In vivo παρακολούθηση σωματιδίων εκπομπής ποζιτρονίων σε πραγματικό χρόνο (PEPT) και PET μεμονωμένων σωματιδίων – Nature Nanotechnology

Όλα τα αντιδραστήρια χρησιμοποιήθηκαν όπως ελήφθησαν, εκτός εάν δηλώνεται διαφορετικά. Όλα τα χημικά αγοράστηκαν από τη Sigma Aldrich εκτός από τα σφαιρίδια μέτρησης (CountBright Absolute Counting Beads, Invitrogen). ζ-Το δυναμικό μετρήθηκε με χρήση Zetasizer NanoZS90 (Malvern Instruments). Το μέγεθος και η μορφολογία των σωματιδίων μελετήθηκαν από το SEM σε μικροσκόπιο JEOL JSM 7800F Prime με ενσωματωμένο EDS για την παροχή της στοιχειακής ανάλυσης. Το μέγεθος των σωματιδίων προσδιορίστηκε με μέτρηση 50 ανεξάρτητων σωματιδίων. Η ραδιοφωνική στιγμιαία χρωματογραφία λεπτής στρώσης (ITLC) αναπτύχθηκε σε χαρτί χρωματογραφίας μικροϊνών γυαλιού Agilent Technologies εμποτισμένο με πυριτικό οξύ και αναλύθηκε χρησιμοποιώντας σαρωτή TLC Lablogic Flow-count και ανιχνευτή φωτοπολλαπλασιαστή σωλήνα BioScan B-FC-3200 (PMT) χρησιμοποιώντας το λογισμικό Laura. Η κινητή φάση ITLC αποτελούνταν από 0.175 M κιτρικό οξύ και 0.325 M κιτρικό τρινάτριο σε νερό, εκτός εάν αναφέρεται διαφορετικά. Τα ραδιενεργά δείγματα μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Capintec CRC-25R (Capintec) ή ένα LKB Wallac 1282 Compugamma CS (PerkinElmer) για το οποίο συλλέχθηκαν δεδομένα χρησιμοποιώντας λογισμικό EdenTerm. Πειράματα κυτταρομετρίας ροής πραγματοποιήθηκαν σε διαλογέα κυττάρων BD FACSMelody χρησιμοποιώντας λογισμικό BD FACSchorus. Οι εικόνες PET/CT ελήφθησαν χρησιμοποιώντας σαρωτή NanoPET/CT (Mediso), ανακατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Nucline v.0.21 και οι εικόνες αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας λογισμικό VivoQuant (έκδοση 3.5, InviCRO). Τα δεδομένα κατάστασης λίστας ελήφθησαν από ένα συγκεκριμένο εργαλείο λογισμικού MATLAB που αναπτύχθηκε από τη Mediso. Η αυτοραδιογραφία πραγματοποιήθηκε σε όργανο GE Amersham Typhoon.

Σύνθεση σωματιδίων πυριτίου μεγέθους κάτω του μικρομέτρου

Τα σωματίδια συντέθηκαν με τη μέθοδο Stöber. Αυτή η μέθοδος βασίζεται στην υδρόλυση και τη διαδοχική συμπύκνωση αλκοξειδίων του πυριτίου για την παραγωγή μονοδιασπαρμένων, σφαιρικών σωματιδίων πυριτίου²⁷. Ο ορθοπυριτικός τετρααιθυλεστέρας (TEOS) χρησιμοποιήθηκε ως πηγή πυριτίου, η αμμωνία ως καταλύτης βάσης και το χλωριούχο κάλιο ως ηλεκτρολύτης. Ένα διάλυμα TEOS σε αιθανόλη προστέθηκε συνεχώς σε ένα διάλυμα που περιείχε τον καταλύτη και τον ηλεκτρολύτη. Η τροποποίηση της αρχικής ποσότητας αντιδραστηρίου ή του ρυθμού προσθήκης παρέχει διαφορές στο μέγεθος σωματιδίων όπως αναφέρθηκε προηγουμένως²⁸. Εδώ, παρασκευάστηκαν δύο διαλύματα πριν από τη σύνθεση των σωματιδίων: Διάλυμα 1 που περιέχει 19.0 mmol TEOS σε 33.3 ml EtOH και Διάλυμα 2 που περιέχει 0.23 mmol KCl σε 9 ml αμμωνίας, 65 ml 6.75 ml EtOH και XNUMX ml EtOH.₂Ο. Για τη σύνθεση, το Διάλυμα 2 τοποθετήθηκε σε φιάλη με στρογγυλό πυθμένα των 250 ml που θερμάνθηκε στους 50 °C υπό ανάδευση στις 300 rpm για 15 λεπτά. Στη συνέχεια, το Διάλυμα 1 προστέθηκε στάγδην στο Διάλυμα 2 (ρυθμός παροχής 0.2 ml min^-1). Μετά την προσθήκη του διαλύματος 1, τα ληφθέντα σωματίδια καθαρίστηκαν με φυγοκέντρηση στους 18,300g για 3 λεπτά και πλύθηκε με EtOH πέντε φορές. Τέλος, το SiO₂ τα μικροσωματίδια ξηράνθηκαν υπό κενό.

