इलेक्ट्रोड से तंत्रिका संकेतों को ऑफ़लाइन फ़िल्टर किया गया था। 450 और 6,000 हर्ट्ज के बीच सिग्नल को फ़िल्टर करके एसयूए का अनुमान लगाया गया था और ऑफ़लाइन सॉर्टर वी.4 (प्लेक्सॉन) के साथ प्रिंसिपल-घटक विश्लेषण का उपयोग करके व्यक्तिगत न्यूरॉन्स से स्पाइक्स को सॉर्ट किया गया था। एलएफपी प्राप्त करने के लिए, सिग्नलों को 1 kHz तक डाउनसैंपल किया गया, पायथन में कस्टम-लिखित स्क्रिप्ट के साथ शोर लाइन कलाकृतियों (50 Hz और इसके हार्मोनिक्स) को हटाने के लिए डिट्रेंडेड और नॉच-फ़िल्टर किया गया। एईपी एसएनआर की गणना शिखर एन1 आयाम और एसडी के अनुपात के रूप में की गई थी। उत्तेजना से पहले 20 ms की अवधि।

सांख्यिकीय विश्लेषण

चित्र में दिखाया गया डेटा। 3 घंटे, मैं माध्य ± s.d. हैं, n = 30 औसत परीक्षणों की संख्या के रूप में। एक ही इलेक्ट्रोड से रिकॉर्ड किया गया डेटा 30, 60 और 90 दिनों में दिखाया गया है। एक जानवर से डेटा प्रस्तुत किया गया है।

क्रोनिक एपिकोर्टिकल बायोकम्पैटिबिलिटी

उपकरणों का सर्जिकल प्रत्यारोपण

इस अध्ययन (चार्ल्स नदी) के लिए कुल 27 वयस्क, नर, स्प्रैग-डावले चूहों का उपयोग किया गया था। जानवरों को 21 ± 2 °C के परिवेश तापमान और 40-50% की आर्द्रता पर, 12 h प्रकाश/12 h अंधेरे चक्र पर रखा गया था। प्रायोगिक अवधि के दौरान चूहों को समूहों में रखा गया और उन्हें आहार और पानी तक मुफ्त पहुंच दी गई। यूके होम ऑफिस और स्थानीय पशु कल्याण नैतिक समीक्षा निकाय (एडब्ल्यूईआरबी) के अनुमोदन के तहत, पशु कल्याण अधिनियम (1998) के अनुसार प्रायोगिक प्रक्रियाएं की गईं। सर्जरी की अवधि के लिए जानवरों को आइसोफ्लुरेन (2-3%) से बेहोश किया गया था, और टो पिंच रिफ्लेक्स परीक्षण द्वारा एनेस्थीसिया की गहराई की निगरानी की गई थी। जानवरों को शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए थर्मल कंबल के ऊपर स्थित एक स्टीरियोटैक्सिक फ्रेम (कोफ, 900LS) में रखा गया था। एक क्रैनियोटॉमी छेद (-5 मिमी ×4 मिमी) को 1 मिमी बर्र ड्रिल बिट के साथ एक डेंटल ड्रिल का उपयोग करके मध्य रेखा से 0.9 मिमी दूर बनाया गया था, ड्यूरा को हटा दिया गया था और एपिकोर्टिकल डिवाइस को मस्तिष्क की कॉर्टिकल सतह पर रखा गया था। क्रैनियोटॉमी छेद को क्विक-सिल से सील कर दिया गया, इसके बाद डेंटल सीमेंट को सुरक्षित किया गया और त्वचा को टांके लगाकर बंद कर दिया गया। खोए हुए तरल पदार्थ को बदलने और पोस्टऑपरेटिव दर्द को कम करने के लिए सेलाइन (1 मिली प्रति किलोग्राम (शरीर का वजन)) और ब्यूप्रेनोर्फिन (0.03 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम (शरीर का वजन)) के चमड़े के नीचे के इंजेक्शन दिए गए, और एनेस्थीसिया वापस ले लिया गया।