Εμβολιασμός των σωματιδίων μεγέθους υπομικρομέτρου με σιλάνιο-PEG_5k

Ένα 20 mg ml^-1 διάλυμα σιλανίου-PEG_5k (Sigma Aldrich) σε EtOH 98% προστέθηκε σε ένα διάλυμα smSiP στα 5 mg ml^-1 σε EtOH 98% και 2.8% αμμωνίας. Το μίγμα αναδεύτηκε όλη τη νύχτα σε θερμοκρασία δωματίου και τα σωματίδια ανακτήθηκαν με φυγοκέντρηση στους 18,300°Cg για 3 λεπτά. Τέλος, τα σωματίδια πλύθηκαν τρεις φορές με απεσταγμένο νερό και ξηράνθηκαν υπό κενό όλη τη νύχτα. Τα διαλύματα πλύσης λυοφιλοποιήθηκαν όλη τη νύχτα και η ποσότητα μη συνδεδεμένου σιλανίου-PEG_5k σταθμισμένο για τον υπολογισμό της απόδοσης της αντίδρασης. Ένα 0.05 mg/ml^-1 λύση smSiP–PEG_5k σε απεσταγμένο νερό χρησιμοποιήθηκε για περαιτέρω αντιδράσεις ραδιοσήμανσης.

[⁶⁸Ga]GaCl₃

Το γάλλιο-68 εκλούστηκε ως [⁶⁸Ga]GaCl₃ από έναν Eckert και Ziegler ⁶⁸Ge/⁶⁸Γεννήτρια Ga σε υπερκαθαρό HCl (4 ml, 0.1 M) που κατασκευάζεται σύμφωνα με τις απαιτήσεις καλής κατασκευαστικής πρακτικής (ABX).

συγκέντρωση του [⁶⁸Ga]GaCl₃ έκλουση με ανταλλαγή κατιόντων

Η συγκέντρωση της έκλουσης πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη διάταξη που περιγράφεται στο Συμπληρωματικό Σχήμα. 1. Πρώτον, τα 4 ml του [⁶⁸Ga]GaCl₃ Η έκλουση φορτώθηκε σε φυσίγγιο Strata-X-C 33u (Phenomenex) και το έκλουσμα απορρίφθηκε. Στη συνέχεια, το φυσίγγιο πλύθηκε με 5 ml διαλύματος ακετόνης/0.1 Μ HCl (80:20) και το έκλουσμα απορρίφθηκε. Τέλος, το συμπυκνωμένο [⁶⁸Ga]GaCl₃ συλλέχθηκε προσθέτοντας 700 μl διαλύματος ακετόνης/0.05 μ HCl (98:2), ξηράνθηκε υπό Ν.₂ ροή και επαναιωρήθηκε σε 50 μl ρυθμιστικού διαλύματος HEPES 0.5 Μ, (ρΗ 4.9). Το Radio-TLC πραγματοποιήθηκε σε διάφορα στάδια για ποιοτικό έλεγχο. Το πρωτόκολλο διαρκεί περίπου 20 λεπτά παρέχοντας απόδοση ανάκτησης 86.2 ± 8.5%.

Ραδιοσήμανση σωματιδίων πυριτίου σε διαφορετικές συγκεντρώσεις με ⁶⁸Ga

Τα σωματίδια πυριτίου επαναιωρήθηκαν σε διαφορετικές συγκεντρώσεις (από 1 έως 0.002 mg/ml^-1) σε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 0.5 Μ (ρΗ 4.9). Στη συνέχεια, 50 μl του διαλύματος προστέθηκαν σε ένα σωλήνα αντίδρασης πριν από την προσθήκη του συμπυκνωμένου [⁶⁸Ga]GaCl₃ έκλουση σε 50 μl ρυθμιστικού διαλύματος HEPES 0.5 Μ (ρΗ 4.9). Οι αντιδράσεις διεξήχθησαν στους 90 °C για 30 min και πραγματοποιήθηκε ραδιο-TLC για τον υπολογισμό της ραδιοχημικής απόδοσης.

Μέτρηση συγκέντρωσης σωματιδίων με κυτταρομετρία ροής

Οι συγκεντρώσεις σωματιδίων υπολογίστηκαν με κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιώντας σφαιρίδια μέτρησης (CountBright Absolute Counting Beads, Invitrogen) ακολουθώντας τις οδηγίες του κατασκευαστή. Τα σωματίδια πυριτίου επαναιωρήθηκαν στα 0.05 mg/ml^-1, υποβλήθηκε σε υπερήχους για 10 λεπτά και πέρασε μέσω φίλτρου μεγέθους αποκοπής 10 μm (φίλτρο σύριγγας KX, νάιλον, 25 mm, 10 μm). Τα CountBright Absolute Counting Beads θερμάνθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου και στροβιλίστηκαν για 30 δευτερόλεπτα. Στη συνέχεια, 50 μl σφαιριδίων προστέθηκαν σε 300 μl σωματιδίων πυριτίου και το μίγμα αναδεύτηκε για 30 λεπτά για να ληφθεί ένα ομοιογενές διάλυμα. Το δείγμα εκτελέστηκε στο κυτταρόμετρο ροής και το κατώφλι διασποράς προς τα εμπρός (FSC) ορίστηκε ώστε να περιλαμβάνει τα σφαιρίδια και τα σωματίδια στο διάγραμμα γραμμικής διασποράς FSC έναντι γραμμικής πλευράς. Στη συνέχεια, η τάση του ανιχνευτή φθορισμού ρυθμίστηκε για τα σφαιρίδια μέτρησης και πραγματοποιήθηκε μια στρατηγική πύλης για την απομόνωση των σωματιδίων πυριτίας και των πληθυσμών των σφαιριδίων μέτρησης. Τέλος, σχεδιάστηκαν πύλες στα σωματίδια και τα απόλυτα σφαιρίδια μέτρησης και καταγράφηκαν 1,000 συμβάντα σφαιριδίων για κάθε δείγμα. Χρησιμοποιώντας αυτή τη στρατηγική, ο αριθμός των σωματιδίων στο διάλυμα υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας την ακόλουθη εξίσωση:

Ραδιοσήμανση 500 smSiP

Πεντακόσια smSiP προστέθηκαν σε 50 μl του συμπυκνωμένου [⁶⁸Ga]GaCl₃ έκλουση σε ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 0.5 μm pH 4.9. Στη συνέχεια, προστέθηκαν 5.6 μl πολυσορβικού 80 και το μίγμα θερμάνθηκε στους 90 °C για 30 λεπτά στις 900 σ.α.λ. σε θερμικό αναμικτήρα. Στη συνέχεια, σχεδιάστηκε ένα τελικό πρωτόκολλο καθαρισμού πολλαπλών σταδίων για την απομάκρυνση των μη αντιδράσεων/κολλοειδών ⁶⁸Ga. Πενήντα μικρολίτρα 10 mM EDTA προστέθηκαν και το μίγμα επωάστηκε για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Στη συνέχεια, τα σωματίδια φυγοκεντρήθηκαν για 3 λεπτά στους 18,300g, επαναιωρήθηκε σε 500 μl PBS που περιέχει 1 mM EDTA + 0.1% πολυσορβικό 80 και στροβιλίστηκε απαλά για 10  s. Τα σωματίδια φυγοκεντρήθηκαν ξανά, πλύθηκαν με διάλυμα 0.1 mM EDTA + 0.1% πολυσορβικό 80 σε PBS και στροβιλίστηκαν ήπια για 10 δευτερόλεπτα. Τέλος, τα σωματίδια φυγοκεντρήθηκαν και πλύθηκαν άλλες πέντε φορές με PBS + 0.1% πολυσορβικό 80 και επαναιωρήθηκαν σε 500 μl PBS. Η αντίδραση ραδιοσήμανσης παρακολουθήθηκε με ραδιο-TLC κατά τη διάρκεια των διαδοχικών σταδίων αντίδρασης για να αξιολογηθεί η παρουσία κολλοειδών (που μπορεί να συγχέονται με σωματίδια εάν δεν αφαιρεθούν σωστά), η ραδιοσήμανση των σωματιδίων και η καθαρότητα του τελικού προϊόντος. Το RLY υπολογίστηκε με σύγκριση μεταξύ της ποσότητας ραδιενέργειας στα σωματίδια και των υπερκειμένων μετά τα στάδια πλύσης.

Κλασματοποίηση

Για τη στρατηγική κλασμάτωσης, όγκοι από 0.5 μl έως 20 μl του ⁶⁸Ga-smSiP σε θεωρητική συγκέντρωση 1 σωματιδίου μl^-1 προστέθηκαν σε διαφορετικούς σωλήνες δείγματος σε βήματα του 1 μl (0.5, 1, 2, 3…) και προστέθηκε PBS για να φτάσει ο τελικός όγκος στα 50 μl. Στη συνέχεια, 37.5 μl από τον πρώτο σωλήνα μεταφέρθηκαν με πιπέτα σε ένα δεύτερο σωλήνα δείγματος, 25 μl του δεύτερου σωλήνα σε έναν τρίτο σωλήνα και τελικά 12.5 μl του τρίτου σωλήνα σε έναν τέταρτο σωλήνα. Αυτή η στρατηγική παρέχει τέσσερα σωληνάρια ανά δείγμα με τελικό όγκο 12.5 μl ανά σωληνάριο. Η ραδιενέργεια σε κάθε σωλήνα μετρήθηκε σε μετρητή γάμμα και οι τιμές υπολογίστηκαν σε kBq χρησιμοποιώντας μια καμπύλη βαθμονόμησης, για περαιτέρω σύγκριση και ανάλυση. Τα δείγματα που περιείχαν το μεγαλύτερο μέρος της ραδιενέργειας σε έναν μόνο σωλήνα υποβλήθηκαν σε υπερήχους για 30 δευτερόλεπτα σε θερμοκρασία δωματίου και υποβλήθηκαν σε ένα δεύτερο στάδιο κλασμάτωσης. Στη συνέχεια, τα δείγματα στα οποία βρέθηκε όλη η ραδιενέργεια σε έναν μόνο σωλήνα (με αμελητέα δραστηριότητα στους άλλους τρεις σωλήνες) χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω πειράματα in vivo/ex vivo.

Φανταστική απεικόνιση PET/CT

Ένα πείραμα απεικόνισης φάντασμα πραγματοποιήθηκε με ένα ⁶⁸Ga-smSiP. Χρησιμοποιήθηκε ένας σωληνίσκος για την παροχή του σωματιδίου σε ένα σωλήνα δείγματος για να αξιολογηθεί εάν ένα μεμονωμένο σωματίδιο θα μπορούσε να παραμείνει παγιδευμένο στη σωλήνωση του σωληνίσκου κατά τη χορήγηση. Εν συντομία, ο σωλήνας-φάντασμα τοποθετήθηκε στον σαρωτή nanoPET/CT με το άκρο του άκρου του σωληνίσκου προσαρτημένο στον σωλήνα. Μετά την έναρξη της λήψης PET, το σωματίδιο που επαναιωρήθηκε σε 100 μl PBS χορηγήθηκε με μια σύριγγα ινσουλίνης συνδεδεμένη στην αρχή του σωληνίσκου. Στη συνέχεια, ο σωληνίσκος πλύθηκε με 50 μl PBS για να διασφαλιστεί η παροχή του σωματιδίου στον σωλήνα-φάντασμα. Η λήψη PET πραγματοποιήθηκε για 2 h, ακολουθούμενη από τυπική αξονική τομογραφία.