ऊतक संग्रह और प्रसंस्करण

विश्लेषण के प्रकार के लिए उपयुक्त विधि द्वारा जानवरों को प्रत्यारोपण के 2, 6 या 12 सप्ताह बाद समाप्त कर दिया गया।

ऊतक विज्ञान और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री

2, 6 या 12 सप्ताह में प्रत्यारोपण के बाद चूहों को हेपरिनाइज्ड (10 यू एमएल) के साथ कार्डियक छिड़काव के माध्यम से समाप्त कर दिया गया।^-1, सिग्मा-एल्ड्रिच) पीबीएस, इसके बाद पीबीएस में 4% पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए, सिग्मा-एल्ड्रिच)। मस्तिष्क को 4 घंटे के लिए 24% पीएफए ​​में पोस्टफ़िक्स किया गया, फिर आइसोपेंटेन में जमने से पहले कम से कम 30 घंटे के लिए पीबीएस में 48% सुक्रोज़ में स्थानांतरित किया गया। मस्तिष्क को 80 µm पर क्रायोसेक्शन होने तक -25 °C पर संग्रहित किया गया। माइक्रोग्लियल सक्रियण के स्तर को निर्धारित करने के लिए ऊतक को आयनित कैल्शियम बाइंडिंग एडाप्टर अणु 1 (आईबीए -1) के लिए दाग दिया गया था। संक्षेप में, ऊतक वर्गों को प्राथमिक एंटीबॉडी एंटी-आईबीए -5 (0.1: 1, 4-1; वाको) के साथ 1 डिग्री सेल्सियस पर रात भर ऊष्मायन से पहले 1,000 घंटे के लिए 019% ट्राइटन-एक्स के साथ पीबीएस में 19741% बकरी सीरम के साथ अवरुद्ध किया गया था। फिर अनुभागों को कमरे के तापमान पर 594 घंटे के लिए द्वितीयक एंटीबॉडी, खरगोश-विरोधी एलेक्सा फ्लोर 1 (400:11012, ए-1; थर्मो फिशर) से दाग दिया गया। स्लाइड्स को 4,6-डायमिडीनो-2-फेनिलइंडोल (थर्मो फिशर) के साथ प्रोलॉन्ग गोल्ड एंटी-फेड माउंटिंग मीडिया का उपयोग करके कवरस्लिप्स के साथ लगाया गया था। जांच ने 3 × 3.7 मिमी क्षेत्र को कवर किया² मस्तिष्क की कॉर्टिकल सतह पर; धुंधलापन के लिए चयनित ऊतक खंडों को इस क्षेत्र की लंबाई में 3.2 मिमी कवर किया गया है। स्लाइड्स को 3× पर 250DHistech पैनोरैमिक-20 माइक्रोस्कोप स्लाइड स्कैनर का उपयोग करके चित्रित किया गया था और CaseViewer v.2.4 (3DHistech) का उपयोग करके छवियों का विश्लेषण किया गया था। माइक्रोग्लिया सक्रियण का आकलन करने के लिए, 3.2 मिमी क्षेत्र को कवर किया गया था, जिसमें प्रत्येक 100 m पर एक छवि का विश्लेषण किया गया था। छवियाँ 8.5× आवर्धन पर ली गईं, जिसमें मस्तिष्क की मध्य रेखा से 3 मिमी, एपिकोर्टिकल जांच स्थल का एक खंड विस्तृत था, जिसमें सीधे जांच स्थल के नीचे का क्षेत्र शामिल था।