Απεικόνιση in vivo PET/CT

Οι μελέτες απεικόνισης σε ζώα αναθεωρήθηκαν δεοντολογικά και πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με τους κανονισμούς του Υπουργείου Εσωτερικών του Ηνωμένου Βασιλείου για τα ζώα (Scientific Procedures) Act 1986 (ASPA) που διέπουν τα πειράματα σε ζώα. Η in vivo απεικόνιση διεξήχθη σε υγιή ποντίκια BALB/c ηλικίας 8 εβδομάδων. Τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με ισοφλουράνιο (2-3% σε οξυγόνο), διασωληνώθηκαν και τοποθετήθηκαν στο κρεβάτι του σαρωτή υπό αναισθησία. Το κρεβάτι θερμάνθηκε στους 37 °C με εσωτερική ροή αέρα για να διατηρηθεί το ζώο σε κανονική θερμοκρασία σώματος και ο ρυθμός αναπνοής παρακολουθήθηκε και διατηρήθηκε στα 60-80 αναπνοές λεπτά^-1 σε όλη τη σάρωση. Η διατήρηση του ελέγχου της θερμοκρασίας του ζώου είναι σημαντική, καθώς μια απροσδόκητη πτώση της θερμοκρασίας θα μπορούσε να οδηγήσει σε μείωση της ταχύτητας του σωματιδίου στο αίμα. Ενας ⁶⁸Ga-smSiP (n = 4) ή ⁶⁸Ga-smSiP–PEG_5k σωματίδιο (n = 2) χορηγήθηκε μέσω του σωληνίσκου σε 100 μl PBS, ακολουθούμενη από πλύση με 50 μl PBS μετά την έναρξη της λήψης PET (τρόπος σύμπτωσης 1:5· χρονικό παράθυρο σύμπτωσης 5 ms). Το PET καταγράφηκε για 2 h και στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε ημικυκλική αξονική τομογραφία. Η θερμοκρασία του σώματος και ο αναπνευστικός ρυθμός του ζώου παρακολουθούνταν καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας. Οι δυναμικές εικόνες PET/CT ανακατασκευάστηκαν χρησιμοποιώντας ανακατασκευή Tera-Tomo 3D (ενεργειακό παράθυρο 400–600 keV, λειτουργία σύμπτωσης 1:5, 20 επαναλήψεις και 1 υποσύνολο) σε μέγεθος voxel 0.4 × 0.4 × 0.4 mm³ και διορθώθηκε για εξασθένηση, διασπορά και αποσύνθεση. Μπορείτε να βρείτε δεδομένα κατάστασης λίστας για όλες τις αποκτήσεις PET/PEPT ⁶⁸Ga-smSiP στην αναφ. ²⁹ και για ⁶⁸Ga-smSiP–PEG_5k στο αναφ. ³⁰.