इमेज प्रोसेसिंग

माइक्रोस्कोपी डेटा को माइक्रोग्लिया फेनोटाइप लक्षण वर्णन (पूरक चित्र) के लिए एक एल्गोरिदम का उपयोग करके छवि-संसाधित किया गया था। 13). माइक्रोग्लिअल सक्रियण का विश्लेषण एक कस्टम सेलप्रोफाइलर* (ब्रॉड इंस्टीट्यूट, v.3.1.9 से) का उपयोग करके किया गया था https://cellprofiler.org/) पाइपलाइन. सबसे पहले, EnhanceOrSuppressFeatures मॉड्यूल का उपयोग ट्यूबनेस एन्हांसमेंट विधि को लागू करके न्यूराइट्स जैसी फिलामेंटस संरचनाओं को बढ़ाने के लिए किया गया था। उन्नत छवियों से, कोशिकाओं को IdentifyPrimaryObjects मॉड्यूल का उपयोग करके खंडित किया गया था। कोशिकाओं के प्रारंभिक माप से पता चला कि उपयुक्त वस्तु व्यास सीमा 3-40 पिक्सेल थी। इस व्यास सीमा के बाहर या छवि के किनारे को छूने वाली वस्तुओं को त्याग दिया गया। कोशिकाओं को 50 पिक्सेल के अनुकूली विंडो आकार के साथ दो-वर्ग ओट्सू अनुकूली थ्रेशोल्डिंग रणनीति का उपयोग करके खंडित किया गया था। सेल वर्गीकरण के लिए आवश्यक गुणों की गणना करने के लिए IdentifyPrimaryObjects मॉड्यूल द्वारा पहचानी गई वस्तुओं को मीजरऑब्जेक्टसाइजशेप मॉड्यूल में इनपुट किया गया था। ClassifyObjects मॉड्यूल में, वर्गीकरण को आधार बनाने वाली श्रेणी को एरियाशेप निर्दिष्ट किया गया था, और एक्सटेंट को संबंधित माप के रूप में चुना गया था। कोशिकाओं को इस प्रकार वर्गीकृत किया गया था 'सक्रिय' या 'गैर-सक्रिय' उनकी विस्तार संपत्ति के आधार पर होता है, जो सेल के कब्जे वाले क्षेत्र और उसके बाउंडिंग बॉक्स के कब्जे वाले क्षेत्र का अनुपात है। इस वर्गीकरण दृष्टिकोण को इस तथ्य से युक्तिसंगत बनाया गया था कि सक्रिय माइक्रोग्लिया में बड़े सेल निकाय होते हैं और कोई प्रक्रिया नहीं होती है, और इस प्रकार उनके गैर-सक्रिय समकक्षों की तुलना में उनके बाउंडिंग बक्से का एक बड़ा हिस्सा होता है। अंत में, वांछित आंकड़ों की गणना और आउटपुट के लिए कैलकुलेटमैथ और एक्सपोर्टटूस्प्रेडशीट मॉड्यूल का उपयोग किया गया।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा सेट हैं n = प्रत्येक डिवाइस प्रकार के लिए 3 (पीआई-केवल इम्प्लांट (पीआई); उजागर माइक्रोफैब्रिकेटेड सोना (सोना) के साथ पीआई; और सभी समय बिंदुओं पर माइक्रोफैब्रिकेटेड सोना और ईजीएनआईटीई (ईजीएनआईटीई) के साथ पीआई) 6-सप्ताह के सोने के अपवाद के साथ जो कि है n = 2 एलिसा डेटा के लिए। देने के लिए प्रत्येक समय बिंदु पर विरोधाभासी गोलार्धों को संयोजित किया गया था n = 9 प्रत्यारोपण के 2 और 12 सप्ताह बाद और n = 8 प्रत्यारोपण के 6 सप्ताह बाद। डेटा का विश्लेषण ग्राफपैड प्रिज्म v.8 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके किया गया था। जहां उपयुक्त हो, तुकी के बहु-तुलना परीक्षण के साथ विचरण के दो-तरफ़ा विश्लेषण (एनोवा) का उपयोग करके सांख्यिकीय विश्लेषण पूरा किया गया; P < 0.05 को महत्वपूर्ण माना गया।

एलिसा

आरोपण अवधि के बाद, जानवरों को गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा समाप्त कर दिया गया। मस्तिष्क के ऊतकों को मस्तिष्क के दाएं और बाएं दोनों गोलार्धों से निकाला गया, तरल नाइट्रोजन में जमे हुए और अगले उपयोग तक -80 °C पर संग्रहीत किया गया। प्रोटीज और फॉस्फेटस इनहिबिटर (हॉल्ट प्रोटीज और फॉस्फेटेज इनहिबिटर कॉकटेल, थर्मो फिशर) युक्त एनपी-40 लाइसिस बफर (150 एमएम NaCl, 50 एम ट्रिस-सीएल, 1% नॉनिडेट पी40 विकल्प, फ्लुका, पीएच 7.4 पर समायोजित) का उपयोग करके ऊतक को लाइज़ किया गया था। इसके बाद ऊतक में यांत्रिक व्यवधान होता है (टिशूलाइज़र एलटी, क्यूजेन)। फिर नमूनों को 10 आर.पी.एम. पर 5,000 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया, और सतह पर तैरनेवाला को अगले उपयोग तक 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया। लीजेंडप्लेक्स रैट इन्फ्लेमेशन पैनल (कैटलॉग नंबर 740401, बायोलेजेंड), एक बीड-आधारित मल्टीप्लेक्स एलिसा किट, निम्नलिखित साइटोकिन्स की मात्रा निर्धारित करने के लिए चलाया गया था; IL-1α, IL-1β, IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-18, IL-33, CXCL1 (KC), CCL2 (MCP-1), ग्रैनुलोसाइट-मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक, इंटरफेरॉन-γ और ट्यूमर नेक्रोसिस कारक। किट को निर्माता के निर्देशों के अनुसार चलाया गया था, जिसमें 15 μl की निश्चित मात्रा में प्रोटीन लोड किया गया था। सतह पर तैरनेवाला के साथ ऊष्मायन के बाद मोतियों को बीडी FACSVerse प्रवाह साइटोमीटर पर चलाया गया, और LEGENDplex डेटा विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया।

तंत्रिका उत्तेजना

इंट्राफैसिकुलर इम्प्लांटेशन

सभी पशु प्रयोगों को यूरोपीय समुदाय परिषद निर्देश 2010/63/ईयू के अनुसार यूनिवर्सिटेट ऑटोनोमा डी बार्सिलोना की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। जानवरों को 22 ± 2 °C पर 12 h प्रकाश/12 h अंधेरे चक्र के तहत भोजन और पानी मुफ्त उपलब्ध के साथ रखा गया था। असंवेदनशील मादा स्प्रैग-डावले चूहों की कटिस्नायुशूल तंत्रिका (250-300 ग्राम, -18 सप्ताह) को शल्य चिकित्सा द्वारा उजागर किया गया था और टाइम इलेक्ट्रोड को 10-0 लूप धागे से जुड़ी एक सीधी सुई की मदद से कटिस्नायुशूल तंत्रिका में ट्रांसवर्सली प्रत्यारोपित किया गया था।⁴⁶. तंत्रिका फासिकल्स के अंदर सक्रिय साइटों की सही स्थिति सुनिश्चित करने के लिए प्रक्रिया की निगरानी एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत की गई थी (चित्र)। 4b). प्रयोगों के दौरान जानवरों के शरीर का तापमान हीटिंग पैड से बनाए रखा गया।

प्रति चरण 100 μs की एक निश्चित अवधि के द्विध्रुवीय वर्तमान दालों की ट्रेनों को लागू करके और अलग-अलग EGNITE के माध्यम से 0 s (उत्तेजक DS150, डिजिटिमर) के लिए 1 Hz पर 3 या 3 μA चरणों में 33 से 4 μA तक आयाम बढ़ाकर तंत्रिका उत्तेजना का प्रदर्शन किया गया था। माइक्रोइलेक्ट्रोड. इसके साथ ही, प्रत्येक मांसपेशी में रखे गए छोटे सुई इलेक्ट्रोड (13 मिमी लंबे, 0.4 मिमी व्यास, स्टेनलेस स्टील सुई इलेक्ट्रोड ए-03-14बीईपी, बायोनिक) का उपयोग करके जीएम, टीए और पीएल मांसपेशियों से सीएमएपी रिकॉर्ड किए गए थे।⁶². सक्रिय इलेक्ट्रोड को मांसपेशी पेट पर और संदर्भ को कण्डरा के स्तर पर रखा गया था। इलेक्ट्रोमोग्राफी रिकॉर्डिंग को प्रवर्धित किया गया (जीएम और टीए के लिए ×100, पीएल के लिए ×1,000; पी511एसी एम्पलीफायर, ग्रास), बैंड-पास फ़िल्टर्ड (3 हर्ट्ज से 3 केएचजेड) और 16 केएचजेड पर पावरलैब रिकॉर्डिंग सिस्टम (पॉवरलैब20एसपी, एडीइंस्ट्रूमेंट्स) के साथ डिजिटलीकृत किया गया।