Παρακολούθηση σε πραγματικό χρόνο

Αρχικά, τα δεδομένα εξήχθησαν από τον σαρωτή σε μορφή λίστας (δηλαδή, μια μορφή με χρονική σήμανση και δείκτη κρυστάλλου για φωτόνια σύμπτωσης που ανιχνεύτηκαν). Εφαρμόστηκε ένας γεωμετρικός μετασχηματισμός για τη μετατροπή από κρυσταλλικούς δείκτες σε θέση σε μονάδες mm. Η μέθοδος Birmingham υπολογίζει επαναληπτικά το MDP από ένα υποσύνολο όλων των LoR. Αυτό το επιτυγχάνει απορρίπτοντας LoR που βρίσκονται πιο μακριά από μια καθορισμένη απόσταση από το MDP, καθώς είναι πιθανό να προκύψουν από ψευδή LoR, για παράδειγμα, LoR που μπορεί να προέρχονται από scatter. Το MDP βελτιώνεται με κάθε επανάληψη. ο αριθμός των επαναλήψεων ρυθμίζεται ουσιαστικά από το f-συντελεστής και σχετίζεται με τον συνολικό αριθμό των LoR που χρησιμοποιούνται για την εκτίμηση της τελικής θέσης σωματιδίων μέσα σε αυτό το υποσύνολο (για παράδειγμα, f-συντελεστής 0.5 σημαίνει ότι ο βρόχος επανάληψης θα τερματιστεί όταν παραμείνει το 50% των LoR στο υποσύνολο). Ο αριθμός των LoR που χρησιμοποιούνται σε ένα υποσύνολο μπορεί να μειωθεί για να βελτιωθεί η χρονική δειγματοληψία (τα υποσύνολα είναι διαδοχικά χωρίς επικάλυψη) με κόστος αύξησης της αβεβαιότητας στη θέση (περισσότερες λεπτομέρειες του αλγορίθμου βρίσκονται στο Parker et al.⁵) Η μέθοδος Birmingham χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση δεδομένων κατάστασης λίστας από το σαρωτή PET. Ένα προσαρμοστικό μέγεθος δείγματος χρησιμοποιήθηκε για την παρακολούθηση του σωματιδίου στα ποντίκια. Το μέγεθος του δείγματος ορίστηκε για να επιτευχθεί ισορροπία επαρκούς χρονικής δειγματοληψίας, ελαχιστοποιώντας παράλληλα τα σφάλματα τοποθέτησης. Ένα μέγεθος δείγματος μεταξύ 100 και 200 ​​LoR χρησιμοποιήθηκε στα αρχικά στάδια των σαρώσεων (<60 s από την έναρξη της σάρωσης), με f = 0.1, αποδίδοντας περίπου διαστήματα 1–5 s. Σε χρόνους σάρωσης >60 s, τα μεγέθη δειγμάτων κυμαίνονταν μεταξύ 1,000 και 2,000, τα οποία απέδωσαν χρονικά διαστήματα μεταξύ 30 s και 60 s ανάλογα με το πείραμα in vivo. Ο αριθμός των μετρήσεων που χρησιμοποιούνται για τον υπολογισμό του MDP (στην τελική επανάληψη) μπορεί να βρεθεί πολλαπλασιάζοντας το μέγεθος του δείγματος με το f- τιμή συντελεστή. Αυτές οι παράμετροι βασίστηκαν σε προηγούμενη εμπειρία και ενημερώθηκαν από προηγούμενες δημοσιεύσεις¹.

Η ταχύτητα λήφθηκε ως (sqrt{{v}_{x}^{2}+{v}_{y}^{2}+{v}_{z}^{2}}) όπου ({v}_{m}^{2}) είναι η ταχύτητα στο x, y και z κατευθύνσεις.

Ex vivo πρόσληψη οργάνων

Η πρόσληψη σε διαφορετικά όργανα αξιολογήθηκε με μέτρηση γάμμα. Μετά την in vivo απεικόνιση PET/CT, τα ζώα θανατώθηκαν με εξάρθρωση του τραχήλου της μήτρας και τα όργανα αποκόπηκαν και ζυγίστηκαν για μέτρηση ραδιενέργειας σε μετρητή γάμμα (LKB Wallac 1282 Compugamma CS). Τα δεδομένα εκφράστηκαν ως ποσοστό ενέσιμης δόσης (δόση στο όργανο/συνολική δόση που εγχύθηκε) ανά γραμμάριο ιστού (%ID g^-1).