डेटा विश्लेषण

प्रत्येक सीएमएपी का आयाम आधार रेखा से अधिकतम नकारात्मक शिखर तक मापा गया था। प्रयोग में प्रत्येक मांसपेशी के लिए प्राप्त अधिकतम सीएमएपी आयाम के लिए वोल्टेज शिखर माप को सामान्य किया गया था। प्रत्येक सक्रिय साइट के लिए एक चयनात्मकता सूचकांक (एसआई) की गणना एक मांसपेशी, सीएमएपी के लिए सामान्यीकृत सीएमएपी आयाम के बीच अनुपात के रूप में की गई थी।_i, और सूत्र एसआई का पालन करते हुए, तीन मांसपेशियों में सामान्यीकृत सीएमएपी आयाम का योग_i = nसीएमएपी_i/∑nसीएमएपी_j, न्यूनतम उत्तेजना वर्तमान आयाम पर जिसने न्यूनतम कार्यात्मक रूप से प्रासंगिक मांसपेशी प्रतिक्रिया प्राप्त की (उस मांसपेशी के अधिकतम सीएमएपी आयाम के संबंध में मांसपेशियों में से एक के लिए कम से कम 5% सीएमएपी आयाम के रूप में परिभाषित किया गया था जो पहले निर्धारित किया गया था)। फिर, किसी दिए गए प्रयोग में प्रत्येक तीन मांसपेशियों के लिए उच्चतम एसआई वाले सक्रिय स्थलों को प्रत्येक मांसपेशी के लिए एसआई के रूप में चुना गया था।

क्रोनिक इंट्रान्यूरल बायोकम्पैटिबिलिटी

पहले बताई गई प्रक्रिया का पालन करें^50,63, एनेस्थेटाइज़्ड स्प्रैग-डावले मादा चूहों की कटिस्नायुशूल तंत्रिका (250-300 ग्राम, -18 सप्ताह पुराना) उजागर किया गया था और ईजीएनआईटीई के साथ और उसके बिना विवो बायोकम्पैटिबिलिटी के लिए उपकरणों को कटिस्नायुशूल तंत्रिका की टिबियल शाखा में अनुदैर्ध्य रूप से प्रत्यारोपित किया गया था (n = 6–8 प्रति समूह)। संक्षेप में, तंत्रिका को 10-0 लूप धागे (एसटीसी-6, एथिकॉन) से जुड़ी एक सीधी सुई के साथ ट्राइफर्केशन पर छेद दिया जाता है; धागा मुड़ी हुई इलेक्ट्रोड पट्टी के तीर के आकार के सिरे को खींचता है। धागे को हटाने के लिए सिरे को काटा जाता है, और उपकरण को हटाने से बचने के लिए प्रत्येक हाथ के सिरे को थोड़ा मोड़ दिया जाता है। एक अनुदैर्ध्य प्रत्यारोपण को चुना गया क्योंकि यह तंत्रिका के अंदर विदेशी शरीर की प्रतिक्रिया के बेहतर अध्ययन की अनुमति देता है⁵⁰.