Αυτοραδιογραφία

Η ραδιενέργεια στους πνεύμονες εντοπίστηκε με έναν ανιχνευτή ακτινοβολίας (EP15 probe, Morgan) και οι πνεύμονες κόπηκαν σε μικρά τμήματα με ένα νυστέρι μέχρι να ληφθεί ένα μικρό τμήμα ιστού με το ραδιενεργό σήμα. Ο ιστός καταψύχθηκε γρήγορα σε -80 °C ισοπροπανόλη. Αμέσως μετά την κατάψυξη, ο ιστός ενσωματώθηκε σε μέσο βέλτιστης θερμοκρασίας κοπής και κόπηκε σε κρυοστάτη σε φέτες των 20 μm. Κάθε φέτα ερευνήθηκε με τον ανιχνευτή μέχρι να βρεθεί η ραδιενεργή φέτα. Η προηγούμενη (κάτω από το φόντο), η ραδιενεργή και η επόμενη (κάτω από το φόντο) φέτα τοποθετήθηκαν σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα μικροσκοπίου Superfrost (Epredia). Ο υπόλοιπος ιστός που απομένει ήταν επίσης κάτω από το φόντο. Η αντικειμενοφόρος πλάκα μικροσκοπίου με τις τρεις τομές καλύφθηκε με φιλμ προσκόλλησης και αντιπαρατέθηκε σε μια πλάκα αυτοραδιογραφίας GE όλη τη νύχτα. Η πλάκα αναλύθηκε χρησιμοποιώντας GE Amersham Typhoon με ανάλυση 25 μm και ρύθμιση PMT 4,000. Η εικόνα της αυτοραδιογραφίας τοποθετήθηκε πάνω στην εικόνα του ιστού, δείχνοντας ένα σημείο ραδιενέργειας στη ραδιενεργή φέτα. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό, παρασκευάστηκαν πρότυπα σε διαφορετικές γνωστές δραστηριότητες, και το καθένα εντοπίστηκε ως κουιντέτο 1 μl σε χαρτί. Οι κηλίδες επωάστηκαν στο ίδιο κόσκινο αποθήκευσης φωσφόρου, BAS-IP MS (Πολλαπλών χρήσεων Πρότυπο) από την GE καθώς ποσοτικοποιήθηκαν τα μεμονωμένα σωματίδια. Η εικόνα αποκτήθηκε με το Amersham Typhoon 5 με το Control Software έκδοση 2.0 σε λειτουργία φωσφόρου με μέγεθος pixel 100 μm και ευαισθησία 4,000. Οι εικόνες ποσοτικοποιήθηκαν με το λογισμικό ImageQantTL v10.0-261 χρησιμοποιώντας την εργαλειοθήκη ποσοτικοποίησης γέλης. Οι κηλίδες διορθώθηκαν επιλέγοντας μια περιοχή αμέσως πριν ή μετά την κηλίδα ως σταθερό φόντο. Ο προκύπτων όγκος της κηλίδας χρησιμοποιήθηκε για τον υπολογισμό του Bq στο σωματίδιο με βάση την καμπύλη βαθμονόμησης.

Στατιστικές και αναπαραγωγιμότητα

Για ποσοτική ανάλυση, αναλύθηκαν τουλάχιστον τρία βιολογικά αντίγραφα εξαιρουμένων των in vivo δεδομένων του ⁶⁸Ga-smSiP–PEG_5k (n = 2). Τα δεδομένα αναλύθηκαν με συνηθισμένη μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA) με το τεστ πολλαπλών συγκρίσεων Dunnett και το Student's t-δοκιμή. ΕΝΑ P τιμή <0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική.

• SEO Powered Content & PR Distribution. Ενισχύστε σήμερα.
• PlatoData.Network Vertical Generative Ai. Ενδυναμώστε τον εαυτό σας. Πρόσβαση εδώ.
• PlatoAiStream. Web3 Intelligence. Ενισχύθηκε η γνώση. Πρόσβαση εδώ.
• PlatoESG. Ανθρακας, Cleantech, Ενέργεια, Περιβάλλον, Ηλιακός, Διαχείριση των αποβλήτων. Πρόσβαση εδώ.
• PlatoHealth. Ευφυΐα βιοτεχνολογίας και κλινικών δοκιμών. Πρόσβαση εδώ.
• πηγή: https://www.nature.com/articles/s41565-023-01589-8