तंत्रिका और पशु कार्यात्मक मूल्यांकन

तंत्रिका चालन, अल्जीमेट्री और वॉकिंग ट्रैक लोकोमोशन परीक्षणों के माध्यम से अनुवर्ती पोस्टइम्प्लांटेशन के दौरान जानवरों का मूल्यांकन किया गया था⁶². चालन परीक्षणों के लिए, प्रत्यारोपित और विपरीत पंजों की कटिस्नायुशूल तंत्रिका को कटिस्नायुशूल पायदान पर सुई इलेक्ट्रोड द्वारा उत्तेजित किया गया था और पीएल मांसपेशी का सीएमएपी ऊपर के अनुसार दर्ज किया गया था। सीएमएपी की विलंबता और आयाम मापा गया। बीजगणित परीक्षण के लिए, चूहों को एक तार के जाल वाले प्लेटफॉर्म पर रखा गया था और एक इलेक्ट्रॉनिक वॉन फ्रे अलजेसीमीटर (बायोसेब) से जुड़ी धातु की नोक के साथ एक यांत्रिक गैर-हानिकारक उत्तेजना लागू की गई थी। प्रत्यारोपित बनाम विरोधाभासी पंजों की नोसिसेप्टिव थ्रेशोल्ड (ग्राम में बल जिस पर जानवरों ने पंजा वापस लिया) को मापा गया था। वॉकिंग ट्रैक परीक्षण के लिए, पिछले पंजों के तल की सतह को काली स्याही से रंगा गया और प्रत्येक चूहे को गलियारे में चलने के लिए छोड़ दिया गया। पैरों के निशान एकत्र किए गए, और कटिस्नायुशूल कार्यात्मक सूचकांक की गणना की गई⁶².

प्रोटोकॉल

2 या 8 सप्ताह के बाद, जानवरों को पीएफए ​​(4%) से सुगंधित किया गया, और कटिस्नायुशूल तंत्रिकाओं को काटा गया, पोस्टफ़िक्स किया गया, क्रायोप्रिजर्व किया गया और हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए संसाधित किया गया। एफबीआर के मूल्यांकन के लिए, कटिस्नायुशूल तंत्रिकाओं को क्रायोस्टेट (लीका सीएम15) के साथ 190-माइक्रोन-मोटे अनुप्रस्थ खंडों में काटा गया था। नमूनों को माइलिनेटेड एक्सॉन (न्यूरोफिलामेंट 97K, 200:1; विकासात्मक अध्ययन हाइब्रिडोमा बैंक लेबल करने के लिए एंटी-आरटी200) और मैक्रोफेज (एंटी-आईबीए-1, 1:500; वाको) के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ दाग दिया गया था। फिर, अनुभागों को माध्यमिक एंटीबॉडी गधा विरोधी माउस एलेक्सा फ्लोर 1 और गधा विरोधी खरगोश एलेक्सा फ्लोर 488 (555: 1, इंविट्रोजन) के साथ कमरे के तापमान पर 200 h के लिए ऊष्मायन किया गया था। टिबियल तंत्रिका में इम्प्लांट के मध्य भाग से प्रतिनिधि अनुभागों का चयन किया गया, एक डिजिटल कैमरा (डीएस-आरआई2, निकोन) से जुड़े एक एपिफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप (एक्लिप्स नी, निकोन) के साथ ली गई छवियां और इमेजजे सॉफ्टवेयर (राष्ट्रीय संस्थान) के साथ छवि विश्लेषण किया गया सेहत का)। टिबियल तंत्रिका के पूरे क्षेत्र में आईबीए-1-पॉजिटिव कोशिकाओं की मात्रा निर्धारित की गई थी और ऊतक कैप्सूल की मोटाई को प्रत्यारोपण के प्रत्येक पक्ष की निकटतम अक्षतंतु से औसत दूरी के रूप में मापा गया था।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा के सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए, हमने समूहों या समय के बीच अंतर के लिए बोनफेरोनी पोस्ट हॉक परीक्षण के बाद एक या दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया। ग्राफिकल प्रतिनिधित्व और विश्लेषण के लिए ग्राफपैड प्रिज्म सॉफ्टवेयर का उपयोग किया गया था। जब सांख्यिकीय महत्व पर विचार किया गया P <0.05।

रिपोर्टिंग सारांश

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• स्रोत: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01570-5